康氏木霉纤维素酶系中Cx酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma kkoningii) 白色变异株 AS 3．4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_xt C_xz C_z3 C_z4)。分离步骤包括Sephadcx G-75凝胶过滤,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharnse亲合层析,SE—Sephadcx C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_xt 与C_xt 的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_xz—C_x4 的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_xt—C_z4“经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC—Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_xz>C_z3>C_z1>C_x4。     

水稻根表固氮螺菌的鉴定

作者从水稻根表分离获得一批固氮细菌,对其中固氮活性较高的菌株R₃₈(固氮活性为429.02n·mol·C₂H₄/ml·hr.)进行形态特征和生理生化等特征的鉴定,确定R₃₈属于巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)     

应用稳定同位素技术分析华北部分地区第三代棉铃虫虫源性质

玉米等C₄植物被认为是华北Bt棉种植区内第三代棉铃虫最重要的天然庇护所,但尚缺乏直接证据。连续2a(2006-2007年)利用杨树把诱集棉铃虫成虫,进行碳稳定同位素比值的测定,并结合棉铃虫成虫捕获时间、虫源的数量比例等,评估C₄植物在华北第三代棉铃虫期间的庇护所功能。结果表明,第三代棉铃虫成虫来源于C₄植物(玉米)的为40.5%-56.8%,与C₃来源的数量上大体相当。但C₄来源的成虫羽化时间比C₃来源的个体明显滞后,呈现出先少后多的特点。结果提示,C₄植物确实是华北第三代棉铃虫重要的庇护所,但存在着时间上与C₃来源的成虫交配不同步而失效的风险;结果建议玉米等天然庇护所作物的种植不仅在面积上要足够,而且播种时间上要充分考虑C₄植物(玉米)来源的敏感棉铃虫个体的发育与C₃植物寄主来源个体的同步性。     

里氏木霉纤维素酶产生条件的研究

通过对培养基、水份含量、氮源、培养时间、培养基的起始PH以及培养温度的研究,测定TrichodermareeseiGAB纤维素酶的C₁酶和Cx酶的酶活,找到了一个最佳的条件,即：稻草粉：花生壳=4：1,物料：水份=2：3,以NH₄Cl、（NH₄）₂SO₄、NH₄H₂PO₄为氮源,起始pH为自然pH（约5．8）,在28℃     

带状采伐后不同时期毛竹林恢复和土壤养分特征

为研究带状采伐毛竹林对竹林恢复和土壤养分的影响,以福建省建瓯市毛竹林为研究对象,设置5 m(处理1,C₁)和7 m(处理2,C₂)2种采伐宽度,以不进行采伐处理为对照(CK),研究采伐后当年新鞭生长期(I时期,2018年10月)和采伐后次年新立竹生长期(Ⅱ时期,2019年6月)新竹生长相关指标和土壤养分变化特征。结果表明：(1)C₁、C₂、CK处理的出笋数量分别为2 227、2 650和1 955株·hm^-2,且C₂与C₁、CK差异显著(P<0.05);退笋率各处理之间无显著差异(P>0.05),表现为C₁2。(2)2种采伐处理的胸径(DBH)显著低于CK,表现为CK>C₂>C₁。(3)采伐后Ⅰ时期和Ⅱ时期相比,土壤全磷(TP)和全钾(TK)含量增加,全氮(TN)和全碳(TC)含量降低;采伐后I时期的C₁、C₂处理中土壤TN、TP、TK和TC含量均大于CK,但采伐后Ⅱ时期的土壤TC含量小于CK。研究认为,带状采伐能提高出笋量和立竹数,增加土壤氮磷钾养分含量;7 m带状采伐竹林恢复状况整体上优于5 m带状采伐。     

