苏芸金杆菌高毒力菌株筛选方法研究

通过对36株苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株孢晶混合物的蛋白图谱和其对小菜蛾(Plutella xylostella)。致倦库蚊(culex pipens)二十八星瓢虫(Epjlachna vigintioctopunctata)三种昆虫幼虫的致死率研究,我们建立了一套快速高效的苏芸金杆菌内毒素高毒力菌株筛选程序。该程序是将蛋白电泳方法引入苏芸金杆菌菌株筛选,经过一个简单的苏芸金杆菌孢品混合物的蛋白电泳后,可以迅速辩别出对所有试虫毒力均很低的菌株,这一类菌株在苏芸金杆菌分离物中的比例可高达80％以上。除此之外,根据电泳的结果还可以预测该菌株大概的宿主范围和发现新的杀虫晶体蛋白类型。运用该方法,可以大大提高苏芸金杆菌菌株筛选的效率并降低筛选所需的费用。     

苏芸金杆菌的抗药性研究

微生物杀虫剂中苏芸金杆菌(简称BT)对某些害虫具有高毒性,它对人类及大多数有益昆虫和其它非目标生物低毒或无毒。通过新菌株的开发和遗传工程技术的促进,以及由于人们环境意识的增强和许多化学农药因连续使用而使害虫产生了抗药性,从而扩大了BT的应用范围,     

苏芸金杆菌的一个新血清型

从土壤中分离出一株产生伴孢晶体的芽孢杆菌。该菌株具有苏芸金杆菌的典型特征,严生不规则型晶体,鞭毛抗原及生化反应与已知的苏芸金杆菌21个血清型不㈤,不产生β-外毒素。对棉铃虫、粘虫、大蜡螟及尖音库蚊幼虫均无毒性,是一个新血清型(H22),定名为苏芸金杆菌山东变种(Bacillus thuringiensis serovar shandongiensis, H22)。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thurtngtensts subsp. Yunnanensis)113菌株的H-抗原和 H-抗血清均与已知苏芸金杆菌H一血清型l到19的所有参考标准菌株的H一抗血清和H一抗原不发生交叉凝集反应。113菌株的生化反应结果与所有参考标准菌株也不相同。此外,113菌株对致倦库蚊(Culex pipiens var. quinquefaseiatces)(双翅目)(Bombyx mori) (鳞翅目)幼虫均无毒性。 因此,113菌株是一个新血清型20,即苏芸金杆菌云南变种,血清型20(Bacillus thuringiensis subsp. Yunnanensis H20)。     

苏芸金杆菌抗药性的研究

本文报道了苏芸金杆菌包括30个亚种标准菌株在内的34个菌株对6种抗菌素的抗性研究结果。结果表明所有被试菌株对氨苄青霉素50—200单位/ml表现出较强的抗性,其中有17个菌株对链霉素12.5ug/ml、18个菌株对四环素25单位/ml显示出弱抗性。全部供试菌株对链霉素25—50ug/ml、四环素50单位/ml、红霉素12.5—50ug/ml、氯霉素12.5—100单位及卡那霉素12.5单位/ml均未显示出任何抗性。显微镜检查了部分菌株在含四环素25单位/ml,链霉素12.5ug/ml培养基上形成的抗性菌落的菌体发育情况,在所检查的11株链霉素抗性菌落中,有6个菌株的抗性菌落可形成正常的芽孢和晶体,在10株四环素抗性菌落中,有8个菌株可形成正常的芽孢和晶体。试验还测定了其中5株苏芸金杆菌对四环素25单位/ml的抗性频率为7.7—13.2％。     

诱变剂对苏芸金杆菌的影响

本文研究了五种诱变剂对苏芸金杆菌HD-1菌种的诱变效应,并获得了一些诱变菌。这些诱变菌所产生的伴孢晶体无论在大小,数量或形状比例方面都发生了一些变化。通过对家蚕(Bombyx mori)、菜青虫(Pierts rapae)、稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)的毒力试验,有的诱变菌提高了对某些昆虫的毒力。在五种诱变剂中以亚硝基胍(MNNG)和硫酸二乙酯(DES)的诱变效应最明显,获得的抗噬菌体菌株和产色素菌株都对某些害虫具有较高的杀虫活性     

苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌

苏芙金芽抱杆菌（ffecilliusthuringiensis简称B．t．）与蜡状芽抱杆菌（Bacilluscereus简称Bc,）这一对高度近缘细菌既有重要的经济意义又与人类的健康密切相关。B．l．在其芳抱形成期可产生杀虫晶体蛋白,已成为全球性应用最广泛的细菌杀虫剂［‘］二能产生多种有害毒素,诸如肠毒素、呕吐毒素、溶血素等,可引起人类非肠道感染及食物中毒,是人类的条件致病菌口。尽管B．t．杀虫剂有较好的完全性记录。但新近的文献表明,昆虫病原菌Bt．与人类的条件致病菌五C,的基因型及表现型非常相似,B．t．菌株也可产生对非靶标生物及人富有毒…     

对金龟甲幼虫高毒的苏芸金杆菌日本变种

从日本土壤中分离到一株形成芽孢的细菌,属于苏芸金杆菌日本变种(鞭毛抗原H_(23))。该菌伴孢内容物呈球形到卵形,对鞘翅目金龟甲铜黄异丽金龟、大绿金龟甲、大豆金龟、日本金龟的幼虫显示高毒,而对鳞翅目、双翅目、直翅目的幼虫和鞘翅目叶甲成虫无毒。目前,生态学研究证明,苏芸金杆菌(Bt)广泛存在于世界各地的土壤中,并具有不同的杀虫特性。这些报道认为,土     

