尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶是一种具有纤维蛋白溶解活性的蛋白水解酶 ,常具有出血活性 ,因此 ,寻找具有纤维蛋白溶解活性 ,又无出血活性的纤维蛋白溶解酶十分必要。作者对尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶(NHFLE)进行了分离纯化及其理化性质的研究。应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化收集具有酶活性的蛋白峰 ,用 1 2 % SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳作纯度鉴定和测定纤维蛋白溶解酶的相对分子量 ,采用纤维蛋白平板法测定活性。结果从尖吻蝮蛇毒 NHFLE的分离纯化得的单一峰纤维蛋白溶解酶为单一条带 ,其相对分子量为 2 50 0 0 ,没有…     

王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用

目的 探讨王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用。方法 王锦蛇血清与不同剂量的尖吻蝮蛇毒分别混合后,注射到小鼠背皮下,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗出血活力;腹腔注射此混合物后,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗毒效价;先后注射尖吻蝮蛇毒和王锦蛇血清,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒引起的死亡、组织损伤和炎症的抑制、保护和治疗作用。结果 1ml王锦蛇血清可完全抑制10mg（干重）的尖吻蝮蛇毒的出血活力;1ml王锦蛇血清可中和11mg（干重）尖吻蝮蛇毒的致死活力;王锦蛇血清对由尖吻蝮蛇毒引起的致死、组织损伤和炎症有显著的抑制、保护和治疗作用。结论 王锦蛇血清是尖吻蝮蛇毒的强抑制剂,可能成为未来新的蛇伤治疗药物的原料。     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacutacin的纯化及其性质

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化得到抗血小板凝集蛋白agkisacutacin ,纯化的agkisacutacin由分子量为 1 4kD和 1 5kD的 2条肽链通过二硫键连接 ,能有效抑制ristocetin诱导的血小板凝集 (IC5 0 为 1 8.5mg/L) ,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集 (IC5 0 为 1 .2 2 g/L) ,但对ADP、胶原诱导的血小板聚集无影响。agkisacutacin不具有纤溶活性、抗凝活性、磷脂酶A2 活性和出血活性 ,是一种潜在的安全、有效的抗血小板性栓塞的药物     

2种国产蝮蛇毒降纤酶的降纤作用比较

目的　比较尖吻蝮蛇毒降纤酶及白眉蝮蛇毒降纤酶降凝血因子 的作用。　方法　选用 1个厂家生产的以尖吻蝮蛇毒为原料的降纤酶及 2个厂家生产的以白眉蝮蛇毒为原料的降纤酶分别治疗 1 7例、 4 0例、 31例急性脑梗死。用降纤酶 1 0 u加入 0 .9%生理盐水 2 5 0 ml中 ,静脉滴注 ,1 h滴完 ,每天 1次 ,共 3天 ,每次用药前用凝固法测定凝血因子 。　结果　 2种白眉蝮蛇毒降纤酶降纤作用不明显 ,尖吻蝮蛇毒降纤作用明显且迅速。用药前 Fg为 4 .0 4± 1 .2 g/L,用药 1次后 Fg降至 2 .1 1± 0 .6 g/L,P <0 .0 1。　结论　尖吻蝮蛇毒降纤酶降纤作用明显优于白眉蝮蛇毒降纤酶。     

尖吻蝮蛇毒对小鼠肾脏损伤的研究

尖吻蝮(五步蛇)Agkistrodonacutus是我国特有的毒蛇,尖吻蝮蛇毒除引起局部出血肿胀和坏死等症状外,临床常伴有肾功能衰竭或尿毒症的症状。为给临床治疗提供依据,本实验对尖吻蝮蛇毒引起损伤后肾脏的改变,用小鼠作了试验观察,材料与方法取体重20克左右的小白鼠。每只注入40微克的尖吻蝮蛇毒,先将粗蛇毒溶子生理盐水中,使每0.1毫升生理盐水含     

墨旱莲对4种蝮蛇毒引起的炎症和出血的影响

目的探讨墨旱莲提取液对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒所致的炎症和出血的影响。方法应用短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒所致大鼠足跖肿胀的致炎模型,观察墨旱莲提取液对蛇毒所致大鼠足跖肿胀的影响。墨旱莲提取液分别与不同蛇毒混合,给小鼠腹部皮下注射,观察其对蛇毒引起的小鼠皮下出血的影响。结果墨旱莲提取液15g／kg连续2次灌胃给药,对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒或尖吻蝮蛇毒所致大鼠足跖肿胀的急性炎症造模和短尾蝮蛇毒棉球肉芽肿的慢性炎症造模(20g／kg)均有明显的抑制作用,对这些蛇毒引起的小鼠皮下出血也能明显抑制。结论墨旱莲提取液对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒引起的炎症和出血均有明显的抑制作用。     