早春短命植物鸢尾蒜和准噶尔鸢尾蒜的光合途径

该研究以鸢尾蒜属两种早春短命植物准噶尔鸢尾蒜(Ixiolirion songaricum)和鸢尾蒜(Ixiolirion tataricum)为对象,通过解剖结构、光合参数、稳定碳同位素比值(δ¹³C)和光合关键酶活性分析二者的光合途径。结果发现：(1)显微结构和超微结构显示,两种短命植物的叶脉维管束鞘细胞1层、排列较紧密,鞘细胞内含有较多叶绿体且多离心分布,类似C₄花环结构。(2)准噶尔鸢尾蒜和鸢尾蒜最大净光合速率分别为14.81和15.04 μmol·m^-2·s^-1;两者的CO₂补偿点较低,分别为3.57和2.54 μmol·mol^-1,δ¹³C分别为-25.36±0.55‰和-25.76±1.38‰,光合酶PEPC/Rubisco比值分为别0.244和0.322。(3)最大净光合速率、δ¹³C和PEPC/Rubisco比值均说明两种植物为C₃光合途径,但二者均具有类似C₄的维管束鞘结构、较低的CO₂补偿点和暗呼吸速率,并具有高于部分C₃和C₃ C₄中间型植物的PEPC/Rubisco比值,表明两种短命植物的光合途径并非典型的C₃途径,而是C₃ C₄中间型。     

耐热酵母与酿酒酵母原生质体融合的研究

酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)396是利用甘蔗糖蜜生产酒精的生产菌株,假丝酵母(Candida sp·)C₆是我们从云南温泉底泥中筛选到的一株能在45℃生长良好的耐热酵母,我们应用原生质体融合技术进行了两菌株属间融合的研究。通过亚硝基胍(NTG)诱变得到的营养缺陷型菌株396(arg^－)和C6(lys^-),其融合频率为O．91×10^-5。从检出的融合子中挑选6株进行考核、其细胞体积平均为亲株的1．3倍,DNA含量平均为亲株的1．6倍,培养特征、形态、大小和生理生化特征表现不一,特别是糖类的同化试验。除F₂、F₁₄外,其他4株可以排除异核体形成的可能性。比较了在28℃,40℃和45℃培养条件下出发亲株396、C₆、直接亲株396(arg^-)C₆(lys^-)和融合子F₁、F₇、F₁₂,F₁₃的生长曲线、基质利用率和乙醇产率等,得到一株在40℃培养条件下糖的利用率为94．3％、乙醇产量为59．7g／L的属间融合株F₁₃。     

Differential inhibition of photosynthesis under drought stress in <Emphasis Type="Italic">Flaveria</Emphasis> species with different degrees of development of the C<Subscript>4</Subscript> syndrome

The effect of drought stress (DS) on photosynthesis and photosynthesis-related enzyme activities was investigated in F. pringlei (C₃), F. floridana (C₃–C₄), F. brownii (C₄-like), and F. trinervia (C₄) species. Stomatal closure was observed in all species, probably being the main cause for the decline in photosynthesis in the C₃ species under ambient conditions. In vitro ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (RuBPCO) and stromal fructose 1,6-bisphosphatase (sFBP) activities were sufficient to interpret the net photosynthetic rates (P _N), but, from the decreases in P _N values under high CO₂ (C _a = 700 μmol mol^{− 1}) it is concluded that a decrease in the in vivo rate of the RuBPCO reaction may be an additional limiting factor under DS in the C₃ species. The observed decline in the photosynthesis capacity of the C₃–C₄ species is suggested to be associated both to in vivo decreases of RuBPCO activity and of the RuBP regeneration rate. The decline of the maximum P _N observed in the C₄-like species under DS was probably attributed to a decrease in maximum RuBPCO activity and/or to decrease of enzyme substrate (RuBP or PEP) regeneration rates. In the C₄ species, the decline of both in vivo photosynthesis and photosynthetic capacity could be due to in vivo inhibition of the phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) by a twofold increase of the malate concentration observed in mesophyll cell extracts from DS plants.     

What is the usual internal carbon dioxide concentration in C<Subscript>4</Subscript> species under midday field conditions?

