谷氨酸对大鼠海马CA1区神经元的短暂性外向K+电流的影响

为了在离子通道水平探讨谷氨酸对急性分离海马ＣＡ１区神经元的短暂外向Ｋ＋电流的影响。用７～１０ｄ大鼠,以链霉蛋白酶Ｅ酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元;利用全细胞膜片箝技术,观察了谷氨酸对海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果观察到谷氨酸对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用,且呈明显浓度依赖性、时间依赖性和部分电压依赖性。上述结果表明,谷氨酸对Ｋ＋通道的影响在中枢神经系统中具有重要作用。     

应用激光共聚焦扫描技术对海马脑片神经元内钙的观察

用微量注射法将荧光剂Ｆｌｕｏ－３注入大鼠海马,对神经元进行在体荧光标记,可清晰地标记多个神经细胞。联合应用激光共聚焦扫描显微镜,观察大鼠海马脑片ＣＡ１锥体细胞在青霉素,谷氨酸模拟致痫及缺糖缺氧时胞内钙的变化。结果显示：无镁时,谷氨酸和青霉素可致海马ＣＡ１锥体细胞胞内钙的缓慢增加;离体缺糖缺氧时ＣＡ１锥体细胞胞内钙亦增多。     

γ—氨基丁酸抑制缺氧所致神经元钙超载

本文以体外分散培养的新生大鼠海马ＣＡ１区神经细胞为标本,分别采用激光扫描共聚集显微镜动态监测单个细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ和膜片箝全细胞记录的电生理技术检测细胞的ＮＭＤＡ电流和电压依赖性Ｃａ＾２＋电流等方法,较为深入地研究了抑制性神经递质γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）及ＧＡＢＡ－Ａ受体激动剂蝇蕈醇对急性缺氧时海马ＣＡ１神经元［Ｃａ＾２＋］ｉ升高过程的影响方式及其作用机制。结果表明：对照组细胞缺氧后比缺氧前［Ｃ     

β-淀粉样蛋白31-35片段对海马神经元分离膜片Ca~(2 )激活大电导钾通道的抑制

为了确定β－淀粉样蛋白（ＡβＰ）在影响神经元电生理特性并导致神经毒作用时的最短活性序列，实验采用膜片钳技术，在急性分离的大鼠海马ＣＡＩ区锥体细胞的“内面向外”式膜片上，观察了ＡβＰＲ的３１－３５和２５－３５片段对Ｃａ２＋激活大电导钾（ＢＫ）通道活动的影响。结果显示，浴液中给予 ５μｍｏｌ／Ｌ的ＡβＰ ３１－３５后，ＢＫ通道的平均开放概率（Ｐｏ）和开放频率在１～３ｍｉｎ内分别减少了８５．８％（Ｐ＜０．０１）和７２．１％（Ｐ＜０．０１）；平均开放时间减少了４１．１％（Ｐ＜０．０１）；平均电流幅度则无明显改变（Ｐ＞０．０５）；给子同样摩尔浓度的ＡβＰ　２５－３５后，ＢＫ通道平均Ｐｏ减少了８５．５％（Ｐ＜０．０１），平均开放时间减少了５１．４％，（Ｐ＜０．０５）。结果提示，两种ＡβＰ片段对海马神经元ＢＫ通道具有抑制作用，这可能与ＡβＰ的神经毒性作用有关；ＡβＰ３１－３５片段可能是ＡβＰ分子中影响细胞电生理特性的最小活性序列。     

学习过程中MF—CA3与PP—CA3突触传递效应的变化

应用慢性电极埋植技术以电生理学结合行为学的方法,探查在学习过程中大鼠海马ＣＡ３区两种不同输入突触（ＭＦ－ＣＡ３突触和ＰＰ－ＣＡ３突触）塑性变化及其相互关系。结果如下：（１）在分辨反应的建立过程中,在ＣＡ３区由ＭＦ诱导（ＭＦ－ＣＡ３）的群体锋电位和由ＰＰ诱地（ＰＰ－ＣＡ３）的群休锋电位,两者的峰值同步增大,同步达最高水平,且ＰＳ峰值达最高水平先于行为反应达学会标准;（２）在自然消退过程中,两者的ＰＳ     

