毛木耳漆酶纯化及其部分漆酶特性的研究

对毛木耳AuriculariapolytrichaAP4的粗酶液进行PAGE电泳后发现含有三种漆酶同工酶,并且通过运用NativeSDS-PAGE获得三种漆酶的分子量大小分别约为:LacA(110kD);LacB(84kD);LacC(65kD)。对漆酶粗酶液通过硫酸铵分级沉淀和离子交换柱层析进行纯化,用SDS-PAGE证明获得纯化的单一漆酶LacB。LacB漆酶的反应的最适温度为30℃,最适pH为3.0。此酶氧化ABTS的Km值为6.64×10-mmol/L,金属离子对酶活的影响很大,其中5Ca2+,Mg2+,Zn2+,Na2+,Ag2+对漆酶LacB有明显的激活作用;Co2+,Hg2+,Fe3+,Fe2+,Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。LacB和其它真菌漆酶一样具有底物专一性不强的特点,并且LacB对RB亮兰染料有很好的脱色作用。     

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adusta WZFF．W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65．5％,其中LacA平均纯化了29．2倍,LacB纯化了5．1倍,LacC纯化了18．5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA：68．7kDa、LacB：80．2kDa、LacC：77．2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km,大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45．70℃,最适反应pH3．0-5．5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3．5—6．0稳定,LacA在pH5．0-9．0稳定,A1^3对LacA、LacC的酶活有促进作用,C1、Fe^3＋、Hg^2＋抑制LacA、LacC的酶活,Cu^2＋抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。     

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adustaWZFF.W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65.5%,其中LacA平均纯化了29.2倍,LacB纯化了5.1倍,LacC纯化了18.5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA:68.7kDa、LacB:80.2kDa、LacC:77.2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45-70℃,最适反应pH3.0-5.5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3.5-6.0稳定,LacA在pH5.0-9.0稳定,Al3+对LacA、LacC的酶活有促进作用,Cl-、Fe3+、Hg2+抑制LacA、LacC的酶活,Cu2+抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。     

黑木耳漆酶纯化及部分漆酶特性的研究

黑木耳漆酶研究可为漆酶的进一步分离纯化、基因克隆表达和大规模生产应用奠定基础。对黑木耳"黑29"菌株漆酶粗酶液进行硫酸铵分级沉淀后,通过Native SDS-PAGE电泳检测,存在3种漆酶LacA、LacB、LacC,分子量分别为60,34,19 kD。经硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel柱层析技术分离得一纯化成分LacC,纯化倍数7.60,酶活性回收4.28%。对LacC的pH、温度、金属离子和Km值等部分酶学性质进行研究发现,该酶氧化ABTS的Km值为1.18×10-6mol/L,催化氧化底物ABTS的最适pH为3.8,在pH 3.0~4.6表现出较强的稳定性;最适反应温度为55℃,低于50℃时有较好的热稳定性;金属离子Ag+对漆酶有激活作用,而Fe3+、Mn2+、Co2+则有抑制作用。     

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adusta WZFF.W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65.5%,其中LacA平均纯化了29.2倍,LacB纯化了5.1倍,LacC纯化了18.5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA：68.7kDa、LacB：80.2kDa、LacC：77.2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45-70℃,最适反     

黑木耳漆酶纯化的研究

目的:研究黑木耳(Auricularia auricula)“黑29”的漆酶纯化,为进一步酶学性质的开展、酶应用和酶基因克隆提供理论基础。方法:采用硫酸铵分级沉淀和柱层析技术分离蛋白,通过PAGE和SDS-PAGE电泳检测蛋白。结果:SDS-PAGE电泳检测发现粗酶液含三种漆酶,分子量大小分别为LacA(60kD)、LacB(34kD)、LacC(19kD);纯化后获得纯化的单一漆酶LacA、LacC组分。结论:得漆酶两个单一组分,为进一步漆酶研究奠定基础。     