尖吻蝮蛇毒中精氨酸脂酶的分离纯化与性质研究

目的：从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出精氨酸脂酶并进行性质研究。方法：利用亲和层析、DEAE—Sepharose FF、Superdex 75柱对尖吻蝮蛇毒进行分离纯化。结果：分离纯化出的2个精氨酸脂酶活性组份分子量分别为36000、30000,它们的HPLC纯度也都达到97％以上。结论：为其临床应用打下了基础。     

不同地理单元尖吻蝮蛇毒蛋白组分比较研究

目的探讨不同地理单元尖吻蝮蛇毒蛋白组分有无差异性。方法采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)方法,比较采自安徽黄山(黄山单元)和贵州梵净山(西部单元)尖吻蝮蛇毒组分。结果梵净山尖吻蝮的蛇毒蛋白表达量和条带数目均高于黄山尖吻蝮。结论黄山单元和西部单元的尖吻蝮蛇毒蛋白组分具有差异性。     

尖吻蝮蛇毒去纤酶及其临床应用研究

Ottyang,C.等(1967)从尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒中分离纯化得到凝血酶样成分,分子量33500,由17种263个氨基酸组成,具有体内去纤作用,但未见用于临床的报道。杉原久义等(1978)也从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到了一个促凝组分,分子量52000,具有精氨酸酯酶和凝血酶活性,未见体内血液学效应及临床应用的报道。我们从1974年起,对尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶进行7较为系统的研究,并研制成“去纤酶注射液”,于1978年首先用于临床,1981年鉴定通过。这是我国最先研制并用于临床的蛇毒酶制剂。它由四个凝血酶样同工酶组成,其分子量分别是33500,68000,19500,30000;它们均由17种氨基酸组成,但组成     

尖吻蝮蛇毒研究进展

蛇毒是从毒蛇头部毒腺分泌的有毒液体,是一种重要的天然动物毒素,其主要成分是蛋白质,具有广泛的生物学活性,现已被应用于溶栓、抗癌、止血、止痛等方面。传统上蛇毒分为神经毒、血循毒与混合毒。尖吻蝮是我国十大剧毒蛇之一,其毒液主要作用于血液系统,引起出血、肿胀与局部组织坏死。已经发现尖吻蝮蛇毒多属丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶屯家族,部分蛋白质可能属于去整合素家族[1]。现就尖吻蝮蛇毒生理活性及药理应用等方面的研究进展综述如下。     

酶标法观察尖吻蝮出血毒素Ⅰ对毛细血管的作用

从尖吻蝮蛇毒中分离得到的出血毒素Ⅰ(AaHI)具有破坏血管系统并造成广泛出血的作用。本文报道用辣根过氧化物酶标记的AaHI可以特异地结合在毛细血管内皮细胞外膜上,由此推测内皮细胞膜上存在HaHI的受体或作用位点。     

酶标法观察尖吻蝮出血毒素I对毛细血管的作用

从尖吻蝮蛇毒中分离得到的出血毒素I(AaHI)具有破坏血管系统并造成广泛出血的作用.本文报道用辣根过氧化酶标记的AaHI可以特异地结合在毛细血管内皮细胞外膜上,由此推测内皮细胞膜上存在HaHI的受体或作用位点.     

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

蛇毒含有多种酶类和不同生理与药理活性蛋白。经研究证实它具有抗肿瘤作用 ,能对多种肿瘤细胞有杀伤和抑制作用。作者为研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病 Jurkat细胞凋亡作用并探讨其机理 ,采用 MMT法测定半数抑制浓度( IC50 )及生长曲线 ,用流式细胞仪 ( FCM) AnnexinV FITC/PI法检测细胞凋亡率 ,PI染色法检测细胞周期 ,用流式细胞计 FCM及 Western- blot检测Jurkat细胞 Bcl- 2蛋白表达。结果 :浙江蝮蛇毒处理后 Jurkat细胞生长受到明显抑制 ,且呈剂量依赖关系。 48h IC50 值为 ( 9.78± 0 .38) μg/ml。给浙江蝮蛇毒 5μg/ml能诱导…     

尖吻蝮蛇毒中一种具有抗补体活性金属蛋白酶的分离纯化及部分性质鉴定

通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD,等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血,且该作用具有量效和时效性.AACI-I可依次水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,此活性能被EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline完全抑制,不受PMSF、SBTI作用影响.同时,该蛋白无精氨酸酯酶活性,提示AACI-I是金属蛋白酶.另外,AACI-I具有azocasein水解活性和水肿活性,当0.01μg/g AACI-I注射小鼠足趾,其诱导肿胀率约为(14.06±6.78)%,而小鼠皮下注射2.6μg/g AACI-Ⅰ后没有发现其有出血毒活性.     

