正庚烷代替二甲苯在拟南芥花药石蜡切片中的应用

二甲苯是应用最广的一种透明剂,常用于石蜡切片中的脱蜡和透明,但由于其对人体危害大,广大科研工作者一直在探寻更加安全的二甲苯代替物。以不同时期的拟南芥花药为试材,脱蜡和透明均由正庚烷代替二甲苯完成,其余步骤与常规石蜡切片相同。结果显示,正庚烷透明力强而迅速,既能与乙醇、封藏树胶混合,又能溶解石蜡,可作为合适的透明剂和脱蜡剂;组织经正庚烷处理后物理性质良好,浸蜡充分,切片时软硬适中,容易连续切片,而且厚薄均匀,摊片时能在42℃水中自然展开,平整而无皱褶;经甲苯胺蓝染色,细胞着色好,核质分明,结构清晰,组织形态保持完好,与二甲苯作透明剂的切片效果无明显区别。因此,正庚烷可以作为一种新的、相对安全有效的二甲苯替代物,应用于植物组织切片中。     

兔卵巢组织石蜡切片技术的改良

针对常规石蜡切片方法步骤繁多,耗时长,所用的二甲苯试剂对人体健康有较大毒害性的缺陷,探讨提高制作兔卵巢组织石蜡切片质量的方法。试验从脱水和透明环节进行技术改良,用正丁醇与无水乙醇混合剂取代常规的脱水剂和透明剂。该混合剂具有良好的脱水和透明作用。实验结果表明：通过该技术改良,镜下观察组织结构清晰可辨、颜色鲜艳、对比度好、层次分明,组织切片效果良好。试验改良技术的工艺简单,具有质优、省时、快捷和实用性较好等优点,有推广应用价值。     

生物组织石蜡切片的不脱蜡染色程序

石蜡切片法是生物学中应用最广泛的一种研究技术,沿用至今已一百余年,形成了一个基本固定的操作程序,为人们所普遍采用。常规的石蜡切片的染色,必须首先用二甲苯将石蜡溶去(即脱蜡),然后经下行的梯度酒精将切片下降至水(水化),用染料的水溶液进行染色;染色后又经上行梯度酒精逐级脱水,经二甲苯透明后用树胶封藏。此染色程序不仅手续较烦琐,而且切片在染色后脱水时容易褪色以及在此过程中组织里一些孤立分散的细胞如孢子、     

石蜡切片法中染色技术的改良

石蜡切片是观察动植物组织最直接有效的方法之一。本实验对水稻品种9311的叶片进行切片并用1%的番红—乙醇染液和1%的苯胺蓝—乙醇染液进行染色,结果显示此改良方法得到的组织比传统石蜡切片更完整,染色的效果比传统石蜡切片更清晰,并且利用此方法对水稻叶片进行制片,可以大量缩短制片后期复水及脱水的时间,提高工作效率。     

肌肽对大鼠缺血-再灌注损伤后热休克蛋白70及炎性因子表达水平的影响

目的通过失血性休克大鼠血液回输后造成的缺血-再灌注损伤（IRI）模型,研究肌肽对IRI后丙二醛（malondialdehyde,MDA）浓度、热休克蛋白70（HSP70）及炎性因子表达水平的影响。方法27只Wistar大鼠随机分成3组制作IRI模型,大鼠失血至40mmHg→雌持20min→放置1h→全血回输→维持3h→处死。大鼠处死后取血浆检测MDA浓度,取肝、脑、肺、心、肾、脾组织制作石蜡切片,通过免疫组化染色比较肝、脑、肺、心、肾、脾组织切片HSP70阳性细胞数;取肝组织提取RNA比较肝组织HSP70及炎性因子mRNA表达量。结果与再灌损伤组相比,肌肽治疗组肝、脑、肺、心、肾、脾组织切片HSP70阳性细胞数及HSPa5、HSPala mRNA表达量明显升高;MDA浓度及IL-6、TNF-α、NF-κB1、SCYA2、SCYA3 mRNA表达量明显降低。结论肌肽可以抑制IRI后MDA的生成、从mRNA水平促进HSP70的表达、抑制炎性因子mRNA的表达。     

FISH检测乳腺癌石蜡组织切片的酶消化时间的探究

目的:探讨在FISH实验中,乳腺癌石蜡组织切片的最适酶的消化时间.方法:收集42例手术切除的乳腺癌标本,经过固定、包埋和切片,其中12份标本的组织切片进行胃蛋白酶消化时间的优化实验,分别观察酶的消化时间为10分钟,15分钟,20分钟和25分钟对FISH结果的影响,随后在酶的优化条件对剩余30份组织切片继续杂交实验.结果:酶消化10min提示消化时间不足,酶消化15min提示消化时间适合,结果能很好地判读,而酶消化25min提示消化过度.对剩余的30份组织切片进行了18min的消化,杂交信号基本都能判读.结论:本实验条件下,石蜡包埋切片的最适消化时间在15-20min,不同实验室及不同的FISH处理过程会略有差异.所以建议FISH实验之前,应对酶的消化时间首先进行摸索.     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

