大鼠胰腺β细胞离子通道的一些特性

实验以单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺β细胞为对象,用穿孔膜片箝和细胞贴附式记录技术研究ＡＴＰ敏感Ｋ＾＋通道（ＫＡＴＰ）、延迟整流型Ｋ＾＋通道（ＫＤＲ）、Ｃａ＾２＋通道和Ｎａ＾＋通道的有关特性。结果表明：⑴ＫＡＴＰ通道的内流电导约６５ｐＳ,外流电导约３１ｐＳ,反转电位在－６０ｍＶ左右;⑵ＫＤＲ通道在延迟２０ｍｓ后达到最大激活,ＫＤＲ电流约为ＫＡＴＰ的１／３;⑶钙电流在０ｍＶ左右达到４０－６０ｐＡ的峰值,Ｌ     

新生大鼠大脑皮层神经元胞体ATP激活的离子通道及其特性

用膜片箝技术的细胞贴附式和内面向外式,在机械分离的新生ＳＤ大鼠的大脑皮层神经元上,记录到ＡＴＰ激活的离子通道。此通道的电导为３２ｐＳ,对Ｎａ~＋,Ｋ~＋和Ｃｓ~＋无选择性通透,而对Ｃｌ~－不通透。通道开放时间分布直方图多数需用双指数拟合,少数可用单指数拟合;通道关闭时间分布直方图均需用双指数拟合。通道的平均开放时间和开放概率均不依赖于膜电位;但通道的开放概率随着激动剂ＡＴＰ浓度的增加而增大。当电极内液无ＡＴＰ时,无通道电流。六烃季胶和美加明不能阻断此通道。上述结果表明,新生大鼠的大脑皮层神经元胞体可能存在ＡＴＰ激活的离子通道。     

大脑皮层神经元上ATP激活的多电导单通道

用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌｌ—ａｔｔａｃｈｅｄ）和内面向外式（ｉｎｓｉｄｅ—ｏｕｔ）,在机械分离的新生大鼠的大脑皮层神经元上,记录到ＡＴＰ激活的单通道电流。按电流幅度可以分为三类,其电导分别为２０ｐＳ、３２ｐＳ和５８ｐＳ,各占全部开放事件数的１２％、６７％和２１％,其中３２ｐＳ为优势电导。三种电导状态之间可直接转换。３２ｐＳ和５８ｐＳ以及３２ｐＳ和２０ｐＳ之间的转换最为常见。结果表明：新生ＳＤ大鼠的大脑皮层神经元上存在ＡＴＰ激活的多电导单通道。     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

TAD对大鼠肾缺血后肾组织Na~+、K~+-ATP酶活性的影响

选用大鼠右肾切除、左侧肾蒂夹闭６０ｍｉｎ继之再灌流不同时间动物模型,用光镜组化、电镜组化和计算机显微图像分析方法观察肾小管上皮Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶活性的变化及ＴＡＤ（还原型谷胱甘肽）对它们的影响。结果显示：正常肾组织光镜下Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶主要分布在髓质外带、髓袢升支粗段的肾小管上皮细胞;电镜下Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶分布在细胞基部质膜内褶的胞浆面。６０ｍｉｎ肾缺血后再灌流１５ｍｉｎ、２４ｈ可致肾小管上皮Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶活性呈进行性降低,给予自由基清除剂ＴＡＤ后,肾小管上皮Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶活性损伤有所减轻。结果提示：自由基可能损害肾上管上皮Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶活性,ＴＡＤ可能保护肾小管Ｎａ＋、Ｋ＋┐ＡＴＰ酶活性     

蛋白激酶C对CNE-2Z细胞p53基因表达的影响

用抗人ｐ５３蛋白单抗,进行免疫细胞化学染色,研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞ｐ５３基因表达的影响。结果发现：对照组Ｐ５３蛋白阳性细胞百分比为６７．６９±２．９７。ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）终浓度分别为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ诱导细胞２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３０．４４±４．２５和２９．１９±２．３９,较对照组均明显降低,Ｐ＜０．０１。用终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＴＰＡ和终浓度为４ｕｇ／ｍｌ的ＯＡＧ分别作用２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３３．７５±４．３４和６８．１８±４．４２,前者较对照组明显降低,Ｐ＜０．０１,后者变化不明显。阳性细胞中对照组和ＯＡＧ组以胞核和胞浆均着色为主,而ＳＳ、ＳＴ和ＴＰＡ组以胞核着色为主。以上结果表明：突变型ｐ５３基因在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中有较高表达;通过抑制细胞ＰＫＣ活性和耗竭ＰＫＣ含量后,均可降低ｐ５３基因的表达;ＰＫＣ激活剂ＯＡＧ对该细胞ｐ５３基因的表达无明显影响。     

