七叶皂苷对P-糖蛋白功能的影响

目的:探讨七叶皂苷时P-糖蛋白功能的影响.方法:构建稳定表达P-糖蛋白的LLC-PK1细胞系,以real-time RT-PCR和Western Blotting分析P-糖蛋白基因mRNA和蛋白表达,共聚焦显微镜观察P-糖蛋白细胞定位,流式细胞术检测细胞内罗丹明123荧光强度.结果:(1)P-糖蛋白在LLC-PK1细胞中稳定高表达;(2)转染细胞中P-糖蛋白定位在细胞膜上;(3)七叶皂苷抑制P-糖蛋白功能.细胞内罗丹明123荧光强度增加123%,但其抑制效果是维拉帕米的30%.结论:七叶皂苷抑制P-糖蛋白功能,但其抑制效果弱于维拉帕米.     

维拉帕米对三磷酸肌醇引起的大鼠肝细胞钙释放激活的钙电流的影响

目的 :观察维拉帕米 (verapamil,VP)对三磷酸肌醇 (IP3)引起的大鼠肝细胞钙释放激活的钙电流 (ICRAC)的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :IP3 激活的ICRAC的峰电流为 (- 0 .2 6± 0 .0 8)nA(n =7) ;5 μmol/L维拉帕米对ICRAC的抑制率为 30 .9%± 7.8% (从 - 0 .2 5± 0 .10nA到 - 0 .17± 0 .0 5nA ,n =5 ,P <0 .0 1)。结果 :维拉帕米能有效抑制IP3 引起的ICRAC。     

维拉帕米对急性前壁心肌梗死行急诊PCI术患者再灌注室性心律失常的影响

目的:探讨经指引导管早期应用维拉帕米对急性前壁心肌梗死行急诊经皮冠状动脉介入治疗术(Percutaneous Coronary Intervention,PCI)患者再灌注室性心律失常的影响。方法:采用单中心、随机对照、前瞻性研究方法。选取2014年5月-2016年11月诊断为急性前壁心肌梗死并于我院行急诊PCI的患者,共纳入162例患者,按随机方法(随机数字表)分成2组,其中治疗组82例,对照组80例。治疗组患者在首次球囊扩张后早期经指引导管内给予维拉帕米(200μg),对照组患者则给予生理盐水。观察再灌注后室性心律失常发生率,PCI术后冠脉血流情况,心肌梗死相关血清指标(CK-MB,cTn I)的峰值,住院期间发生的主要不良心血管事件(MACE)。结果:维拉帕米治疗组患者再灌注心律室性失常及无复流的发生率显著低于生理盐水对照组(P0.05);维拉帕米治疗组患者cTnI和CK-MB峰值分别为(46.63±13.77)μg/L和(139.87±35.45)U/L,生理盐水组cTnI和CK-MB峰值为(54.36±12.59)μg/L和(158.34±40.18)U/L,两组比较,P均0.01。MACE事件两组间未见有统计学差异。结论:急性前壁心肌梗死患者急诊PCI术前经导管早期给予维拉帕米不但可显著减少无复流现象,还可显著减少再灌注后室性心律失常的发生,住院期间MACE事件的发生率无显著性差异。     

维拉帕米增加伊曲康唑体外抗烟曲霉能力

目的探讨临床药物维拉帕米对伊曲康唑体外抗烟曲霉能力的影响。方法在仅含伊曲康唑(ITZ)和含有ITZ与维拉帕米(Vera)的平板上观察烟曲霉菌落生长情况;显微镜下观察烟曲霉在仅含ITZ和两药联合的液体培养基中孢子萌发和菌丝生长情况;使用微量液基稀释法和E-test方法测试两个药物联用后的伊曲康唑对烟曲霉最低抑菌浓度。结果ITZ联用Vera比单用ITZ对烟曲霉菌落生长、菌丝萌发抑制效果更明显,并且显著降低了ITZ对烟曲霉的MIC。结论维拉帕米增加伊曲康唑对烟曲霉的体外抗菌能力。     