The carbon dioxide concentrating system in C₄ photosynthesis allows high net photosynthetic rates (P _N) at low internal carbon dioxide concentrations (C _i), permitting higher P _N relative to stomatal conductance (g _s) than in C₃ plants. This relation would be reflected in the ratio of C _i to external ambient (C _a) carbon dioxide concentration, which is often given as 0.3 or 0.4 for C₄ plants. For a C _a of 360 μmol mol⁻¹ that would mean a C _i about 110–140 μmol mol⁻¹. Our field observations made near midday on three weedy C₄ species, Amaranthus retroflexus, Echinochloa crus-galli, and Setaria faberi, and the C₄ crop Sorghum bicolor indicated mean values of C _i of 183–212 μ mol mol⁻¹ at C _a = 360 μmol mol⁻¹. Measurements in two other C₄ crop species grown with three levels of N fertilizer indicated that while midday values of C _i at high photon flux were higher at limiting N, even at high nitrogen C _i averaged 212 and 196 μmol mol⁻¹ for Amaranthus hypochondriacus and Zea mays, respectively. In these two crops midday C _i decreased with increasing leaf to air water vapor pressure difference. Averaged over all measurement days, the mean C _i across all C₄ species was 198 μmol mol⁻¹, for a C _i/C _a ratio of 0.55. Prior measurements on four herbaceous C₃ species using the same instrument indicated an average C _i/C _a ratio of 0.69. Hence midday C _i values in C ₄ species under field conditions may often be considerably higher and more similar to those of C₃ species than expected from measurements made on plants in controlled environments. Reducing g _s in C₄ crops at low water vapor pressure differences could potentially improve their water use efficiency without decreasing P _N.     

内蒙古草原常见植物叶片δ13C和δ15N对环境因子的响应

在中国东北样带沿线的内蒙古草原地区采集了一些常见植物的叶片样品,并测定其δ¹³C和δ¹⁵N值,分析了其统计学特征以及对环境因子(年平均降雨量和温度)的响应模式。发现东北样带草原区同时存在C₃和C₄两种不同光合途径的植物,但是C₃植物占主导地位,C₄植物数量有限。C₃植物叶片δ¹³C随着年平均降雨量和年平均温度的升高而显著降低,反映了此区域C₃植物δ¹³C受控于降水量和温度。C₄植物的叶片δ¹³C值随着降雨量的增多而有轻微升高的趋势,但是C₄植物的叶片δ¹³C值对年平均温度的响应不敏感。不论对C₃植物还是C₄植物而言,叶片δ¹⁵N都随降雨量增加而显著降低,即干旱区的植物叶片δ¹⁵N大于湿润地区,这说明降水是影响植物叶片δ¹⁵N的一个重要因素。然而两者叶片δ¹⁵N对温度的响应不敏感。     

香槟酒酵母的发酵性能试验研究

对16株香槟酒酵母的发酵性能进行试验.结果表明,C₁、C₃、C₄菌株的性能优良,具有发酵活性高,泡沫细腻,絮凝性强等优点,适于香槟酒(起泡酒)二次发酵。     

Smac/DIABLO在过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡中的作用

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢(H₂O₂）所致C₂C₁₂肌原细胞凋亡中的作用,采用Hoechst 33258染色,观察H₂O₂ (0.5 mmol/L)处理C₂C₁₂肌原细胞不同时间后,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H₂O₂是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase-3和Caspase-9的活化,转染Smac/DIABLO基因,观察Smac/DIABLO过表达对H₂O₂所致的C₂C₁₂肌原细胞凋亡的影响.结果表明:H₂O₂处理1 h后,Smac/DIABLO从C₂C₁₂肌原细胞线粒体释放入胞浆,2 h更明显;H₂O₂处理4 h后,Caspase-3和Caspase-9活化,12 h达高峰;H₂O₂处理24 h后,C₂C₁₂肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变,凋亡核百分率明显升高,DNA电泳出现明显“梯状”条带.与单纯过氧化氢损伤组相比,Smac/DIABLO高表达的C₂C₁₂肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase-3和Caspase-9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显.结果表明,H₂O₂可导致Smac/DIABLO从C₂C₁₂肌原细胞线粒体释放,促进Caspase-9和Caspase-3的活化而促进细胞凋亡的发生.     

