100 种中草药水提物体外抑杀无乳链球菌的药效研究

无乳链球菌(Streptococcus agalactiate)对罗非鱼产业以及人类健康有重要威胁, 为了减少抗生素抑杀无乳链球菌用量, 试验了100 种中草药水提物体外抑杀罗非鱼无乳链球菌的药效。结果表明, 黄连、大黄、黄柏、乌梅、五倍子、防己、公丁香、天花粉、白头翁、鱼腥草和苏木水提药原液有明显抑菌效果, 但将这些中药水提药液的pH 值调至中性后, 大部分中草药抑菌效果显著下降 (p<0.01), 甚至消失, 仅黄连、公丁香、五倍子和防己药液在调节pH 值后还有显著抑菌效果。采用二倍梯度稀释法测定pH 值调至中性后仍有抑菌作用的4 种中草药的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),发现黄连的MIC 和MBC 值分别为3.125 mg·mL–1 和6.250 mg·mL–1, 效果最好; 五倍子的MIC 和MBC值均为6.250 mg·mL–1, 效果其次; 防己的MIC 和MBC 值均为25.000 mg·mL–1; 公丁香的MIC 和MBC 分别为50.000 mg·mL–1和100.000 mg·mL–1。     

乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用

【目的】分析乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用。【方法】基于双层平板打孔法,通过测量抑菌圈大小来检测乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑菌作用;然后分别采用高效液相色谱法和4-氨酰安替比林法检测乳杆菌代谢产物中的有机酸和H2O2含量;最后,检测乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。【结果】对化脓性链球菌的抑菌效果以植物乳杆菌KLDS1.0667最好,副干酪乳杆菌KLDS1.0342-1次之,瑞士乳杆菌KLDS1.0203抑菌效果最差;乳酸和乙酸产量KLDS1.0667>KLDS1.0342-1>KLDS1.0203;H2O2产量KLDS1.0203>KLDS1.0667>KLDS1.0342-1。在抑菌试验中,乳杆菌的发酵上清液经去除H2O2处理后抑菌圈直径都减小;将发酵上清液的p H调至7.0后均检测不到抑菌圈。结果表明,乳杆菌代谢产物中对化脓性链球菌起抑制作用的主要物质为有机酸和H2O2,其中乳酸是产生抑菌作用的最主要物质。乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.28、0.64和0.008 g/L,对化脓性链球菌的最小杀菌浓度(MBC)分别为5.12、2.56和0.032 g/L。【结论】乳杆菌可利用其代谢产物对化脓性链球菌产生抑制作用,主要抑菌物质为有机酸和H2O2。     

没食子鞣质对变形链球菌生长抑制的实验研究

目的研究没食子鞣质对浮游状态和生物膜状态下变形链球菌生长抑制的作用,探讨药物的防龋功效。方法采用纸片扩散法测定不同浓度没食子鞣质溶液对变形链球菌的抑菌圈大小,采用试管稀释法测定没食子鞣质对变形链球菌生长的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)值大小,用半定量可见光测定A值的方法测定生物膜最低抑菌浓度(MBEC)值。结果没食子鞣质对变形链球菌的生长具有明显的抑制作用,经液体稀释法实验测定,没食子对变形链球菌的MIC为4 mg/m L,MBC为16 mg/m L,经半定量可见光测定A值的方法测定没食子鞣质对变形链球菌单菌生物膜生长的MBEC值为8 mg/m L。结论没食子鞣质对变形链球菌有抑制作用。     

丹皮酚对变形链球菌生物膜影响的体外研究

目的测定丹皮酚对变形链球菌的抑菌作用;共聚焦显微镜观察丹皮酚对变形链球菌生物膜结构和活性的影响。方法梯度法测定丹皮酚对变形链球菌的MIC(最小抑菌浓度)、MBC(最小杀菌浓度);体外构建变形链球菌生物膜模型,共聚焦显微镜观察不同浓度丹皮酚对变形链球菌生物膜作用后形态结构的影响并进行红绿荧光定量分析其活性变化。结果丹皮酚对变形链球菌的MIC为6.25mg/mL,MBC为25mg/mL;激光共聚焦显微镜观察丹皮酚对变形链球菌生物膜作用后其生物膜结构变稀疏,细菌链变短,生物膜活性也随丹皮酚浓度的提高而逐渐降低。结论丹皮酚对变形链球菌和变形链球菌生物膜结构及其活性均具抑制作用。     