生长抑素对实验性癫痫大鼠海马CA1区的作用

在大鼠海马ＣＡ１区微量注射０．０３－０．３ｎｍｏｌ生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＳ）后,皮层脑电出现单个或成串的棘尖波,平均脑电总功率著升高,并且在一定范围内（０．００６－０．１５ｎｍｏｌ）具有剂量依赖性。在海马ＣＡ１微量注射０．０３－０．３ｎｍｏｌＳＳ可诱发大鼠表现出痫样行为,并可加重红藻氨酸诱导的大鼠痫样活动。在９５个大鼠海马脑片上细胞外记录ＳＳ对ＣＡ１区青霉素诱导的１１４个痫样放电单     

谷氨酸对海马CA1区锥体细胞A-电流特性的影响

利用全细胞膜片钳记录方法,在急性分离的大鼠海马CA1区锥体细胞上深入研究了谷氨酸对方波诱导的短暂性外向钾电流（IA）激活和失活特性的影响。结果发现：在谷氨酸灌流条件下,IA的激活时间常数没有明显改变（P＞0 ．05）,谷氨酸升高了A－通道稳态失活电压;谷氨酸延长了A－电流失活时间,并具有电压依赖性。实验结果说明了谷氨酸从不同的方面调控着A－通道,对A－通道稳态失活电压依赖性的改变可能是其调控A－通道的主要途径。     

一种改进的适用于膜片钳记录的成年大鼠海马神经元急性分离法

本文建立了一种快速、可靠的急性分离成年大鼠海马神经细胞的方法。此法可将实验大鼠的年龄提高到500d以上,体重300g以上;不损伤神经细胞膜的电学特性：形态上有差异的细胞易于分辨。用膜片钳技术的单通道和全细胞模式证实,在本实验条件下,约95％左右的健康细胞均能形成高阻抗封接,并成功地记录了电压依赖性钾、钠、钙通道,外向整流氯通道和大电导的钙激活钾通道电流。     

谷氨酸对海马CA1区锥体细胞A-电流特性的影响

利用全细胞膜片钳记录方法 ,在急性分离的大鼠海马CA1区锥体细胞上深入研究了谷氨酸对方波诱导的短暂性外向钾电流 (IA)激活和失活特性的影响。结果发现 :在谷氨酸灌流条件下 ,IA 的激活时间常数没有明显改变 (P>0.05) ;谷氨酸升高了A -通道稳态失活电压 ;谷氨酸延长了A -电流失活时间 ,并具有电压依赖性。实验结果说明了谷氨酸从不同的方面调控着A -通道 ,对A -通道稳态失活电压依赖性的改变可能是其调控A -通道的主要途径。     

钙激活性氯离子通道的电生理研究

目的:研究大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道的电流、电压电流关系等电生理特性.方法:采用急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶)分离出单个肺动脉平滑肌细胞,应用膜片钳技术,测定各组大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道电流和电压电流.结果:急性酶分离法能成功分离出适用于膜片钳记录的单个大鼠肺动脉平滑肌细胞,并测到稳定的钙激活性氯离子通道电流,该电流表现出时间、电压及钙离子依赖性,并呈外向整流特征.结论:大鼠肺动脉平滑肌细胞的钙激活氯离子通道具有时间依赖性、钙离子依赖性和电压依赖性,并具有外向整流特征.     

一种适用于膜片箝记录的海马神经元分离方法

结合酶消化和机械分离的方法,探讨一种适用于膜片箝记录的大白鼠海马神经元的急性分离技术。此法分离得到的不同状态的细胞有明显的形态差异,易于在镜下直接分辨。细胞具有完整的突触结构,表面光洁,适于膜片箝千兆欧阻抗的封接。实验证实,胰蛋白酶（Ｔｒｙｐｓｉｎ）未破坏神经元上的离子通道,细胞具有正常的电生理学特性。     

降钙素原的原核表达及单克隆抗体制备

目的:高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白,制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。方法:大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后,利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后,经质谱、Western blot和间接ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性;重组蛋白免疫小鼠,经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体(m Ab)。结果:在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白;重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性;经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株,经ELISA鉴定,筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。结论:利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体,为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。     

Photochemical treatment with S-59 psoralen and ultraviolet A light to control the fate of naive or primed T lymphocytes in vivo after allogeneic bone marrow transplantation.

