林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52柱层析、亲和蓝柱层析和琼脂糖凝胶Sepharose6B柱层析的方法,分离纯化了林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。以凝胶过滤和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为170000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为42500,表明林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶由四个相同的亚基组成。该酶加氨反应最适pH为9．0,脱氨反应最适pH为9．5,加氨反应和脱氨反应的最适温度均为50℃。加氨反应丙氨酸脱氢酶的表现米氏常数km值为：丙酮酸2．08×10－4mol／L,NH4+2．00×10-2mol／L,NADH2．38×10-5mol／L;脱氨反应的Km为：L-Ala1．43×10-2mol／L;NAD+6．67×10-5mol／L。     

家蚕后部丝腺线粒体DNA的制备

本文首次报道了制备家蚕,五龄初期幼虫后部丝腺线粒体DNA的结果。后丝腺匀浆后,以600g和15,000g差速离心,得到完整离体线粒体。在高渗条件下,以牛胰 DNase Ⅱ处理污染的核DNA。碱性SDS裂解线粒体后,经RNase处理,并通过Sepharose 2B凝胶柱分部,便得到可供电镜分析与限制性内切酶消化的线粒体DNA制品。初步结果表明,家蚕后丝腺mtDNA为环状分子。分子量较大,约为11×10~6d的2倍、3倍和4倍。每条丝腺约含0.5微克。每个线粒体约含3×10~(-3)微克,大概有2—4个拷贝。     

甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯及其生物化学特性的研究

本研究工作中,建立了一个有效的甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯程序,解决了该病毒粒体易于聚集难以提纯的问题,其操作要点是,(1)通过Sepharose 2B柱层析代替超离心,有效地除去一些小分子量核酸杂质;(2)经PEG再次沉淀浓缩后,调整pH至酸牲(pH3.0),使病毒充分悬浮以减少凝聚;(3)在病毒等电点(pH4.8～4.9)条件下,进一步沉淀以纯化病毒。根据病毒提取物的OD260/OD280比值,算出核酸含量约4.5％。核酸电泳出现4条带,分子量分别为:2.25×10~(?),1.8×10~(?),1.05×10~(?),0.75×10~(?)道尔顿。病毒提取物经超速离心出现4个界面,沉淀系数分别为,200.8S,165S,125.8S,100S。说明甜菜坏死黄脉病毒可能是4组分病毒粒体。病毒粒体含一蛋白亚基,分子量约为2.05±0.05×10~4道尔顿,由16种共199个氨基酸组成。     

志贺氏菌属弗氏2a染色体基因文库的构建

以λ噬菌体EMBL3作载体,用体外包装技术构建了志贺氏菌属弗氏2a染色体基因文库。该体外包装系统的包装效率达1.6×10~2pfu/μg DNA,重组噬菌体的产量达2×10~6pfu/μg DNA。对重组噬菌体进行了遗传分析,即分别对7个标记(leu,pro,his,arg,thr,purIaroA)作了测定。测得当噬菌体母液的效价为8.7×10~8pfu/ml时,带有以上标记的重组噬菌体的效价为5×10~4-8.2×10~5pfu/ml。这个令人满意的结果为尔后克隆志贺氏菌属弗氏2a染色体上的与群抗原3,4和型抗原Ⅱ有关的基因打下了基础。     

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅵ.水稻、小麦PAL的纯化及基本特性

分离和纯化了的水稻和小麦黄化苗中的PAL,经聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验均为单一的蛋白带。水稻、小麦的PAL都具有一定的耐热性,但前者略高于后者;两者的最适pH都在碱侧,前者为9.2,后者为8.8;并均能被巯基试剂NEM所抑制。此外,水稻的PAL比活远较小麦的高;水稻只有一个K_m值,为5.94×10~(14)M,而小麦则有二个,即K_m~L=0.625×10~(-4)和K_m~H=3.1×10~(-4)M。分析不同来源PAL的氨基酸百分组成,发现水稻的酸性氨基酸成分少于小麦;而中性及碱性氨基酸成分则高于小麦。用SDS电泳测得小麦亚基分子量为70,000而水稻则为57,500,推测小麦、水稻PAL全酶分子量分别为280,000与230,000道尔顿。     

氧化硫硫杆菌质粒的分离

用碱法对分离到的7株氧化硫硫杆菌进行质粒检测,在6株中分离到了18个质粒,质粒DNA的分子量为1.3×10~4-98×10~6。     

幽门螺旋菌在双相培养基中生长特性的研究

本文观察了幽门螺旋菌在固体及液体—固体双相培养基上生长的特性,37℃72小时培养后,定量实验表明,固体培养基上菌数为1.02×10~2cfu/ml,而双相培养基上则为1.14×10~4cfu/ml;用血液双相培养基,对CP进行了生长曲线的测定,从0小时加入1.02×10~2cfu/ml开始,按每天平皿活菌计数,共5天(24、48、72、96、120、144h)分别为2.5×10~2cfu/ml,4.97×10~2cfu/ml,1.14×10~4cfu/ml,1.24×10~5cfu/ml,2.87×10~5cfu/ml,9.75×10~4cfu/ml以后逐日下降;液相培养液24—144小时pH测定,pH由7.2下降至6.4—6.9。     