大蒜素抗变异链球菌的致龋效果

目的研究大蒜素对口腔变异链球菌生长及其菌斑生物膜粘附的抑制作用。方法二倍稀释法梯度稀释测最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),将MIC以上2个梯度浓度对应的培养物涂布于BHI培养基上进行次代培养获得最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);酶标仪测A值观察不同浓度大蒜素抑菌效应;抑制产酸试验观察抑制细菌产酸效应;结晶紫法研究亚抑菌浓度提取物对变异链球菌粘附能力及生物膜总量的影响;采用激光共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察常态牙菌斑生物膜生长过程中及药物处理后牙菌斑生物膜中死菌和活菌的构成,研究其对牙菌斑生物膜结构和活性的影响。结果抑菌试验中,得到大蒜素MIC为12.8 mg/L,MBC为25.8 mg/L。MIC及亚抑菌浓度抑菌试验显示均有一定的抑菌性,抑制率为2.17%～67.12%,并且抑菌性与浓度梯度成正相关。产酸试验显示24 h内大蒜素明显抑制细菌产酸(P0.01),细菌粘附试验结果显示大蒜素在MIC时生物膜的生成速度最慢,生物膜的总量最低(P0.01)。共聚焦荧光显微镜可见大蒜素组随药物浓度增加,菌斑生物膜较薄,绿色的活菌及团块明显减少,抑制生物膜的生长。结论大蒜素对变异链球菌生长、产酸与粘附有一定抑制作用。     

黄连素对变异链球菌抑制作用的体外研究

目的分析黄连素对体外变异链球菌生长、产酸、粘附的影响,探讨其防龋作用。方法采用微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度(MIC)的测定;然后通过试管粘附法测定不同浓度药液对变异链球菌粘附作用的影响;最后计算不同浓度药液作用24h后pH值的变化。结果黄连素对变异链球菌的MIC为1.25mg/mL,MBC为5.00mg/mL。实验组对变异链球菌的粘附及产酸的抑制作用随着药物浓度的增加而增强,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论黄连素可抑制体外变异链球菌的生长、产酸及粘附。     

23种中草药的体外抗菌活性筛选研究

为考察中草药抗菌物质基础筛选出活性提取物,该研究通过80%乙醇冷浸和95%乙醇回流提取制备23种中草药的提取物,采用琼脂扩散法测量抑菌圈直径,用微量液体培养基倍比稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal/fungicidal concentration,MBC/MFC),并测定了提取物对临床4种常见病原菌体外抗菌活性。结果表明:紫珠草、千斤拔、黄龙尾等9种中草药对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性,其MIC/MBC值除个别菌是12.5 mg·mL~(-1)外,其他都在0.09～3.12 mg·mL~(-1)之间;千斤拔、大红袍、过江龙等5种中草药对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性,其MIC/MBC值在3.12～12.5 mg·mL~(-1)之间;紫珠草、千里光、石楠等13种中草药对大肠埃希菌有较强的抑菌活性,其MIC/MBC值在0.09～6.25 mg·mL~(-1)之间;八角对白色念珠菌有较强抑菌活性,其MIC/MFC值在0.78～12.5 mg·mL~(-1)之间。23种中草药的抗细菌活性较好,尤其是千斤拔、大红袍、过江龙、八角、黄药子对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌都具有较好的抑菌活性,具有广谱抗菌活性;但对真菌抑菌效果不明显,仅有八角对白色念珠菌有抑菌活性。此外,提取溶剂浓度、提取温度和提取时间对中草药的提取率和活性均有影响,冷提稍优于热提。     

四川宜宾七种中药提取物体外抗菌活性研究

用肉汤二倍稀释法和琼脂平板培养计数法,研究四川宜宾七种中药的提取物对大肠杆菌、沙门氏菌和巴氏杆菌的体外抑制作用.结果表明：黄柏提取物的抗菌活性最强,最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)为15．6~125 mg·mL-1,最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC)为31．25~250 mg·mL-1;栀子提取物抗菌活性次之,MIC 为62．5~125 mg·mL-1,MBC 为125~＞250 mg·mL-1;佛手提取物有较稳定的抗菌活性,MIC均为125 mg·mL-1,MBC为125 mg·mL-1和250 mg·mL-1;姜黄、杜仲、何首乌、细毡毛忍冬的提取物抗菌活性相对较差,大部分 MIC≥250 mg·mL-1.说明四川宜宾的黄柏和栀子的提取物抗菌活性较强,佛手提取物抗菌活性较稳定,有进一步研究的价值.     