Donor leukocyte infusions after allogeneic bone marrow transplantation can provide a curative graft-vs-leukemia (GVL) effect, but there is a significant risk of graft-vs-host (GVH) disease. A simple and effective method for controlling the fate of naive or primed T-lymphocytes in vivo without eliminating their beneficial properties is needed. In this report, photochemical treatment (PCT) ex vivo with a synthetic psoralen (S-59) and UVA light was evaluated as a pharmacological approach to limiting the proliferation and GVH potential of naive and primed donor T cells in vivo. S-59 rapidly intercalates into and cross-links DNA on UVA illumination. The effects of PCT on T cells were found to be both S-59 and UVA dose dependent. With selected PCT regimens, treated T cells still expressed activation markers (CD25 and CD69) and secreted IL-2 on activation, but they showed limited proliferative capacity in vitro and in vivo. Clonal expansion of CTL in MLR was reduced after PCT, but short term lytic activity of primed CTL was not affected. In a murine model of MHC-mismatched bone marrow transplantation, the addition of PCT-treated T cells to T-depleted bone marrow facilitated donor engraftment and complete chimerism without causing acute or chronic graft-vs-host disease. Allospecific GVL reactivity was reduced but not eliminated after PCT treatment. In an MHC-matched model using host-presensitized donor T cells, PCT significantly reduced GVH-associated mortality without eliminating GVL reactivity. Thus, PCT ex vivo offers a simple, rapid, and inexpensive method by which to control the fate of naive and primed T cells in vivo.     

小鼠海马神经元冰冻切片和脑片培养方法的比较

目的:通过冰冻切片和脑片培养方式比较获得更适合脑片实验研究的方法。方法:分别运用急性切片和脑片培养方法,结合全细胞膜片钳技术比较两种脑片处理方法对小鼠海马神经元细胞形态、细胞膜封接难易程度、细胞电生理特性等的差异,获得更适合细胞研究的脑片获取方法。结果:冰冻切片方法切断部分神经纤维,脑片表层出现肿胀或坏死细胞,2-3层细胞可用于膜片钳记录,但不易封接破膜。脑片培养后可使纤维再生,整个脑片细胞形态清晰可见,容易封接破膜,电生理记录波形及基本特性与冰冻切片一致,但脑片培养方法的细胞突触后电流幅度更大、频率更高。结论:脑片培养可修复受损纤维和细胞膜柔韧性,且不改变膜特性,但脑片培养重建了一定数量的细胞间信号连接,使细胞反应性增强,脑片培养方法更适合脑片神经元研究。     

γ-氨基丁酸能抑制对大棕蝠听皮层神经元声反应特性的影响

为了探讨γ－氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA)能抑制对大棕蝠(Eptesicus fuscus)听皮层(auditory cortex,AC)神经元声反应特性的影响,采用多管微电极电泳方法,观察了8只大棕蝠AC神经元去ABA能抑制前后声刺激诱发的反应。结果显示,微电泳GABAa受体拮抗剂荷包牡丹碱(bicuculline,Bic)去ABA能抑制可改变声刺激诱发的反应模式;极大地增加神经元冲动发放率,缩短反应的潜伏期和降低反应的最小阈值;不同程度地改变强度－发放率和强度－潜伏期函数。结果提示：1、GABA能抑制对AC神经元声信号处理起重要作用;2、GABA能抑制可改变AC神经元兴奋性支配或输入的效应,并因此定型AC神经元的声反应性质,即发放模式、阈值、强度－发放率和强度－潜伏期函数;3、GABA能抑制为AC神经元的声诱发活动提供一种调制性抑制。     