啤酒酵母和产朊假丝酵母属间原生质体融合子的筛选

利用不可逆生化抑制剂碘乙酸抑制一亲株细胞的生理活性和利用两亲株细胞间生理性状的差异性,进行啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)原生质体融合子的筛选,属间原生质体融合率为3.47×10~(-6)。经菌落形态比较,碳化合物的同化和发酵,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色,产孢试验和自然的核分离实验证明,融合子分三种类型:87.21%产朊假丝醇母型;9.02%啤酒酵母型;3.77%真正核融合子型。     

扁刺蛾核型多角体病毒的形态结构与某些生化特性的测定

扁刺蛾核型多角体病毒是一种单粒包埋型的杆状病毒,在扫描电镜下呈不规则多面体。病毒多角体大小不一致,平均直径为0.59μ。病毒粒子为340×85nm. 经SDS—PAGE分析,病毒的多角体蛋白主带分子量为29500道尔顿;病毒粒子的结构蛋白具有25条多肽,分子量为17.8～69.5×10~4道尔顿。病毒多角体蛋白氨基酸组成中富含Asp和Glu,而His、Cys、Met的含量却很低。病毒DNA的分子量为67.89×10~6道尔顿。     

分月扇舟蛾颗粒体病毒的结构多肽

采用垂直板不连续SDS-PAGE分析了分月扇舟蛾(Clostera anastomosis简称Cas)颗粒体病毒的结构多肽,结果表明,经Sepharose-6B柱层析的颗粒体蛋白仅有一条主肽,其分子量为32×10~3d;病毒粒子的结构多肽至少有23种其分子量范围在13—85×10~3d之间。采用PAS染色法测得Vp_(34)、Vp_(31)、Vp_(10)三条主带呈弱阳性反应,可认为有糖旦白有在的可能性。     

地中海诺卡氏菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分部沉淀、DEAE纤维素-52柱层析和亲和蓝柱层析的方法,分离纯化了地中海诺卡氏菌(Nocardia mediterranei)U-32丙氨酸脱氢酶(ADH),用聚丙烯酰胺凝肢电泳鉴定为单一组份。以聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳测得丙氨酸脱氢酶的分子量为228000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为38000,表明地中海诺卡氏菌U-32丙氢脱氢酶由六个相同的亚基组成。ADH加氨反应最适pH为8．5,脱氨反应最适pH为11．5,ADH的pH稳定范围在pH 7．5-11．5。脱氨反应的最适温度为50℃。ADH的米氏常数KM为：丙酮酸4．88×10-4mol／L;NH+44．03×10-3Mol／L;NADH 6．02×10-5Mol／L;L—Ala7．45×10-3mol／L;NAD+6．67×10-5mol／L。 Hill作图法求得ADH的Hill系数n为：ADH对丙酮酸、NADH和NAD+的Hill系数都为1;对L—Ala和NH4+的Hill系数n值分别为0．52和0．51,ADH对L—Ala和NH+4有负协同效应,由此初步推测ADH是一个调节酶。     

鲤鱼、鲫鱼肌细胞线粒体DNA的限制性内切酶酶切图谱比较

鲤鱼肌细胞线粒体DNA经限制性内切酶Bam HI和Eco RI酶切后,皆被切成3个片段;鲫鱼肌细胞线粒体DNA经上述两种限制性内切酶酶切后,皆被切成2个片段。通过琼脂糖凝胶电泳对这些片段进行测定,并分别画出它们的酶切图谱。鲤鱼肌细胞线粒体DNA的分子量约为10.50×10~6道尔顿,有16.99千碱基对;鲫鱼肌细胞线粒体DNA的分子量约为9.40×10~6道尔顿,有15.21千碱基对。     

油桐尺蠖核型多角体病毒结构多肽的分析

本文采用不连续系统的垂直板SDS—PAGE对油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria Guenee Nuclear Polyhedrosis Virus简称BsNPV)的多角体蛋白、病毒粒子的结构多肽进行了分析。结果表明,经EDTA和热处理的多角体蛋白仅有一条主带,其分子量为31×10~3±1000d;病毒粒子至少有23种结构多肽,其分子量的范围在13—107×10~3d之间。用PAS染色测定多角体蛋白、病毒粒子中的糖蛋白,结果呈阴性反应。     