C60对体外培养癌细胞的光致作用研究

研究结果表明用C₆₀-磷脂酰胆碱与体外培养的HeLa细胞融合后,以4 000 lx光强度激发C₆₀(C₆₀浓度20 mg／L)对HeLa细胞具有显著的光致杀伤作用.生化测定证实光激发C₆₀导致膜蛋白巯基含量减少、膜脂过氧化、丙二醛含量增高,SDS-PAGE证明膜蛋白交联,荧光偏振显示膜流动性降低,电镜超微膜结构破坏,经MTT法检测,大部分细胞死亡.C₆₀的强烈光致作用证实了Arbogast等认为光激发C₆₀可产生单线态氧的观态.     

PKCγ过表达诱导C3H10T1/2细胞生长失控的初探

通过DNA重组构建蛋白激酶C_γ(PKC_γ)亚类的重组质粒并经基因转染技术和DNA印迹、蛋白质印迹与PKC活性分析,获得了过表达PKC_γ的C₃H₁₀T_1/2细胞——NCP4.NCP4细胞生长速率提高,流式细胞光度术检测表明,NCP4细胞G1期百分率下降,S期和G2+M期百分率升高,与对照组细胞相比,血清依赖性明显下降,贴壁依赖性降低,在软琼脂中形成小集落,出现部分转化表型.进一步检测,首次观察到NCP4细胞中癌基因c-sis表达明显增强,这可能是NCP4细胞血清依赖性下降的分子机理之一.实验表明,在正常C₃H₁₀T_1/2细胞中PKC_γ的过表达可直接导致细胞增殖加速并可诱导出现部分转化特征.     

云贵高原喀斯特坡耕地土壤微生物量 C、N、P空间分布

土壤微生物是地球生物演化进程中的先锋种类,具有重要的生态修复功能,但空间分布格局是否存在的争议很大。以云贵高原典型喀斯特坡耕地为对象,基于网格法取样,用经典统计学和地统计学综合分析了土壤微生物生物量的空间变异特征。结果表明,云贵高原喀斯特坡耕地土壤微生物生物量碳(C_mic)、磷(P_mic)以及碳氮比(C_mic/N_mic)适宜,氮(N_mic)的含量较低,变异均很大,空间自相关性明显,最佳拟合模型均为指数模型。块金值C₀较小(0.0016-0.0087),C₀/(C₀+C)均<25%(2.6%-10.2%),变程a较短(22.2-51.0 m),其强烈的空间变异主要由结构性变异引起。Kriging等值线图表明,C_mic、N_mic和C_mic/N_mic的高值区分布在坡的中上部,P_mic的高值区则在坡的中下部和坡脚。云贵高原喀斯特坡耕地土壤微生物不仅存在着小尺度的空间分布格局,而且不同土壤微生物属性的空间分布不同。     

西藏冬虫夏草无性型的分子生物学研究

从西藏采集的冬虫夏草子实体中分离出 3个菌株C3、C4、C5,通过培养特征的研究以及采用分子生物学方法 ,以rDNAITS区为分子指标 ,与冬虫夏草 [Cordycepssinensis(Berk .)Sacc.) ]的有性世代及中国被毛孢 (HirsutellasinensisLiu ,Guo,Yu&Zeng)进行比较分析 ,发现C4的培养特征与C3、C5 完全不同 ,其序列与冬虫夏草的相似率为 93 %,与中国被毛孢的相似率为 94%,而C3、C5 与冬虫夏草的相似率很低 (分别为 5 5 %和 6 9%) ,从而证明C4是西藏冬虫夏草的无性型 ,为中国被毛孢。     