血清降钙素原检测对早期诊断肝衰竭合并感染的临床意义

目的:探讨血清降钙素原(PCT)检测在肝衰竭合并感染早期诊断中的临床意义。方法:选择2014年3月至2017年3月我院收治的由病毒性肝炎导致的肝衰竭患者102例为研究对象,根据有无感染分为感染组(75例)和非感染组(27例),采用干式免疫荧光法检测其血清PCT水平,并检测两组患者白细胞(WBC)水平、C反应蛋白(CRP)水平、中性粒细胞百分比(N%),进行全身炎症反应综合征(SIRS)评分,采用多因素Logistic回归模型分析PCT、WBC、CRP、N%水平和SIRS评分对肝衰竭合并感染的预测价值大小,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价PCT、WBC、CRP、N%水平和SIRS评分对肝衰竭合并感染的诊断价值。结果:感染组PCT、WBC、N%、CRP水平和SIRS评分均高于非感染组(P0.05);不同感染部位患者WBC、N%、CRP水平和SIRS评分比较差异不明显(P0.05);多部位感染患者血清PCT水平均高于其他单部位感染患者(P0.05);多因素Logistic回归分析显示,PCT和N%水平是肝衰竭合并感染的独立危险因素(P0.05);PCT、N%、CRP、WBC水平和SIRS评分诊断肝衰竭合并感染的ROC曲线下面积(AUC)值依次为0.916、0.763、0.752、0.746、0.682,PCT诊断肝衰竭合并感染的AUC值分别与N%、CRP、WBC和SIRS评分比较差异均有统计学意义(Z=3.518、3.672、4.103、5.106,P0.05)。结论:肝衰竭合并感染患者血清PCT水平明显升高,PCT对肝衰竭合并感染的诊断价值优于WBC、CRP、N%和SIRS评分等传统实验室指标。     

13C-NMR study of glycerol metabolism in rabbit renal cells of proximal convoluted tubules

Perchloric acid extracts of rabbit renal proximal convoluted tubular cells (PCT) incubated with [2-13C]glycerol and [1,3-13C]glycerol were investigated by 13C-NMR spectroscopy. These 13C-NMR spectra enabled us to determine cell metabolic pathways of glycerol in PCT cells. The main percentage of 13C-label, arising from 13C-enriched glycerol, was found in glucose, lactate, glutamine and glutamate. So far it can be concluded that glycerol is a suitable substrate for PCT cells and is involved in gluconeogenesis and glycolysis as well in the Krebs cycle intermediates. Label exchange and label enrichment in 13C-labelled glucose, arising from [2-13C]glycerol and [1,3-13C]glycerol, is explained by label scrambling through the pentose shunt and a label exchange in the triose phosphate pool. From relative enrichments it is estimated that the ratio of the pyruvate kinase flux to the gluconeogenetic flux is 0.97:1 and that the ratio of pyruvate carboxylase activity relative to pyruvate dehydrogenase activity is 2.0:1. Our results show that 13C-NMR spectroscopy, using 13C-labelled substrates, is a powerful tool for the examination of renal metabolism.     

人重组白细胞介素-6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

目的和方法 :采用免疫组化方法 ,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl 2表达及人重组白细胞介素 6(rhIL 6)的影响。结果 :经rhIL 6孵育的海马神经元缺氧后神经元活存数、Bcl 2表达阳性神经元数和Bcl 2表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论 :rhIL 6能增强缺氧神经元Bcl 2的表达 ,抑制缺氧后神经元的死亡 ,提示rhIL 6参与脑缺氧损伤的调控。     

Reduced substrate affinity for human erythrocyte uroporphyrinogen decarboxylase constitutes the inherent biochemical defect in porphyria cutanea tarda

The pathogenesis of human porphyria cutanea tarda (PCT) is associated with an intrinsic abnormality of the uroporphyrinogen decarboxylase enzyme. To characterize this, we studied the kinetic properties of the red cell enzyme procured from patients with various forms of PCT and non-porphyric controls. The enzyme activity (units/mg hemoglobin) in the red cell hemolysate was close to normal in sporadic PCT but about 75% diminished in the familial PCT. The Michaelis constants (Km) of 200-fold purified red cell enzyme preparations, determined by using pentacarboxylic porphyrinogen I and uroporphyrinogen I as substrates, were more than 3.8-4.0 times higher, and the maximum velocity (Vmax) was about 70% diminished in familial PCT, whereas the Km was about 1.7-1.9 times higher and the Vmax was more or less normal for sporadic PCT. These observations suggest for the first time that the primary lesion in familial PCT is a genetically determined kinetic abnormality of uroporphyrinogen decarboxylase which appears to be different from the sporadic form of the disease.