制备高纯度、高产率总RNA的简易方法1)

异硫氰酸呱和氯化物为最有效的蛋白质变 性剂w10 Cox首先用肌盐氯化物提取RNA['10 Chirgwin用强变性齐U和异硫氰酸呱从富含RNuse 的组织细饱中提取完整RNA [410 Han等 人证明异硫氰酸肌在低温下提取RNA是有效 的，并省去了超速离心['1o Feramisco提出了结 合呱盐与热酚来分离RNA的方法［[61。本文报 道的是一种新的、快速有效的、结合了异硫氰酸 狐、氯仿和酚提取RNA 的方法。它不同于 Feramisc。的肌剖：热酚法的地方是采用了一次 性抽捉，在4小时内制备出高纯度、高产率而未 降解的RNA，由于省略了肌盐一Cscl超速离心 步骤，此方法既适合于从大样本（30g）组织也 适合从微量样本（3mg组织或106个细胞）中分 离RNA     

重组RNA技术

重组DNA技术已成为生物工程的重要支柱。利用这一技术人们已经开始以工业的规模生产对人类有重要意义的蛋白质。但目前应用重组DNA技术还存在一些难以解决的困难:生产成本昂贵;某些产品的安全性存在一些问题;真核重组DNA分子在现有转录系统中难以表达或表达效率不够理想。然而近年来出现的重组RNA技术将会避免重组DNA技术应用上存在的问题。具有区别于重组DNA突出的特点。     

tRNA研究的近况

转移核糖核酸(tRNA)初期通称为可溶性核糖核酸(sRNA),它的发现已有三十余年的历史。tRNA在蛋白质生物合成的过程中起着关键性的作用,是将核酸的遗传讯息转译成蛋白质一级结构的生物大分子化合物,因此受到重视。早期的研究工作,偏重于从生物材料中分离纯化得到对一种氨基酸专一的纯tRNA,并测定其一级结构(核苷酸排列顺序)。1965年R.W.Holley实验室首先测定了酵母丙氨酸tRNA的一级结构,并因此获得了1968年诺贝尔生理学医学奖。自此以后tRNA的研究一直受到生物化学,分子生物学,分子遗传学等工作     

RNA—蛋白质相互作用研究的进展

分析原核生物中RNA与蛋白质的相互作用,给了我们很多的信息和启示。到目前为止,大肠杆菌核糖体是研究最多的RNP复合物,而大肠杆菌中的谷氨酰胺基tRNA合成酶和相关的tRNA是目前唯一制成RNA一蛋白质共结晶,并揭示其结构的RNA一蛋白质复合物。最近在真核生物系统中的研究不仅发现了由RNA-蛋白质结合介导的基因表达调控的机理,而且鉴定出结合RNA的蛋白家族中存在有共同的短段(Common motifs)。本文拟对目前研究的饶有兴趣的5SRNA-结合蛋白复合物以及RNP-致序列进行阐述和讨论。     

RNA在生物学的重要地位及其作为常规治疗药物的研究进展

20多年来的研究发现,RNA除了具有如tRNA、rRNA参与蛋白质生物合成的基本功能外,细胞内还存在许多种类的RNA,它们执行着不同的功能,在细胞内生物化学反应及机体发育调控过程中发挥着重要作用。正因为RNA功能多样性,在体内、体外开展的众多实验表明,RNA或其修饰形式可以抑制基因的表达。该文将探讨RNA在常规基因治疗中的研究。     

栝楼核糖核酸酶的性质研究

关于栝楼核糖核酸酶的性质已经研究.它对核糖核酸和多聚尿嘧喧核苷酸所显示的酶活性,有很大的相似性:(1)栝楼核糖核酸酶的最适度应pH在5左右;(2)稳定的pH范围在5-12之间;(3)最佳反应温度为55℃左右;(4) 热稳定性:在15分钟内,60℃以下酶活性基本稳定,在65℃左右时大约有50%的活性丧失;(5)金属离子中,除CU~(2+)和Ag~+有明显的抑制作用外、一般作用不明显.另外,酸对其它合成的多聚核苷酸的水解作用,显示有碱基特异性;对双链RNA(CPV RNA)也显有活性.实验中未发现该酶有磷酸单酯酶的活性及降解DNA的活性.因此,该酶可能是一种具有碱基特异性的核糖核酸酶.     

二种简便迅速分离 RNA 的方法

RNA是基因表达的第一产物,但有些病毒中(如RNA病毒、反转录病毒)的遗传物质就是RNA。近年来的研究表明,某些RNA还有酶的功能,因此RNA在基因表达过程中和在生命起源的研究方面均占有重要地位。随着对RNA研究工作的迅速开展,分离RNA的方法也不断改进和完善。     

肝素的定量法

根据核糖核酸酶水解核糖核酸时,在300nm波长处光吸收值下降的速率被肝素抑制之特点,用已知量肝素对抑制程度进行定量,制得标准检量线,从而测得未知量的肝素含量．此法简捷方便,一次能测定多个样品．     

核糖核酸干扰(RNAi)在生物医学研究中的应用

核糖核酸干扰(RNAi)是指一个由双链RNA诱导具有相同碱基序列的靶标RNA降解的现象,它是沉默基因表达的一个十分有效的手段．RNAi导致基因沉默的机制可分为以下两步：首先由核酸酶Dicer切割长的双链RNA形成小片段碱基(19—25)的siRNA．然后,这些siRNA组成一个RNA诱导沉默复合体(RISC),并且siRNA被一个内源激酶磷酸化,双链siRNA打开,让反义RNA引导RISC至其目的信使RNA(mRNA)．从而使其目的mRNA内切降解．RNAi技术可以应用到许多生命科学研究方面,如功能基因组以及医药研究．同时讨论了RNAi的一些最新进展如siRNA的设计和导入细胞的方法．