具有拮抗无乳链球菌能力乳杆菌的筛选及抑菌特性

目的从罗非鱼(Nile tilapia)肠道中筛选出具有抑菌作用的乳杆菌,测定其对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的抑菌效果,分析乳杆菌抑制无乳链球菌的有效成分,并利用分子生物学手段对筛选的乳杆菌菌种进行鉴定。方法采用双层平板法对具有抑制无乳链球菌的乳杆菌进行筛选,牛津杯法对抑菌效果进行测定,酶蛋白敏感性测定、热处理、有机酸处理等方法分析抑菌活性物质有效成分,16S rDNA分子标记对乳杆菌进行鉴定。结果从罗非鱼肠道中筛选出14株乳杆菌,其中菌株RS2对无乳链球菌具有明显的抑菌效果;不同蛋白酶种类、pH处理对乳杆菌无细胞培养液均有不同的影响,经80℃处理的乳杆菌无细胞培养液,其抑菌效果未显著改变(t=0.169 2,P=0.873 8)。此外,此株乳杆菌对猪霍乱沙门菌(Salmonella choleraesuis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺菌(Shigella sp.)等病原菌具有良好的抑制作用。经鉴定,该乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。结论从罗非鱼肠道中分离得到的植物乳杆菌菌株RS2对无乳链球菌等致病菌具有一定的抑制作用,推断其抑菌有效成分为细菌素类物质。此项研究对开发抗生素替代产品,提高食品的品质具有一定价值。     

黄斑蓝子鱼皮肤黏液对刺激隐核虫及一些病原菌的抑杀作用

黄斑蓝子鱼(Siganus oramin)具有天然抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)能力, 并从其血清中分离纯化了一种抗虫蛋白。以黄斑蓝子鱼皮肤黏液为对象, 研究了其对刺激隐核虫(C. irritans)、多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei brucei)及一些病原菌的杀灭和抑制效果。结果显示: 黄斑蓝子鱼黏液对刺激隐核虫、多子小瓜虫和布氏锥虫均具有明显的杀虫效果, 黏液蛋白对3种寄生虫的最低杀寄生虫浓度(Minimum Parasiticidal Concentration, MPC)分别为4.0、5.0和3.0 mg/mL。显微镜观察发现, 刺激隐核虫和多子小瓜虫的幼虫在经过黄斑蓝子鱼黏液作用后, 均出现纤毛脱落、虫体肿胀、外膜破裂和内容物泄漏等现象。黏液抑菌活性实验结果表明, 除大肠杆菌(Escherichia coli)外, 黄斑蓝子鱼皮肤黏液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)、星形诺卡氏菌(Nocadia asteroides)和美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.)皆有明显的抑菌效果。在最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)测定中, 黄斑蓝子鱼黏液对金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、海豚链球菌、溶藻弧菌、温和气单胞菌和副溶血弧菌的MIC 分别为0.16、0.16、0.08、0.63、0.63和0.63 mg/mL。黄斑蓝子鱼皮肤黏液对小麦赤霉菌(Gibberella saubinetii)和黑曲霉菌(Aspergillus niger)没有明显抑菌作用。       

23种中草药体外抗菌活性筛选

为研究23种中草药的80%乙醇提取物对4种临床常见致病菌的体外抗菌活性,该研究用琼脂扩散法测定抑菌圈直径,微量肉汤培养基倍比稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal/fungicidal concentration,MBC/MFC)。结果表明:滇龙胆草、金丝梅、溪黄草等16种提取物对金黄色葡萄球菌的MIC/MBC值在0.19～3.12 mg·mL^-1之间,有很强的抑菌活性。头花蓼、淡竹叶、半枝莲等14种提取物对铜绿假单胞菌的MIC/MBC值在1.56～6.25 mg·mL^-1之间,有较强的抑菌活性。除槐角外,其余提取物对大肠埃希菌的MIC/MBC值均在3.12～12.5 mg·mL^-1之间,有较强的抑菌活性。黄藤、藿香提取物对白色念珠菌的MIC/MFC值在0.78～6.25 mg·mL^-1之间,有较强的抑菌活性; 滇龙胆草、金丝梅、水杨梅、苦参、胡椒、赶黄草、荜菝、淡竹叶提取物对白色念珠菌的MIC/MFC值在6.25～12.5 mg·mL^-1之间,也具有一定抑菌活性。因此,所选中草药的抑菌效果均较好,大部分均具有广谱抗菌活性。其中,藿香、黄藤的提取物对白色念珠菌抑菌活性较强,金丝梅、水杨梅、仙鹤草、苦参、赶黄草、溪黄草的提取物对金黄色葡萄球菌抑菌活性很强,这几种中草药可为进一步追踪其活性单体化合物和作用机制提供一定的参考。     