心钠素前体分子内调控对心肌Na^＋—K^＋—ATP酶的作用

目的：研究利钾尿肽及心钠素前体分子内调控作用对心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的作用。方法：将大鼠心肌匀浆后,分别加入利钾尿肽、心钠素以及利钾尿肽＋心钠素,用比色法测定Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性。将大鼠心脏悬挂于Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ灌流装置,分别以利钾尿肽、心钠素、利钾尿肽＋心钠素为灌流液,灌注心脏,用四道生理仪观测左心室内压、左心室收缩最大速率,左心室舒张最大速率,心率及冠脉流量。结果：心钠素虽然对Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶有抑制作用（抑制率２６．２％）,但是,与对照无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽显著抑制酶的活性（抑制率４６．５％,Ｐ＜０．０１）这种抑制作用可被心钠素抵消（抑制率１７．６％,Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽可以增加左心室收缩和舒张最大速率以及左室内压,而这种强心作用可因心钠素的加入而消失或减弱。结论：利钾尿肽可以抑制心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的活性,产生强心作用,心钠素可以抵消以上作用。     

青龙藤提取物对小白鼠胰岛β细胞ATP敏感钾（KATP）通道的影响

青龙藤 (Ｂｉｏｎｄｉａｈｅｎｒｉｙｉ,ＢＨ)为萝科青龙藤属植物 ,具有活血舒筋 ,理气祛风的功能 :主治跌打损伤、下肢冷痛、风湿手足麻木、牙痛。在其它实验中我们发现青龙藤提取物可以刺激胰岛 β细胞单位放电增加 ,促进胰岛素分泌 ,使糖尿病模型大鼠血浆中的胰岛素水平由 (18.8± 2 .3)ｍｕ/Ｌ升高到 (4 3 .2± 3.5 )ｍｕ/Ｌ。已知当血糖浓度升高 ,胰岛 β细胞膜上ＫＡＴＰ通道关闭 ,引起胰岛素分泌。为探讨作用机制 ,用记录小白鼠胰岛 β细胞膜上的ＫＡＴＰ通道电流为指标 ,观察对ＫＡＴＰ通道的影响。1　材料和方法(1)细胞的分离　体…     

大鼠海马神经元Na^2＋—Ca^2＋交流电流在低氧时的变化

目的 探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＾２＋－Ｃａ＾２＋交换体在内钙超载中的作用。方法 采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＾２＋－Ｃａ＾２＋交换电流的电流－电压（Ｉ－Ｖ）曲线的影响。结果 在整个膜电位水平,Ｂａ＾＋－Ｃａ＾２＋交流电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ｍｖ时,电流幅值从（９２．８３±２０．８）ｐＡ上升到（１３０．６７±２６．８８     

粉防己碱对大鼠心肌缺血再灌注时心肌ATP酶活性的影响

实验旨在观察在体大鼠短暂缺血后心肌膜ＡＴＰ酶活性的变化及粉防己碱（Ｔｅｔ）的作用。分离缺血１５ｍｉｎ、再灌注２ｈ后及在缺血再灌注前给Ｔｅｔ的大鼠心肌粗制质膜和内质网,测定质膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果表明,心肌缺血１５ｍｉｎ后二酶活性均明显降低,分别为假结扎组的６３．６％和７２．６％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性有所恢复,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的７２．１％（Ｐ＜０．０１）,而Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性则进一步下降,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的５０．４％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后２ｈ二酶活性分别升高至假结扎组的８０．９％和６５．３％（Ｐ＜０．０１）。在缺血前２０ｍｉｎ分别给予Ｔｅｔ６４．２和９６．３μｍｏｌ／ｋｇ及硝苯啶（０．２３μｍｏｌ／ｋｇ）,能明显减少内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性的降低。结果提示心肌膜ＡＴＰ酶活性的降低可能参与了短暂心肌缺血所致再灌注损伤的发生机制,Ｔｅｔ可减少缺血和／或再灌注时内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性降低。     