基于改良石蜡切片技术的飞蝗胚胎浆膜表皮发育模式及形态变化观察

【目的】通过优化飞蝗Locusta migratoria胚胎石蜡切片制备技术,研究飞蝗胚胎发育时期浆膜表皮变化规律。【方法】通过优化飞蝗胚胎固定前处理、洗涤、脱水和透明等步骤,改良胚胎期石蜡切片制备技术;制备飞蝗胚胎发育第3-10天的石蜡切片,通过HE染色观察浆膜表皮发育规律;通过制备飞蝗发育第6-8天从卵孔端至卵尾端的纵切切片,观察飞蝗胚胎转旋时期的形态变化。【结果】飞蝗胚胎期石蜡切片技术优化后的操作步骤为:固定前Na Cl O预处理和打孔、洗涤30min、脱水30 min和透明30 min。通过此方法可获得表皮结构完整且清晰的胚胎期组织切片。在30℃条件下,飞蝗胚胎浆膜表皮及几丁质沉积形成于胚胎发育的第5天,在第8天时开始降解。飞蝗胚胎的转旋发生在第6-7天,伴随着浆膜和浆膜表皮的形态变化。【结论】本研究优化了飞蝗胚胎石蜡切片制备步骤,揭示了飞蝗胚胎浆膜表皮及胚胎转旋的发育模式,为昆虫胚胎发育的研究提供了基础资料。     

全自动密闭式脱水机试剂更换量化处理的探讨

在蜡块制作过程中 ,为了节约试剂 ,尽量用一批制剂多做蜡块与保证切片质量是一对矛盾 ,对此本文以如何能够既保证蜡块质量 ,又能节约试剂 ,通过 15 0次实验观察 ,总结出全自动脱水机试剂更换的量化处理方案。1 材料和方法材料 :组织来源为本院外科手术标本 ,组织块的取材厚度为 2～ 3mm。脱水机型号 :英国产SHANDON牌全自动密闭式脱水机 ,浸蜡用的石蜡其溶点为 5 6～ 5 8℃[1] 。试剂菜单 :AF液 1缸 (75 %乙醇 +10 %福尔马林 ) ,80 %乙醇 1缸 ,90 %乙醇 1缸 ,95 %乙醇3缸 ,无水乙醇 2缸 ,二甲苯 2缸 ,石蜡 4缸。程序 :组织块置脱水篮 ,…     

全自动密闭式组织脱水机在石蜡切片组织处理中的应用

全自动密闭式组织脱水机问世以来,以其安全、高效和良好的处理效果等优点,深受病理学、解剖学、动物实验和组织胚胎等技术人员的青睐。我科自2002年使用全自动密闭式组织脱水机处理组织以来,组织的处理效果明显改观,石蜡切片质量显著提高,现将应用经验简介如下。材料和方法1·材料1·1标本组织来源于我院手术的活检标本。1·2仪器和设备樱花VIP-E150型全自动密闭式组织脱水机为日本原装进口,附带不锈钢脱水篮1只,可容150个包埋盒;塑料包埋盒为国产。1·3试剂冰乙酸,甲醛原液,95%乙醇,无水乙醇,二甲苯,石蜡(58-60℃)均为国产试剂。AAF固定…     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

微波快速石蜡切片技术及其在肾穿刺活检中的应用

肾穿刺活检技术推动了肾脏病理的迅速发展,使肾脏病理学整体知识不断更新和提高,为临床诊断和治疗提供了大量的依据.由于肾脏活检组织标本小、切片薄,在固定、脱水、透明、浸蜡、切片及染色等方面均与常规石蜡切片有所不同,其技术要求较高.肾穿刺石蜡切片时间较长,相对制约了急性肾功能衰竭、急进性肾炎、肾移植急性排斥反应等急重症的快速诊断.     

用石蜡切片法制作内耳切片

用含盐酸的Ｂｏｕｉｎ氏液固定、脱钙软化，延长高浓度酒精的脱水时间，恰当掌握透明时间，注意耳蜗及半规管的包埋方向等方法制作内耳石蜡切片，获得了该器官主要组织结构较理想的切片。     

病理石蜡制片中试剂标准化操作的应用体会

近年来,随着经济的发展,蜡块制作由人工操作转向全自动密闭式脱水机的广泛使用,组织的固定、脱水、透明、浸蜡已进入恒温、恒湿化操作,有效地提高和稳定了病理制片的质量,但在各实验室石蜡HE制片中的试剂使用尚未统一实现标准化操作,影响了制作的蜡块质量稳定性。现将石蜡切片试剂标准化使用问题作如下探讨：     