不同真菌漆酶的性质研究

为了更好开发利用漆酶,用邻联甲苯胺法比较分析了彩绒革盖菌、毛栓菌和多孔菌在液体培养时的产酶曲线、酶作用的最适pH值、最适酶解温度及无机离子对酶活的影响。结果表明,不同漆酶产酶曲线不同,彩绒革盖菌和多孔菌,第9d达产酶高峰,峰值活力分别达395.6u/ml和412.2u/ml;毛栓菌,第11d达到产酶高峰,峰值本科活较不同真菌漆酶的性质研究高达554.6u/ml。漆酶性质有明显差别,最适酶解温度不同,彩绀革盖菌和多孔菌漆酶最适酶解温度为25℃;毛栓菌为30℃;最适酶解pH值有差异,彩绒革盖菌漆酶最适酶解,pH值为4.5,毛栓菌为4.0,多孔菌为4.2;不同离子对酶活的影响不同;K^、Zn^2 、对彩绒革盖菌所产漆酶有激活作用;K^ 、Zn^2 、Cu^2 对毛栓菌所产漆酶有激活作用;Mn^2 、Mg^2 对多孔菌所产漆酶有激活作用;Ag^ 、Fe^3 对三种菌所产漆本科均有明显抑制作用。     

毛栓菌漆酶诱导及部分特性研究

研究了碳源、氮源、愈创木酚、香兰素及培养条件对漆酶分泌的影响 ;结果表明 ,麦草粉作碳源、(NH4 ) 2 SO4 作氮源有利于漆酶的分泌 ,适宜浓度的愈创木酚和香兰素等对漆酶的产生有一定的作用 ;pH在 3 0 - 8 0的范围内对漆酶的分泌影响差别不大 ,培养温度、接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响。漆酶最适pH值为 4 0 ,最适反应温度为 30℃ ,K+ 、Zn2 + 、Cu2 + 离子可激活漆酶 ;而Ag+ 、Fe3+ 、Cl- 离子可抑制漆酶活性。漆酶的Km值为 1 81× 10 - 3mol L。     

彩绒革盖菌漆酶及多酚氧化酶活性研究

测定了彩绒革盖菌在ＰＤＹ液体培养基中的漆酶和多酚氧化酶活性。在３０℃,１１０ｒ／ｍｉｎ,恒温振荡培养条件下,漆酶第９ｄ达产酶高峰,最高酶活３９５．６ｕ;多酚氧化酶第１４ｄ达产酶高峰,峰值５４９．０ｕ;酶作用的最适酸碱度为：漆酶ｐＨ４．６,多酚氧化酶ｐＨ５．０;最适作用温度漆酶为２５℃,多酚氧化酶为３０℃;Ｋ＾＋、Ｚｎ＾２＋等离子对漆酶有激活作用,Ｍｎ＾２＋、Ｂａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋等离子对多酚氧化酶     

高酶活菌株的筛选及漆酶特性

通过Bavendamn氏反应和液体发酵实验筛选出漆酶高产菌株 ,并对其产酶条件和酶活性进行了研究。结果表明 71株实验真菌中有 64株Bavendamn氏反应呈阳性 ,且阳性菌株都具有漆酶活性 ;不同菌株产酶培养基最适碳源、氮源不同 ,采绒革盖菌以淀粉为碳源、干酪素为氮源 ,毛栓菌以麦草粉为碳源、硫酸铵为氮源 ,有利于酶的分泌 ;不同来源漆酶性质不尽相同 ,采绒革盖菌漆酶最适酶解温度为 2 5℃ ,最适酶解pH值为4.6,毛栓菌则分别为 3 0℃和 pH 4.0 ;K+ ,Zn2 + 等对 2种漆酶均有激活作用 ,Ag+ 则能明显抑制漆酶活性。     

白腐菌产漆酶的纯化及部分酶学性质

对白腐菌W 1产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、分子筛和离子交换层析进行纯化 .用SDS PAGE证明该酶的分子量大约为 6 2 4kD .等电聚焦电泳显示该酶的等电点为 3 5 .酶反应的最适温度为 5 0℃ ,最适pH值为 4 5 .此酶氧化DMP的Km 值为 3 84× 10 -5mol L .金属离子对酶活的影响很大 ,其中K+ 、Mn2 + 、Ag+ 对酶活有促进作用 ,Fe2 + 、Fe3 + 、Hg2 + 、Co2 + 、Ba2 + 等对酶活有明显的抑制作用 .酶对部分染料也有一定的脱色效果     