野花生豆凝集素的纯化和性质

用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,可从野花生豆(Crotalarta mucronata)的种子中分离纯化出对人类A型血专一凝集的凝集素。该凝集素可用pH30.,Gly-HCl-1mol/L NaCl溶液解吸附。纯化的凝集素在PAGE或SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,表明凝集素分子内只有一种亚基。用SDS-PAGE测得其亚基分子量为49,000。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含甘氨酸和谷氨酸,不合甲硫氮酸。纯化的野花生豆凝集素(简称CML)含有4.11％的中性糖。它对人A型血细胞有强烈凝集作用,对AB型血有弱凝集作用,但对B型和O型血均不凝集。其对A型血细胞的凝集作用可被N-乙酰半乳糖胺抑制,但对AB型血则无抑制作用。CML是一个促有絲分裂原,对人外周血中淋巴细胞有促有絲分裂作用。     

一株产凝集素的三叶半夏内生真菌的研究

研究三叶半夏内生真菌及其凝集素,旨在为半夏内生真菌及其凝集素的开发利用提供依据。对三叶半夏块茎内生真菌分离、纯化,液体发酵培养代谢产物,无水乙醇提取总蛋白,兔血红细胞检测其凝集活性,筛选出菌株gs1,其总蛋白对兔血红细胞凝集活性显著。使用甘露聚糖-Sepharose 4B亲和层析柱纯化菌株gs1总蛋白,得到凝集素。Brandford法定量检测分析表明,1000 ml gs1发酵培养液中含有9.58 mg 凝集素。SDS-PAGE 电泳分析显示该凝集素为单一条带,分子量约为12 kDa。凝集活性实验表明,该凝集素对兔、大鼠和小鼠的血红细胞具有凝集作用,对兔血红细胞效果最显著;而对人（A＼B＼O＼AB型）和鸡的血红细胞无凝集作用。糖结合活性实验表明,甘露糖对该凝集素的凝集活性具有抑制作用。通过初步分类鉴定,菌株gs1为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,曲霉属。     

尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2的表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2 (A .aBPLA2 )基因克隆至温敏表达载体 pBLMVL2 ,在大肠杆菌RR1中成功诱导表达 .表达产物A .aBPLA2 约占细菌蛋白质总量的 2 0 % ,并以包涵体的形式存在 .纯化包涵体后 ,将产物变性、复性 ,然后用FPLCSuperoseTM12纯化 ,产物经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测只有单一条带 .对纯化后的表达A .aBPLA2 进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定 .结果显示 ,表达A .aBPLA2的酶活性与变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶A2 酶活性相近 ,具有类似变性后复性江浙蝮蛇碱性磷脂酶A2 的溶血活性 ,没有抑制血小板聚集活性 .最后对磷脂酶A2 的结构与这些活性的关系进行了讨论     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对血管内皮细胞迁移活性的影响

目的:观察尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(AAVC-Ⅰ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移活性的影响,探讨AAVC-Ⅰ抑制血管生成的可能机制。方法:体外培养HUVECs,分别用AAVC-Ⅰ(0、20、40、80μg/ml)处理细胞后再孵育24 h。划痕实验和趋化小室实验观察AAVC-Ⅰ对内皮细胞迁移活性的影响;采用RT-PCR、Western blot法检测药物作用前后P选择素(P-selectin)和细胞间粘附因子(ICAM-1)mRNA和蛋白水平的变化。结果:与正常组HUVECs比较,AAVC-Ⅰ各浓度组细胞迁移能力都有不同程度降低,P-selectin和ICAM-1 mRNA表达均明显下降。结论:AAVC-Ⅰ可能通过下调P-selectin和ICAM-1 mRNA和蛋白水平抑制内皮细胞迁移活性。     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacuta …

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化离纯化得到抗血小板凝集蛋白ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ,纯化的ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ由分子量为１４ｋＤ和１５ｋＤ的２条肽链通过二硫键连接,能有效抑制ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ诱导的血小板凝集（ＩＣ５０为１８．５ｍｇ／Ｌ）,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集（ＩＣ５０为１．２２ｇ／Ｌ）,但对ＡＤＰ、胶原诱导的血小板聚集无影响。ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉ     

皖南尖吻蝮蛇毒中类去整合蛋白/富含半胱氨酸两结构域cDNA的克隆和表达

为了探讨出血毒金属蛋白酶结构功能关系 ,通过 RT- PCR方法 ,从皖南尖吻蝮蛇( Agkistrodon acutus)毒腺总 RNA中扩增得到编码 P- 型出血毒金属蛋白酶的完整类去整合蛋白和富含半胱氨酸两个结构域 c DNA( AA/DC) .它全长 964bp的 c DNA,开放阅读框架编码 2 1 6个氨基酸残基 ,序列比较分析表明它同来自 Bothrops jararaca的 jararhagin- C、来自 Crotalus atrox的 catrocollastatin- C有很高的同源性 .在类去整合蛋白结构域中 ,Ser- Glu- Cys- Asp( SECD)代替了去整合蛋白中相应部位的 Arg- Gly- Asp( RGD)三肽序列 .将编码区基因克隆入 p GEX- 2 T载体中 ,转化大肠杆菌 TG- 1 ,用 IPTG诱导表达 ,表达产物具有抑制胶原诱导的血小板凝集活性 ,但不抑制ADP诱导的血小板凝集 .该研究为进一步阐述蛇毒金属蛋白酶结构功能关系和药物开发奠定了基础 .