几种实验动物组织石蜡制片的改进

根据多年教学经验 ,现将小鼠、大鼠、家兔等几种常见实验动物的石蜡制片的一些研究方法、出现问题及矫正方法做简要介绍。1)不同种属的动物组织 ,在脱水、透明、浸蜡时应尽量单独处理。有条件时同属的不同脏器组织最好也分批处理 ,以利于条件的掌握。2 )动物组织块较小、质地较细嫩 ,脱水时应从 5 0 %或 6 0 %乙醇较低浓度开始。据报道 ,脱水的低浓度酒精时间长短均可。低浓度酒精的时间应视材料的大小、被膜是否完整而定 ,各段时间不能操之过急 ,总的不能少于 3h。最好在 70 %酒精中过夜 ,否则在无水酒精中会引起组织骤然收缩 ,切片出现裂…     

小肠腺三色染色法

我们采用三色染色的方法对小肠肠腺细胞进行染色,杯状细胞、潘氏细胞、胞质和肠腺基膜呈现三种不同的颜色。细胞形态清晰,对比鲜艳,收到了理想效果。材料和方法1·材料人小肠为手术切除新鲜标本。10%甲醛固定24-48h,常规脱水,石蜡包埋。2·方法石蜡切片厚4-6μm,切片脱蜡,蒸馏水洗2m in,复合染液染3-5m in,70%乙醇分色,蒸馏水洗1m in,阿利新蓝染5m in,蒸馏水轻洗;0·2%光绿复染胞质、肠腺基膜20s;70%盐酸乙醇分色;梯度乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。3·染液配制(1)复合染液:1%伊红(1g伊红,70%乙醇100m l)40m l,2%偶氮桃红(2g偶氮桃红甲…     

人胎肝组织制作蜡块脱水时间的探讨

目的:探讨人胎肝组织制作蜡块的适宜脱水时间.方法:应用16印象例不同发育阶段的人胎肝组织标本,通过HE石蜡制作技术进行探索性研究肝组织适宜的脱水时间.结果:人胎肝组织蜡块内组织浸蜡充分,与周围石蜡紧密相连.经HE染色后,在光镜下可见肝组织结构清晰,肝细胞形态完整.结论:人胎肝组织适宜的脱水时间是优质蜡块制作的关键环节.     

植物材料快速石蜡制片方法

真空干燥箱已越来越广泛地应用于现代生物学研究领域。该文利用真空干燥箱温度和负压的可控制性能,将固定、脱水、透明和石蜡渗透等过程在真空干燥箱中进行,建立起一套可行的植物组织快速石蜡制片方法。结果显示,真空干燥箱的应用加速了多种试剂的渗透速率,提高了切片质量,达到了优化实验步骤、节省实验时间和减少室内有毒化学气体污染的目的。     

养殖半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的组织化学定位

目的研究半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POX)的分布及组织定位。方法取健康半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心组织进行固定,冰冻切片后进行酶组织化学染色和光密度定量统计分析。结果 ACP活性部位为棕色,主要分布于肝胰小叶间胆管和静脉,中肾肾小体中的肾小球和肾间质的肾小管,头肾和脾中的巨噬细胞以及心肌层中,在鳃中未见有分布;ALP活性部位被染为蓝紫色,主要分布于肝胰的胰腺腺泡内,中肾肾间质的肾小管,鳃的鳃丝血管和上皮细胞,脾静脉的管壁处和椭圆体,心外膜和肌膜上以及头肾的血窦腔内皮;POX活性部位被染为茶褐色,主要分布于肝胰小静脉和肝血窦内的血细胞,中肾肾间质的血细胞,鳃的鳃丝血管、鳃小片血窦和上皮细胞,头肾、脾内的血细胞以及心的心肌层和血细胞中。ACP活性由大到小依次为心、肝胰、脾、中肾、头肾;ALP活性由大到小依次为中肾、鳃、头肾、脾、心、肝胰;POX活性由大到小依次为脾、头肾、肝胰、中肾、鳃、心。结论 ACP、ALP和POX在半滑舌鳎6种组织中分布特点不同,其活性大小在不同组织中有显著差异。     

在蛙胚切片中应用正丁醇透明和苏木精整染的方法介绍

在教学上,常用蛙卵做脊椎动物发生的观察材料。由于蛙胚切片染色方法繁琐,卵黄易破碎,往往得不到满意的切片,因此,我采用正丁醇脱水,取得较满意的效果。这种方法的优点有二:(1)能与水、酒精及石蜡互溶,故脱水之后可不经过二甲苯透明而直接进行石蜡浸透包埋。(2)脱水时很少引起组织收缩和变脆。采用苏木精-伊红整染,其特点是颜色鲜艳,无过染现象。 1.取材于3—5月到郊外池塘或稻田采集材料(蟾蜍或青蛙卵),一般在上午八时左右采集,此时的蛙胚处于囊胚期,以后各期可在双筒解剖镜下进行鉴别,选择所需的发育时期的胚胎,分别进行固定。 2.固定用Tellyesniczky氏液(重铬酸钾0.5克、冰