粗毛栓菌诱变菌株SAH-12漆酶的分离纯化及酶学性质研究

粗毛栓菌Trametes gallica诱变菌株SAH-12是通过紫外诱变选育所得的漆酶高产菌株,Active-PAGE分析表明SAH-12在高氮低碳无机盐培养液(LM3)中至少分泌3种漆酶同工酶(Lac1、Lac2、Lac3)。采用硫酸铵盐析、透析和Sephadex-G75分子筛层析从其培养液中分离纯化得到电泳纯的Lac1,纯化倍数6.54,酶活性回收59.7%。Lac1经SDS-PAGE验证为一条带,其表观分子量为61.5kDa。Lac1为一种糖蛋白,含糖量11.6%,等电点pI4.40,催化氧化底物ABTS的最适反应温度为60℃,最适pH为2.6,Km值为25μmol/L。Lac1在40℃(pH4.0)以下和pH1.5～5.0(28℃)范围内稳定。金属离子Fe2+、Ag+、Hg2+和Cr3+与抑制剂DTT、SDS、EDTA和DMSO对Lac1有抑制作用,其中Fe2+和DTT完全抑制酶活,而Cu2+对酶有明显激活作用,Mn2+、Zn2+对酶活影响不大。Lac1不仅可使一些合成染料明显脱色,而且对苹果汁多酚祛除也有较好效果。40℃用该酶(1U/mL)处理苹果汁5h,其多酚含量可降低40%。     

The influence of bacterial inoculants on the microbial ecology of aerobic spoilage of barley silage.

The aerobic decomposition of barley silage treated with two inoculants (LacA and LacB) containing mixtures of Lactobacillus plantarum and Enterococcus faecium was investigated over a 28-day period. Initially, yeast and bacterial populations were larger in silage inoculated with LacA than in silage treated with LacB or water alone (control). Differences in the succession of yeasts in silage treated with LacA were observed relative to the other two treatments. From silage treatment with LacA, Issatchenkia orientalis was the most prevalent yeast taxon over all of the sample times, and the filamentous fungus Microascus brevicaulis was also frequently isolated at later sample dates (> or = 14 days). In contrast, Saccharomyces exiguus was the most prominent yeast recovered from silage treated with LacB and water alone on days 2 and 4, although it was supplanted by I. orientalis at later sample times. Successional trends of bacteria were similar for all three treatments. Lactobacillus spp. were initially the most prevalent bacteria isolated, followed by Bacillus spp. (primarily Bacillus pumilus). However, the onset of Bacillus spp. prominence was faster in LacA silage, and Klebsiella planticola was frequently recovered at later sample times (> or = 14 days). More filamentous fungi were recovered from LacA silage on media containing carboxylmethylcellulose, pectin, or xylan. The most commonly isolated taxa were Absidia sp., Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Byssochlamys nivea, Monascus ruber, Penicillium brevicompactum, Pseudoallescheria boydii, and M. brevicaulis. The results of this study indicated that the two bacterial inoculants incorporated into barley at the time of ensilage affected the microbial ecology of silage decomposition following exposure to air. However, neither of the microbial inoculants effectively delayed aerobic spoilage of barley silage, and the rate of decomposition of silage treated with one of the inoculants (LacA) was actually enhanced.     

β-葡聚糖酶的分离纯化和特性研究

对里氏木霉所产β-葡聚糖酶粗酶液通过饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G-100 柱层析和DEAE-Sephadex A-50 柱层析进行纯化,比活提高14.60倍,活力回收6.62%。酶特性研究表明,最适温度和pH分别为60℃和5.0,在pH低于5.0时酶较稳定,酶的热稳定性在60℃以下。 Cu～2+、 Mn～2+ 、Mg～2+ 、Fe～3+ 和K+对酶有抑制作用, Zn～2+、Ca～2+、 Co2+和 Fe～2+ 有激活作用。