抗砷细胞荧光染色后的激光共聚焦显微镜检测

目的:应用激光共聚焦显微镜检测活细胞内荧光物质含量.方法:传代培养长期低剂量砷诱导的抗砷细胞,用荧光染料Rhodamine-123对细胞染色30min,实验组与维拉帕米(Verapamil)共同孵育,对照组为单加Rhodamine-123的抗砷细胞.应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录不同时间段的细胞内荧光强度.结果:实验组细胞染色12h,24h,36h,48h,60h后,荧光强度依次为(51.567±0.7572)、(46.533±0.7095)、(39.557±0.601)、(38.6±0.6245)和(38.505±0.718),明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有显著性(P＜0.01).结论:应用激光共聚焦显微成像技术能进行活细胞水平荧光物质实时定量检测.     

维拉帕米对大鼠浸水应激性胃溃疡的影响

目的和方法：尖激性胃溃疡模型,研究维拉帕米ｉｐ对大鼠应激性溃疡的影响及其作用机制。结果：（１）给拉帕米（５～２０ｍｇ／ｋｇ）可抑制大鼠浸水应激性胃溃疡的发生。（２）维拉帕米（１０ｍｇ／ｋｇ）可抑制浸水应激大鼠胃液,胃酸的分泌及胃的运动,而对胃粘液的分泌无影响;（３０浸水庆激后大鼠胃粘膜一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）活性和一氧化氮（ＮＯ）含量均明显降人氏,维拉帕米（１０ｍｇ／ｋｇ）可抑制应激导致的ＮＯＳ活     

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜NOS阳性神经元的影响

实验用 β- NADPH脱氢酶组织化学染色研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜 NOS阳性神经元的影响。结扎双侧颈总动脉使视网膜缺血 ,3小时后松结复流。分别于缺血前 15分钟和再灌流前 1分钟腹腔注射维拉帕米 (5 m g/kg/次 ) ,对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活 3天后取视网膜进行 β- NADPH组化反应。结果表明 :视网膜缺血后 NOS阳性神经元减少 ,并出现 i NOS阳性细胞。在缺血前后应用维拉帕米可使视网膜内 NOS神经元较对照组显著减少 (P<0 .0 1) ,NOS神经元形态良好。说明维拉帕米减少大鼠视网膜缺血后 NOS阳性神经元 ,其相应 NO量减少 ,推测维拉帕米对大鼠缺血后视网膜功能具有保护作用。     

双探针显色原位杂交技术在乳腺癌HER2基因检测中的应用

目的:通过双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的状态,评估双探针显色原位杂交技术的临床应用价值。方法:选取存档蜡块82例,分别用免疫组化及双探针显色原位杂交两种方法对Her-2基因及蛋白进行检测,并采用四格表卡方检验、配对卡方检验及Kappa检验作相关统计学分析。结果:两种方法检测结果不存在显著性差异(P0.05);就两种方法检测结果的一致性分析而言,两种方法所得出的检测结果存在较好的一致性(P0.05)。结论:双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因扩增结果与免疫组化检测HER2蛋白过表达结果高度相似,可作为检测HER2基因状态的有效方法。     

维拉帕米对铜绿假单胞菌群体感应抑制作用的体外研究

考察维拉帕米对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, PA）群体感应（Quorum sensing, QS）的抑制作用。测定维拉帕米最小抑菌浓度(Minimal inhibit concentration,MIC) ;构建培养环境,考察维拉帕米对PA生长的影响,绘制生长曲线;毒力因子表达实验中,分别考察维拉帕米对PA弹性蛋白酶表达、蛋白水解酶表达和绿脓毒素表达的影响。结果表明,维拉帕米MIC₅₀为128 μg/mL,MIC₉₀为512 μg/mL,最低抑菌质量浓度范围为128~512 μg/mL时,具有较好抑菌活性;生长曲线表明,维拉帕米质量浓度为16 μg/mL时,开始抑制PA的生长,随着浓度的增加,抑制作用逐渐增大;当维拉帕米质量浓度为512、256、128、64、32、16 μg/mL时,明显抑制弹性蛋白酶表达（P<0.01）,质量浓度为8 μg/mL时,对弹性蛋白酶有一定抑制作用（P<0.05）,维拉帕米质量浓度为512、256、128、64、32 μg/mL时,明显抑制蛋白水解酶的活性和绿脓毒素的表达（P<0.01）,当质量浓度为16 μg/mL时,对蛋白水解酶活性和绿脓毒素的表达有一定抑制作用（P<0.05）;维拉帕米对QS的抑制有浓度依赖。维拉帕米对PA的QS有明显抑制作用,体外可明显抑制PA生长,可作为抗菌增效的潜在开发药物。     