C3和C4植物寄主对华北地区棉铃虫越冬代和第一代的影响

确定华北越冬代棉铃虫虫源及其对第一代棉铃虫种群的影响是制定棉铃虫防治策略的基础。以越冬代棉铃虫蛾翅的稳定同位素δ¹³C为天然标记直接判定这些成虫的幼虫期寄主类型,并将雌虫接到春小麦植株上,调查其产卵、孵化、幼虫发育至化蛹、羽化等特征。结果表明,越冬代来自C₃植物(主要为棉花)的成虫个体数量占全部越冬羽化种群的53.1%,所产生的下一代老熟幼虫也较C₄来源的多(55.1%);雌蛾受精率都比较高;卵孵化率较高(52.9%>41.6%);幼虫发育在低龄阶段较比后者快,存活率低,但在高龄幼虫阶段相对后者慢,存活率高;与C₄植物(主要玉米)的来源个体后代的幼虫发育总历期接近,总存活率也相近。显示寄主植物小麦提供的营养条件在第一代棉铃虫的幼虫发育中具有决定性意义,即小麦只在特定阶段才适合幼虫的发育;而且不论是C₃还是C₄寄主来源的越冬代棉铃虫已经适应了这一限制。有效地评价了玉米和棉花等寄主植物对华北地区越冬代和次年第一代棉铃虫的影响,对于分析越冬代棉铃虫的虫源性质和第一代棉铃虫的防治及Bt抗性的治理有重要参考价值。     

酵母tRNAAla中修饰核苷酸T54,Ψ55的生物功能

酵母tRNA^Ala的3′半分子与一个11聚的DNA片段(5′GGAATCGAACC3′)杂交后用RNase H酶解,该酶能在Ψ₅₅的3′侧定点剪切,这样就制备得片段C₃₆-Ψ₅₅该片段经1～2个高碘酸氧化和β-消去得片段C₃₆-T₅₄和C₃₆-G₅₃机器合成了3个酵母tRNA^Ala的片段,分别j是片段C₅₆-A₇₆,U₅₅-A₇₆(以U替代Ψ₅₅)和U₅₄-A₇₆(以UU替代T₅₄Ψ₅₅).合成和制备的片段以适当的组合用T₄RNA连接酶连接,产物是酵母tRNAtRNA^Ala的3′半分子或其类似物.3种3′半分子或其类似物分别与天然5′半分子连接得重组天然酵母tRNA^Ala(tRNAr)和2个酵母tRNA^Ala的类似物:(1)tRNAa(以U替代Ψ₅₅),(2)tRNAb(以UU替代T₅₄Ψ₅₅).体外测定了它们的丙氨酸接受活力和参入活力,发现酵母tRNA^Ala的类似物tRNAa和tRNAb与天然重组酵母tRNA^Ala相比,它们的氨基酸接受活力分别降低了25%和55%,参入活力分别降低了35%和30%.说明酵母tRNA^Ala中的修饰核苷酸T₅₄和Ψ₅₅对该tRNA的功能有重要的影响.     

铕标记抗癌胚抗原单克隆抗体C17的研究和应用

用合成的N′-(对-异硫氰基苄基)-二乙三胺-N¹,N²,N³,N³-四乙酸铕钠为螫合剂.用Sephadex G-50凝胶柱层析分离标记C₁₇和过量试剂.分部收集的层析物的光密度图和荧光强度图完全一致.蛋白峰处两管标记C₁₇的比活性分别为5.2和8.9Eu³⁺离子每C₁₇分子,而且C₁₇的标记回收率为64%.标记C₁₇至少在6个月内是稳定的.用铕标记物得到的时间分辨免疫荧光分析的标准曲线具有良好线性和斜率,表明标记物免疫活性良好,而且已用于血清CEA分析.     

高分辨电泳分离短串联重复序列DNA片段

采用多相缓冲系统,在成层胶T＝5%,C＝2.6%, 分离胶T＝8%,C＝5%的条件下用聚丙烯酰胺凝胶电泳对人类短串联重复序列(STR)DNA片段进行分离.其中,成层胶内主要缓冲成分为2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)、H₂SO₄及N、N-2(羟乙基)甘氨酸(Bicine) ; 而分离胶以Tris、H₂SO₄及2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)为主,构成多相缓冲系统.DNA片段在成层胶中被有效地压缩, 在分离胶内又可完全解压缩,使其按片段大小分离;从而达到提高分辨率的目的.