毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化

乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁, 而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段, 乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后, 对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法, 探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10 L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明, FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基, 溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响, 甲醇诱导最佳终浓度为1% (V/V), 发酵的最适pH值为5.4~6.0。发酵罐放大培养后, ELISA和 SDS-PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达, 最终菌体生物量达到310 OD600, 表达量达到27 mg/L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22 nm类病毒颗粒, 为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。     

降钙素原的原核表达及单克隆抗体制备

目的:高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白,制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。方法:大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后,利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后,经质谱、Western blot和间接ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性;重组蛋白免疫小鼠,经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体(m Ab)。结果:在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白;重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性;经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株,经ELISA鉴定,筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。结论:利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体,为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。     

Dedifferentiating initiation and embryogenesis from freshly-isolated microspores of barley

By using DNA-specific fluorescent dye and a confocal laser scanning microscope, the present study was designed to investigate the cytological characteristics of dedifferentiating initiation during pretreatment and em-bryogenesis during culture in freshly-isolated microspores of barley, and the difference in main developmental pathway between freshly-isolated and cold-treated microspores. The results revealed that ( i ) freshly-isolated microspores started the initiation within 12 h of mannitol pretreatment, whose main cytological characteristics were that: cell vol-ume was obviously extended; the volume of nuclei and nucleoli were also greatly increased; nucleoli were extremely clear and highly condensed; N/C ratio was very high; ( ii ) all the pretreatment methods led to the initiation of the mi-crospores, thus triggering the embryogenic process; ( iii ) pretreatment methods influenced the main developmental pathway of microspores by changing the pattern of the first mitosis. The cold-treated microspor     

产蝎及仔蝎的若干生物学特性

本文实验用蝎绝大多数在夜间产仔。用特殊装置录得的图形显示,产仔前12—8小时移位走动较多;产后约一周内活动减少,通常出现在傍晚前后的频繁走动消失。1337只仔蝎初生体重平均在18mg以下,生后约10天内不摄食,体重逐日下降。仔蝎与亲蝎间无特异性识别能力;绝大多数产蝎 不食幼仔。文中描述了产蝎母性行为的若干方面,以及母性行为在未产孕蝎诱发的可能性,并对母性行为作了讨论。作者认为,用“残食”来描述蝎与蝎之间的某种关系,并没有触及其生物学特性的实质。     

马氏钳蝎运动性活动的实验观察

本文报道了一种用于记录蝎运动性活动的装置——运动小室,以及记录方法。该装置结构简单,不仅灵敏度高,且能满足长期连续记录的需要。所得记录图能客观地展示一昼夜中蝎运动性活动的若干规律,并可将运动区分为频繁走动和移位走动两类,后者再分为距离移位和就地移位。对蝎运动性活动的某些特征做了讨论。     

大麦不同基因型游离小孢子的直接培养再生及培养体系的优化

以微搅拌法建立了小孢子直接游离的预处理和培养程序。在大田生长的４个对培养反应不同的大麦基因型上,以新鲜幼穗游离小孢子进行直接培养,均成功地诱导了胚状体并获得再生绿色植株。小孢子的发育进程说明,直接游离的小泡子在预处理过程中的发育要慢于在花药中预处理的小孢子,而且其培养效率也较低。直接游离小孢子的培养密度以０．８～１．０×１０５／ｍｌ较理想,至少应不低于６×１０４／ｍｌ．８％－１０％的糖浓度可明显提高小孢子分裂频率和胚状体诱导频率。实验结果也表明两种培养基ＦＨＧ和ＭＮ６无明显差异,均适宜于直接游离的小孢子培养,并对游离小孢子直接培养在理论和应用上的意义进行了讨论     

羊肚菌液态发酵的研究

通过摇瓶正交试验研究了圆锥羊肚菌液体发酵的条件,选出最佳培养基配方、接种量、培养温度、pH、通气量,培养时间等参数。在此基础上,应用VIRTIS公司生产的2L－自控发酵罐进行了分批发酵,摸索到了羊肚菌液态深层发酵的基本规律,然后分别以淀粉和玉米粉为碳源进行了补料分批发酵,获得其干细胞产量为25．4g／L和27．4g／L,生长速率为0．45g／（L·h）和0．51g／（L·h）,以碳源为基准的产量得率系数（yx／s）为0.72（g／g）和0.75（g／g）等数据。实验结果表明,羊肚菌的液态深层发酵已达到了真菌菌丝液态发酵的正常水平。     

瘤胃内的纤毛虫及其作用

反刍动物瘤胃内的微生物有两大类——原生动物和细菌。原生动物主要是纤毛虫,其次是鞭毛虫,还有阿米巴。早在1843年戈贝(Gurby)和戴方德(Delfound)就观察到瘤胃内有纤毛虫生存,当其随食物通过消化道时即行消失。近几十年来在它们的形态、分类、数量变化和虫体代谢等方面的大量研究使得对瘤胃纤     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备

目的:制备分泌特异性抗人甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为建立高灵敏度的Tg检测方法做准备。方法:以天然人源甲状腺球蛋白为抗原经皮下免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体,并对其进行特异性鉴定,建立检测Tg的双抗体ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)夹心法。结果:获得7株可稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经ELISA鉴定,筛选抗体可与Tg抗原有良好的特异性反应。建立的双抗体夹心ELISA方法敏感性可达1 ng/mL。结论:成功制备了抗人Tg单克隆抗体并建立了检测人Tg双抗体夹心ELISA方法,为进一步研发Tg快速诊断试剂盒提供了原料。