内皮素对离体大鼠心肌细胞的影响

本文应用离体成年大鼠心肌细胞,研究内皮素作用的细胞机制,发现10~(-9)—10~(-7)mol/L内皮素可引起心肌细胞挛缩、胞浆乳酸脱氢酶漏出和细胞总钙量增加,且具有剂量-效应关系。内皮素可促进~(45)Ca内流,其作用为钙通道阻断剂维拉帕米所拮抗。预先用负载荧光染料Fura-2的心肌细胞与内皮素孵育,可见胞浆游离钙显著增加,其作用亦可为维拉帕米抑制。结果提示:内皮素主要通过电位依赖的钙通道促进心肌细胞Ca~(2+)内流,产生其生物学效应。     

LBP联合HR-HPV检测宫颈病变的应用分析

目的:分析比较LBP检测、HR-HPV检测对宫颈病变的筛查效果,探讨两者在宫颈病变检测中的相关性.方法:回顾性分析我院妇科门诊就诊的892名患者进行LBP、HR-HPV、LBP+HR-HPV检测的结果,比较它们之间的优劣性.结果:892例患者中用LBP和HPV检测呈单项阳性的分别为185例和181例,各单项检出率为20.7%和20.3%,而上述结果中呈双项阳性的患者只有146例,检出率仅为16.4%;LBP联合HR-HPV检测呈阳性的为678例,检出率达到76.0%,两种方法检测率之间差异无统计学意义,P＜0.05.结论:两种方法的检测结果以及异常程度和感染量之间均无相关性,而两种方法联合使用可显著提高检出率,更有利于宫颈病变早期预防.     

测定糖尿病患者血清LDL-C 水平的方法学比较

目的:比较不同方法检测糖尿病患者血清LDL-C水平,为临床诊疗提供准确可行的检验方法。方法:采用沉淀法、匀相法、电泳法及超速离心法对233例糖尿病患者和102例健康人群的血清LDL-C水平进行测定,比较各方法之间的相关性,同时分析导致结果差异的因素。结果:四种方法检测健康人群LDL-C水平,结果间无统计学差异(P>0.05);糖尿病组,当TG≤2.26mmol/L时,四种方法检测LDL-C结果间相关性良好。高胆红素、血红蛋白、高TG及乳糜等干扰因素存在时,与其他方法相比,电泳法和超速离心法检测血清LDL-C结果受影响较小(P>0.05)。结论:超速离心法虽耗时、价格贵,但仍为检测LDL-C的经典方法,电泳法受高胆红素、血红蛋白、高三酰甘油等干扰因素的影响相对较小,适用于糖尿病合并高血脂患者血清LDL-C水平检测。     

兔右室流出道室速对L型钙通道α1c蛋白表达的影响

目的：通过建立右室流出道室速（RVOT-VT）的动物模型,以L型钙通道α1c蛋白作为观察指标,观察RVOT-VT时对L型钙通道α1c蛋白表达的影响,旨在探讨L型钙通道在RVOT-VT中的作用。方法：健康新西兰大耳白兔30只,随机分三组,分别为对照组（10只）、室速组（10只）、室速加维拉帕米干预组（10只）。采用免疫组织化学的方法对三组实验动物的右室流出道心肌组织进行L型钙通道cdc蛋白表达的检测。结果：1、高频刺激主动脉与肺动脉交界处均诱发了起源于右室流出道部位的室速,且室速持续时间均大于4小时。2、室速组L型钙通道α1c蛋白表达量明显下降;干预组L型钙通道α1cc蛋白的表达下降,但与对照组比较无显著差异。结论：1、室速组的心肌L型钙通道α1c蛋白表达发生了重构。2、维拉帕米可以改善心肌L型钙通道α1c蛋白的重构。3、L型钙通道在RVOT-VT发生、持续中起重要作用。     