尖镰孢青霉素V酰化酶的纯化及性质

通过硫酸铵沉淀、硅藻土吸附、DEAD-纤维素离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤,由尖镰孢(Fusarium oxysporum)FP941培养滤液中得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的青霉素V酰化酶。酶作用最适pH为7.0,最适温度为50℃。酶在pH6.0—8.0和42℃以下稳定。酶作用青霉素V的米氏常数Km为4.65×10~(-3)mol/L;苯氧乙酸是酶的竞争性抑制剂,抑制常数Ki为23.87×10~(-3)mol/L;6-氨基青霉烷酸是酶的非竞争性抑制剂,抑制常数Ki为30.01×10~(-3)mol/L。某些金属离子对酶有抑制作用,Fe~(2+)最强,其次是Hg~(2+)和Cu~(2+)。用SDS凝胶电泳测定酶亚基分子量为77600;用分子筛测定自然酶分子量为148000。     

小麦丛矮病毒核酸的研究

小麦丛矮病毒(Wheat Rosette Stunt Virus.以下简称WRSV)的核酸可以通过SDS-尿素处理和苯酚抽提的方法分离获得。琼脂糖凝胶电泳测得核酸的分子量约为4.4×10~6道尔顿。核酸温度熔解曲线的测定证明它是一个单链的RNA。在电子显微镜下可观察到两种长度的核酸分子,一种长度约为3.5～4.0μ,相当于碱基数为14,000～16,000,另一种约为其一半;并能看到RNA的一些二级结构。     

北京苜蓿花叶病毒H-10分离物的研究II.病毒外壳蛋白质及病毒核酸各组分的分离

分离纯化了AMV-H-10 的核酸和外壳蛋白质,测定了核酸的生物活性和分子量。外壳蛋白质分子量约为24,500。四种核酸的分子量：RNA．-1.3×106、RNA2-1.1 x 106、RNA3-0．80×106、RNA4一0．48×106。这数据与Hull所测定的基本相同,但比实际的分子量偏高,文中对此进行了讨论。用电泳洗脱法分离纯化了H—10的RNA3.4.5;RNA,是卫星RNA还是病毒基因组在提纯过程中的降解产物,有待进一步证明。     

羊栖菜中褐藻糖胶的组分分离及分析

为了确定羊栖菜褐藻糖胶中的活性组分 ,用分子量结合硫酸化程度的分级方法将其分成不同组分。经热水抽提的羊栖菜多糖 ,将去除褐藻胶、海带淀粉后剩余的褐藻糖胶经过DEAE—Sepharose离子交换色谱柱和Sepharose 4B凝胶层析柱被分成 5个褐藻糖胶组分。 5个组分中硫酸基和岩藻糖近似的分子数量之比分别为 1.863、0 .0 68、1.2 2 9、1.62 9,1.0 10 ;平均分子量分别为 2 .0× 10 4 、2 .2× 10 4 、8.2× 10 4 、2 1.4× 10 4 、32 .0× 10 4 ;百分含量分别为 8.6%、2 2 .9%、4 8.5 %、5 .7%、14.3%。     

人绒毛膜促性腺激素酶解片段抗原性的研究

 本文应用制备电泳从人绒毛膜促性腺激素(hCG)的嗜热菌蛋白酶酶解混合物中,分离制备出了三个hCG酶解片段。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶标免疫染色鉴定,表明它们具有较高纯度。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了这三个hCG酶解片段的表观分子量分别为4.35×10~4,4.20×10~4和4.00×10~4;而完整hCG分子的表观分子量为4.75×10~4。用DNS-Cl法测知这三个酶解片段各含有两个N末端氨基酸,分别为Leu/Gly,Ile/Gly和Val/Gly,这些末端与完整hCG的N末端氨基酸不同。用ELISA法测定了这三个酶解片段对抗hCG单克隆抗体9C_2的反应性,发现它们的抗原活性分别是完整hCG分子的1.44倍、1.50倍和1.63倍。表明经酶解后,片段的抗原活性有所提高,这可能是其抗原决定区经酶解后向外暴露,使单克隆抗体更加可及之故。     

充分利用福建滨海沙滩植被资源发展种植业

福建滨海沙滩位于北纬23°37′—27°10′范围,面积约5.33×10~4ha,已植防护林近2.0×10~4ha,尚约有3.34×10~4ha 未开发利用,其中分布于闽江口以南岸段和岛屿约2.86×10~4ha,     

粘虫胆碱酯酶的研究

本文研究了用Asch-DTNB比色法测定粘虫胆碱酯酶活力的方法。其反应的最佳条件是:反应时间为10～20min,反应温度为30℃左右,pH为7.5左右。敌敌畏和灭多虫对粘虫胆碱酶的K_i值分别为2.4×10~(-5)mol~(-1)min~(-1)和6.53×10~(-4)mol~(-1)min~(-1)。