颈髓损伤后线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系

为了探讨颈髓损伤后颈髓线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系,采用Ａｌｅｎ法造成猫颈髓损伤,观察颈髓损伤后线粒体Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及线粒体呼吸功能的变化。结果显示：颈髓损伤后２ｈ至７２ｈ,Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性、ＳＯＤ活性明显降低,而线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）、磷氧比值（Ｐ／Ｏ）、氧化磷酸化效率（ＯＰＲ）也明显下降。表明颈髓损伤后Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、ＳＯＤ活性与线粒体功能密切相关,提示颈髓线粒体的病理生理改变在颈髓损伤后继发性损害过程中起重要作用。     

急性分离的大鼠皮层神经细胞膜去极化激活的优降糖敏感钾单通道电流

本实验利用氰化物阻断细胞呼吸链模拟缺氧模型,采用膜片钳技术的记录方法,对急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜上ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道特性进行研究。结果提示：在急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜丢极化激活时,可记录到一类被优降糖（ＡＴＰ敏感钾通道阻断剂）阻断的钾通道,可能属新型ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道。     

多巴胺对血管平滑肌细胞钙激活钾通道的影响及其机制

目的：研究多巴胺对血管平滑肌细胞大电流、钙激活钾（ＢＫｃａ）通道的影响及其信息传递机制。方法用膜片钳细胞贴附式技术,记录细胞能液内灌流多巴胺受体激动剂、阻断剂以及第二信使及相关蛋白激酶拮机剂对猪冠状动脉血管平滑肌细胞ＢＫｃａ 爱道活动的影响。结果：多巴胺增加ＢＫｃａ通道活性（Ｐ〈０．０１）,并可被ＣＡ－１受体阻断剂ＳＣＨ２３３９０完全阻断,但不受β２受体阻断剂普藉洛尔的影响。腺苷酸环化酶抑制剂ＳＯ     

魔芋葡苷聚糖（KGM）凝胶为亲和层析载体与Sepharose4B的比较 …

将ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３ＧＡ制成了ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料亲和吸附剂,并用来与牛血甭白蛋白（ＢＳＡ）作用,每毫升ＫＧＭ亲和吸附剂可吸附ＢＳＡ ２８ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间为８４．５％,而Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料样和吸附剂每毫升可吸附ＢＳＡ １５．３ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间收迷８１．７％,并对两种凝胶的染     

过氧化氢诱发的小脑皮质凋亡神经元膜K+通道电流的变化

用新生ＳＤ大鼠小脑皮质细胞进行培养,用Ａｒａ－Ｃ抑制非神经元生长,以Ｈ２Ｏ２诱发神经元凋亡。用膜片细胞贴附式观察了凋亡神经元膜钾离子通道电流的变化,结果表明,凋亡小脑皮质神经元膜Ｋ通道在不同箍位电压下,通道电流（ＩＫ）幅度小于正常神经元的,单位电导小于正常神经元的,通道的平均开放时间,开放概率、短开放及长开放时间常数亦均小于正常神经元的。说明小脑皮质凋亡神经元Ｋ通道活动减弱     

大鼠纹状体神经元中乙酰胆碱激活的离子通道

用膜片钳技术对培养的纹状体神经元膜上的乙酰胆碱激活的离子通道进行了研究。结果表明,单通道电流为内向电流,随着超极化程度增大而增加,随着去极化程度增大而减少;翻转电位为１５．０±６．１ｍＶ,电导为８２．７１±１６．１７ｐＳ;通道的开放时间分布直方图和关闭时间分布直方图均需双指数拟合,开放时间分布直方图的时间常数分别为１．９３ｍｓ和５．７３ｍｓ,关闭时间分布直方图的时间常数则为０．５２８ｍｓ和２．３２ｍｓ;通道的平均开放时间和开放概率均与超极化程度无明显相关关系。由于电极液中含ＡＣｈ和Ｋ￣＋通道阻断剂Ｃｓ￣＋而不含Ｎａ￣＋或Ｃａ￣（２＋）,且浴槽液中含Ｎａ￣＋通道阻断剂河豚毒素,因此可排除内向Ｎａ￣＋流、Ｃａ￣（２＋）流和Ｋ￣＋流,提示内向电流为ＡＣｈ激活的通道电流。     