不同全自动凝血仪检测结果的分析研究

目的:探讨不同全自动凝血分析仪检测结果是否具有可比性,同时对其检测结果临床可接受性进行评估,使不同全自动凝血分析仪检测结果标准化.方法:连续30天用SYSMEX CA- 1500及CA-7000全自动凝血分析仪同时检测并比对仪器配套定值质控物的PT、INR、APTT、FIB、TT值;同时连续30天利用两台仪器检测并对比新鲜血标本的PT、INR、APTT、FIB、TT值.结果:SYSMEX CA- 1500及CA-7000日间质控物各检测项目:PT、INR、APTT、FIB、TT变异系数均小于5％.CA- 1500及CA-7000全自动凝血分析仪检测新鲜血标本:PT、INR、APTT、FIB、TT统计分析结果,t检验其P值均＞0.05;相关系数r在0.993-0.999之间;两台仪器的偏差均符合1/2美国CLIA’88能力验证分析质量要求.结论:两台仪器PT、INR、APTT、FIB、TT的检测结果具有很好的相关性,经统计分析两台仪器检测结果无统计学意义.对不同凝血分析仪进行比对分析,不仅能够及时发现仪器存在的系统误差.而且使其检测结果具有很好的一致性,给临床可提供一个准确、可靠一致的实验室检测结果,使临床对疾病的诊断、疗效观察有一个统一的评判标准.     

慢性多重应激大鼠心律失常及维拉帕米的抑制作用

目的:研究慢性多重应激大鼠心律失常和心房肌细胞内钙离子浓度及血清儿荼酚胺浓度变化,分析钙离子阻滞剂维拉帕米对应激性心律失常的抑制作用.方法:健康雄性SD大鼠随机分为A组(应激组)、B组(应激+维拉帕米组)和C组(对照组).选用噪声加足底电击、强迫游泳和束缚加夜间光照的复合刺激为应激源,建立大鼠慢性多重应激模型.B组大鼠饲以钙离子阻滞剂维拉帕米.记录心电图,分析各组心律失常的类型、心律失常事件次数.测定实验前后血清儿茶酚胺含量,实验结束后,测定心房肌细胞内钙离子浓度.结果:实验结束后A、B两组大鼠全部记录到心律失常,A组大鼠出现较多类型的心律失常(窦性心律不齐、房性期前收缩、室性期前收缩、房性期前收缩和未下传、室上性心动过速、阵发性室速),B组记录到室性期前收缩(ventricular pre-mature beats,VPB)和房性期前收缩(atrial premature beats,APB o B组大鼠出现心律失常时间较晚(A组:17±4d;B组:25±3 d,p<0.01)、心律失常发生频率低于A组(VPB:A=2.0±0.4;B=0.8±0.06,p<0.01 events/min,APB:A=1.8±0.3;B=0.3±0.05events/min,p<0.01).实验结束后,A、B两组血清去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和肾上腺素(epinephrine,Epi)水平增高,并高于对照组,B组低于A组(NE:A=2,617±344 pg/ml;B=751±146 pg/ml,P<0.01;Epi:A=1,635±224 pg/ml;B=538±106pg/ml,P<0.01).B组动物心房肌细胞内钙离子浓度较A组低(A=215± 26nmol/L;B=101±15mnol/L,P<0.01).结论:钙离子阻滞剂维拉帕米可阻止心房肌细胞钙离子内流和减少儿荼酚胺释放水平进而延缓慢性多重应激诱导的心律失常和降低其发生率.     