银杏外种皮提取物对病原菌Cylindrocladium colhounii的抑制作用

采用菌丝生长抑制法,研究了银杏外种皮3种不同提取物对病原菌(Cylindroc ladium col-hounii)的抑制作用并测定了这些提取物的MIC/MBC。结果表明,在相同实验天数内,抑菌效果(最小抑菌率)由高到低依次为银杏外种皮乙醇提取物(37.4%)、石油醚提取物(23.7%)和新鲜外种皮汁液(18.4%)。当提取物的浓度提升到一定程度时,三者的抑菌率均可达到100%;三种提取物的MIC/MBC分别为:86.25/86.25,172.5/276,293.25/345mg·mL-1。可见银杏外种皮具有明显抑制该病原菌生长的作用,且抑菌成分在乙醇中的溶解度较大。这为进一步研究该抑菌成分乃至生物农药的开发奠定了基础。     

一种可快速检测食品中酿脓链球菌和无乳链球菌的RPA方法的建立

为了实现食品中酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)和无乳链球菌(S.agalactiae)快速、高效检测,本研究建立了一种同时快速检测食品中这两种细菌的方法.本研究基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)原理,选择酿脓链球菌致热外毒素B基因(speB基因)和无乳链球菌表面免疫蛋白基因(SIP基因)的保守序列分别设计RPA引物和探针,分析检测方法的特异性和灵敏性,采用模拟污染实验验证检测效果.结果表明,检测时间为20 min;酿脓链球菌和无乳链球菌分别对speB和SIP基因检测结果为阳性,其他链球菌和非链球菌检测结果为阴性;方法对speB和SIP基因的检出限均可达100 copies/反应;酿脓链球菌和无乳链球菌低菌量污染的样品增菌液,在经过短暂几小时的增菌培养后可被检出阳性信号.本研究建立的检测方法快速、准确、灵敏,可同时作为食品中酿脓链球菌、无乳链球菌的快速检测方法,具有较强的应用价值.     

茶多酚-柠檬提取物混合液对变形链球菌生长与黏附影响的研究

目的探讨茶多酚与柠檬提取物联合应用对变形链球菌生长、黏附的影响。方法采用MTT法分别测定茶多酚、柠檬提取物以及两者混合液的最小抑菌浓度(MIC)值,通过分级抑制浓度(FIC)指数来判断两者联合使用对变形链球菌生长作用的影响,并通过扫描电镜观察低于MIC浓度的混合液对变形链球菌在玻片上黏附的情况。结果茶多酚与柠檬提取物单独用药时,其MIC分别为1.56mg/mL和5.60mg/mL。联用的MIC为茶多酚0.78mg/mL和柠檬提取物4.50mg/mL,FIC为0.75。混合液对变形链球菌的黏附抑制作用随着浓度的降低而明显增强。结论茶多酚与柠檬提取物联合应用对变形链球菌的体外抗菌活性具有相加作用,影响其在玻片表面的黏附。     

富含色氨酸抗菌肽对种植体周围炎主要致病菌生长抑制作用的研究

目的研究富含色氨酸短肽Pac-525对种植体周围炎主要致病菌的体外抑菌效果。方法应用二倍稀释法检测Pac-525对血链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)并绘制其Kill-time曲线。结果 Pac-525对血链球菌的MIC和MBC分别为0.125mg/mL和0.5mg/mL,对具核梭杆菌的MIC和MBC分别为0.007 8mg/mL和0.015 6mg/mL,对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为0.062 5mg/mL和0.125mg/mL;Kill-time曲线显示,Pac-525可以降低3种细菌的生长速度并呈现一定的量效关系,当浓度达到MBC时可完全抑制细菌在培养液中的生长繁殖。结论 Pac-525对种植体周围炎主要致病菌血链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌均具有抑制作用。     

四种中药对耐药肺炎链球菌的抑菌作用

目的探讨中草药对肺炎链球菌的体外抑菌作用。方法用临床分离细菌为受试菌,采用琼脂稀释法,观察黄连、黄岑、黄柏和连翘等4种中草药水煎剂的最低抑菌浓度。结果4种中草药水煎剂均有不同程度的抑菌作用,其中黄连抑菌效果最好,黄连水煎剂对肺炎链球菌M IC范围达7.8-15.63 g/L,M IC50为8 g/L,M IC90为8 g/L。黄岑、黄柏也有较好的抑菌效果,连翘抑菌效果较弱。结论黄连等中药在体外对肺炎链球菌均有良好抑菌作用。     