心房钠尿肽对大鼠主动脉弓压力感受器活动的影响

在隔离灌流的大鼠主动脉弓－主动脉神经标本上,观察了心房肽Ⅲ（ａｔｒｉｏｐｅｐｔｉｎⅢ,ＡＰⅢ）对主动脉弓压力感受器活动的影响。主动脉弓内压保持１３．３ｋＰａ条件下向灌流液中加入ＡＰⅢ（２．０μｇ／ｍｌ）后,主动脉神经传入放电较对照值增加６４±２７％（Ｐ＜０．００１）;升降灌流压时,主动脉神经传入放电随之增减,饱和压（ＳＰ）由２２．５±０．５降至２１．３±０．５ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,工作范围（ＯＲ）由１２．１±０．４降至１０．６±０．４ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,阈压（ＴＰ）无明显变化;压力感受器机能曲线向左上方移位,曲线的最大积分值（ＰＩＶ）由５０８±６６％增至７３０±５２％（Ｐ＜０．０５）,曲线最大斜率（ＰＳ）由５５．６±７．５增至９３．２±６．８％·ｋＰａ－１（Ｐ＜０．０５）;冲洗掉ＡＰⅢ后,主动脉神经传入放电基本恢复至对照水平．主动脉弓内压保持在１３．３ｋＰａ条件下,向灌流液中加入硝普钠（ＮＰ,１．０μｇ／ｍｌ）,主动脉神经传入放电虽有所减少,但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;升降灌流压时,ＴＰ,ＳＰ,ＯＲ均无明显变化,对压力感受器机能曲线及ＰＳ也无显著影响,而ＰＩＶ由６６７±７８降至５０２±７４％（Ｐ＜     

运动性骨骼肌疲劳亚细胞机制的探讨

本实验采用持续性下坡跑运动,观察大鼠骨骼肌运动后不同时相线粒体形态、代谢、机能等指标的变化,结果表明：大鼠运动后即刻线粒体钙含量、细胞膜丙二醛（ＭＤＡ）值明显增加,ＡＴＰ含量和细胞膜Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性下降;运动后２４ｈ线粒体钙含量、ＭＤＡ值增加最明显,ＡＴＰ含量仍未恢复,细胞膜Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性基本恢复,线粒体体密度、平均体积比运动前明显增加,比表面缩小;运动后４８ｈＡＴＰ含量完全恢复,线粒体钙含量、ＭＤＡ值开始恢复。本研究结果提示,急性运动引起的细胞膜脂质过氧化加强、线粒体形态、代谢机能异常抑制线粒体氧化磷酸化过程、减少ＡＴＰ生成可能是运动性骨骼肌疲劳的亚细胞机制之一。耐力训练可以通过改善线粒体形态、代谢、机能提高机体的运动能力。     

高粱根质膜K~＋通道蛋白的溶解及重组

用水两相法纯化的高粱根质膜嵌入平面脂双层膜,可以测得离子通道电流。记录了典型的单离子通道。ＴｒｉｔｏｎＸ—１００使质膜蛋白溶解,除去不溶物后,加入ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＸＡＤ—２使膜蛋白重组为蛋白脂质体。将蛋白脂质体嵌入脂双层,测定了脂双层上Ｋ＋通道电流逐渐出现的过程,该典型的通道电流记录的通道电导为１１２ｐＳ。通过改变前后槽ＫＣｌ浓度,测定蛋白脂质体嵌入脂双层后的稳态电流一电压关系,近似计算稳态逆转电位,由ＧＨＫ等式得Ｋ＋和Ｃｌ－的选择通透比Ｐｋ：Ｐｃｌ为８．６主要是通透Ｋ＋。关键词：     

大鼠海马神经元Na~ Ca~(2 )交换电流在低氧时的变化

目的：探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换体在细胞内钙超载中的作用。方法：采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流的电流电压（ＩＶ） 曲线的影响。结果：在整个膜电位水平,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ ｍＶ 时,电流幅值从（９２ ．８３ ±２０．８）ｐＡ上升到（１３０ ．６７ ±２６．８８）ｐＡ（ Ｐ＜０ ．０５） ,而在５０ ｍ Ｖ,其电流幅值从（－ ７４ ．６７ ±１１ ．８４）ｐＡ上升到（－ ５８ ．５±１０ ．７１）ｐＡ（Ｐ＜ ０ ．０５）。结论：低氧时Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流呈外向性,这种改变有利于低氧后通过Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换的外向转运方式排出细胞内钠,并交换钙进入细胞