核酸定量检测试验应用于HIV-1感染实验室诊断的探讨

目的:探讨核酸定量检测在HIV-1感染实验室诊断中的应用。方法:选取145例第四代抗原/抗体联合诊断筛查试验为阳性反应的血浆样本,分别用Western印迹和HIV-1核酸定量方法进行检测,综合对比分析2种方法检测结果。结果:Western印迹检出阳性样本120例,不确定样本17例,阴性样本8例;HIV-1核酸定量试验检出结果大于检测限样本131例,其中包括12例Western印迹不确定样本、2例Western印迹阴性样本;有3例Western印迹阳性样本用HIV-1核酸定量检测试验未能检出。结论:核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法;对HIV-1核酸定量检测结果为"TND"的样本,建议加做Western印迹或结合其他补充试验结果进行综合诊断。     

胺碘酮治疗快速心律失常的效果观察

目的:观察对快速心律失常患者应用胺碘酮治疗的效果。方法:搜集2012年10月—2013年10月我院接收的快速心律失常44例患者,随机分为甲组和乙组。对甲组22例应用维拉帕米,对乙组22例应用胺碘酮。观察甲组和乙组的治疗效果,并对比。结果:乙组治疗有效率高于甲组,心率改善情况优于甲组,副作用的发生率低于甲组,差异显著,有统计学意义(P0.05)。结论:胺碘酮治疗快速心律失常的效果较好,治疗有效率较好,副作用少,值得推广。     

芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌核转录因子-κB和ICAM-1表达的影响

目的研究芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌核转录因子-κB(NF-κB)和粘附分子ICAM-1表达的影响,探讨其抗心肌缺血再灌注损伤的可能机制。方法将Wistar大鼠随机分为6组:假手术组、缺血再灌注组(IR组)、溶剂对照组、维拉帕米阳性对照组、芹菜素低、高剂量用药组。采用结扎左冠状动脉前降支制作缺血再灌注模型,心肌缺血30 min,再灌注2 h。免疫组化染色检测心肌组织的NF-κB和ICAM-1的表达.结果芹菜素组可降低心肌组织NF-κB和ICAM-1的表达,与IR组比较有显著差异(P0.05)。结论芹菜素对缺血再灌注心肌的保护作用可能与其减少心肌缺血再灌注后NF-κB和ICAM-的激活有关。     

丙型肝炎病毒准种血清学检测技术的建立

目的:建立一种以血清学为基础的丙型肝炎病毒(HCV)准种检测技术。方法:自20份HCV血清中各挑选30个克隆进行测序比较,分析HCV准种的复杂程度;以HCV准种代表性抗原组合制备免疫芯片,用血清学检测技术分析上述20份HCV血清中的准种变异程度;比较两种方法之间的检出灵敏度和相关性。结果:测序法检出灵敏度为70.0%,血清学检测法检出灵敏度为95.0%,后者显著高于前者(P0.05);两种方法检测结果的相关性为74.7%(P0.01)。结论:血清学检测技术操作简单,且能够反映丙型肝炎患者的HCV准种变异程度,适于临床推广。     

PIK3CA 基因突变的MassARRAY 分子量阵列分析

目的:利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测胃癌组织PIK3CA基因突变。方法:从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组,PCR反应扩增目的基因片段,MassARRAY分子量阵列分析系统检测PIK3CA基因突变;焦磷酸测序验证检测结果。结果:中国西部地区144例胃癌组织样本中PIK3CA_E542K(1624G>A)突变携带率为77.6%,PIK3CA_E545K(1633G>A)突变携带率为84%。MassARRAY分子量阵列分析系统检测结果与焦磷酸测序结果达到100%吻合。结论:建立了MassARRAY分子量阵列分析系统检测基因突变的方法,初步建立了中国西北地区汉族人群胃癌组织PIK3CA基因PIK3CA_E542K(1624G>A)和PIK3CA_E545K(1633G>A)位点突变频数。