消痰平喘胶囊体外抑菌效果研究

目的探讨消痰平喘胶囊对引起上呼吸道感染的致病菌抑菌效果。方法按照新药临床指导原则的要求,采用2倍稀释法测定消痰平喘胶囊对试验菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结果消痰平喘胶囊对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎球菌和流感嗜血杆菌MIC50和MIC50分别为0．375～1．5mg／ml、0．75～3.0mg／ml。结论消痰平喘胶囊对引起呼吸道感染的常见致病菌具有较强的抑制作用。     

抑制龋齿生成菌(变异链球菌)的优势共培养菌株的筛选CSCD

目的比较10株益生菌的各项生理功能,筛选抑制龋齿生成菌(变异链球菌)的优势共培养菌株,为后期开发应用奠定基础。方法对组合菌株及单个菌株进行体外抑菌试验筛选,并进一步探索对变异链球菌的抑菌机制。结果10株益生菌菌株中,植物乳杆菌AI-66、乳双歧杆菌AI-01、干酪乳杆菌AI-12和婴儿双歧杆菌AI-20抑制变异链球菌较其他菌株有优势;鼠李糖乳杆菌AI-11与发酵乳杆菌AI-25、婴儿双歧杆菌AI-20与副干酪乳杆菌AI-62、乳双歧杆菌AI-01与干酪乳杆菌AI-12这3个共培养组合菌株较单个菌株对变异链球菌的抑制效果差异具有统计学意义(均P<0.01)。其可能的抑菌物质在低pH具有较好的抑菌效果,且对热不敏感,对胰蛋白酶敏感,可能是小分子多肽类物质。结论筛选出的3个共培养组合菌株在抑制龋齿生成菌(变异链球菌)效果上较单菌株有优势,可应用于食品、功能食品及膳食补充剂中,以降低龋齿、口臭等口腔疾病的风险。     

临床肺炎链球菌常见序列型青霉素耐药性的流行病学研究

从菌种的水平研究和阐述临床分离的肺炎链球菌青霉素耐药机制存在一定的局限。为探讨以序列型(Sequence type,ST)为基础研究肺炎链球菌青霉素耐药机制的可行性,本研究分析了1997~2014年间北京常见STs肺炎链球菌488株和2015年重庆酉阳县、四川中江县常见STs菌株88株的青霉素最低抑菌浓度(Minimun inhibitory concentration,MIC)的分布及年份分布。结果显示北京分离株中除了ST342外,属于某一种ST的所有分离株的青霉素MIC值具有一定分布范围,或者<0.25 mg/L,或者≥0.25 mg/L。青霉素MIC <0.25 mg/L的分离株多分布于2001年以前,此年份后≥0.25 mg/L的分离株出现,并逐渐成为主要种群。但这个年份分布规律对于某一种ST并不明显,某一种ST在最初发现的几个年份中就具有不同青霉素MIC水平的分离株。重庆酉阳县和四川中江县常见STs型青霉素MIC分布于0.25~2.0 mg/L(≥0.25 mg/L),包括ST271、ST320和ST81。本研究从流行病学角度揭示了肺炎链球菌临床分离株常见STs的青霉素MIC值分布规律,支持以STs为基础研究其青霉素耐药机制。     

无乳链球菌临床株对四环素类的敏感性研究

为探讨无乳链球菌对四环素类的敏感性及其与耐药基因、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)之间的关系,本研究收集2014-2017年深圳市南山区人民医院分离自患者的136株无乳链球菌临床分离株,采用琼脂平板稀释法分析四环素类最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。采用聚合酶链反应检测菌株四环素类耐药基因(tetM、tetK、tetO),MLST测定ST型别,并分析四环素类敏感性与其耐药基因及ST型别之间的关系。结果显示,无乳链球菌对四环素类的耐药率为46.32%,耐四环素类菌株主要携带tetM基因,主要为ST17型和ST19型,且ST17型菌株对四环素类的耐药率显著高于ST19型(P<0.05)。结果提示,无乳链球菌的主要四环素类耐药基因为tetM,ST17型、ST19型是主要流行型别,且ST17型菌株对四环素类的敏感性低于ST19型。