一种适合球形芽孢秆菌产毒的培养基

本文证实花生饼是生产1593菌株的理想发酵原料,其产毒水平明显高于其它常用培养基,且不需添加其它营养物质及微量元素,pH11—13时,其产毒水平较pH5—9高4—272倍。由于花生饼来源广泛,价格低廉,为1593菌株生产和应用提供了有力的物质基础。     

对蚊的高毒效菌株187的研究

对湖北省医学科学院疟疾室筛选的对蚊具有高毒效的菌株187的生物学特性和毒性进行了研究。此菌株的血清型、酯酶型和主要生化反应与参考菌株苏芸金杆菌以色列变种(Bacrillusthuringiensis var. israelensis)1897菌株相同,但在菌体大小、鞭毛、繖毛、运动性、菌落特征、晶体形态和生化特性等方面又有差异。因此认为此菌株属于苏芸金杆菌H。型的一个新品系。其菌披对白纹伊蚊,致乏库蚊和中华按蚊的毒力分别是1897菌株的3．32、2．82和2.48倍,晶体的毒力则分别为1897菌株的4．0·、7．03和1．28倍。     

苏芸金杆菌感染粘虫后中肠组织学病变的研究

本文描述了Bacillus thuringiensis HD-1纯晶体感染粘虫Mythimna separata 5龄初幼虫后,其中肠肠壁细胞的超微结构变化.电镜观察表明:首先线粒体,发生病变,随后,细胞顶部肿胀、胞质电子密度下降,顶部胞质之下的各种细胞器均受损伤.随着病变加重,柱状细胞基膜内褶及杯状细胞质突起,这两个富含线粒体的区域发生病变最为明显.最终,肠壁细胞解体从基膜脱落.     

球形芽孢杆菌Ts-l毒蛋白的分离纯化

球形芽孢杆菌Ts-1对蚊虫幼虫有高效杀灭能力,其有毒成份为一种蛋白质。纯芽孢一晶体复合物经超声波处理后,以0．05 mol／L的NaoH抽提毒素,经sephadex G-2 00葡聚糖凝胶柱层析纯化,用SDS—PAGE检验柱层析得到的杀虫活性部分,Ts—1的芽孢-晶体复合物中主要为4zkD和43KD的两种蛋白质。经聚丙烯酰胺凝股制备电泳分离纯化,生物活性测定表明这两种蛋白质都有杀蚊毒效,经DEAE纤维素柱层析进一步纯化,获得了分子量为42kD的毒蛋白。     

我国部分地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌

从云南、贵州、四川和陕西4省的土壤中分离到大量苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringie—nsis)和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaeticus)菌株。血清型分析表明,苏芸金芽孢杆菌分离株分属于23个血清型中的13个血清型,另有近20％的自凝型菌株及部分与所有标准菌抗血清无反应的菌株。对该两种昆虫病原细菌的生态分布规律进行了分析。研究了全部苏芸金芽孢杆菌分离株对鳞翅目、鞘翅目及双翅目的6种昆虫的毒力特性、伴孢晶体与芽孢的形态,以及晶体蛋白质成分。观察和测定了球形芽孢杆菌分离株的形态和毒力,并分析了部分菌株的晶体蛋白质成分。得到22株高效苏芸金芽孢杆菌和2株高效球形芽孢杆菌。证明苏芸金芽孢杆菌是典型的土壤微生物类群,我国西南地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌资源十分丰富。     

裂解气液色谱法对苏芸金杆菌晶体蛋白的表征分析

本研究用有PYR-2A管式炉裂解器和CR2A计算机的GC-9A气相色谱仪,对3种标准蛋白和8个变种的11株苏芸金杆菌的晶体蛋白进行了表征,通过指纹图的分析,表明苏芸金杆菌不同亚种的晶体蛋白,既有峰群的特异性,亦有峰高比值的特异性,揭示了伴孢晶体在分子组成和构象上的多样性。同时,证明了PGLC分析鉴别伴孢晶体的可行性。     

蚊幼虫感染苏云金杆菌以色列变种后病理的研究

本文用电子显微镜、蛋白质凝胶电泳和蛋白水解酶测定的方法,比较研究了三种蚊幼虫在感染苏云金杆菌以色列变种后中肠组织的病变,经苏云金杆菌以色列变种处理10分钟后,中肠细胞的细胞器即呈现病变,最明显的是线粒体呈现极度的电子致密状态,细胞质的粗糙内质网也开始瓦解,处理16小时后,细胞核膨胀,各种细胞器进一步瓦解,而围食膜仍然完好。此时细胞的盐溶性蛋白含量减少,图谱上明显缺少一条蛋白区带。另方面,感染10分钟后,中肠的蛋白水解酶活性便下降,不同蚊种的酶活性相差比较大,幼虫中肠的蛋白水解酶主要为胰蛋白酶。 根据结果分析,我们初步认为,苏云金杆菌以色列变种,对蚊幼虫的毒效是苏云金杆菌以色列变种的毒素对中肠细胞能量代谢和中肠蛋白酶活性产生抑制的结果。     

苏芸金杆菌cry基因的遗传学分析及基因工程进展

苏芸金杆菌ｃｒｙ基因的遗传学分析及基因工程进展李扬,任改新（南开大学生命科学学院微生物系,天津３０００７１）１引言苏芸金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ简称Ｂｔ）是一种微生物杀虫剂,在农林、卫生害虫的综合防治中占有极其重要的地位。...     

苏芸金杆菌以色列变种在不同培养基上的产毒能力

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis)对蚊幼虫的杀虫活性,主要在于蛋白质晶体,而营养条件对晶体的合成有着重要影响。据研究,苏芸金杆菌不同血清型对培养基的要求各有差异。关于适合苏芸金杆菌以色列变种产生毒力的培养基,特别是     

苏芸金杆菌浓缩液的保存和不用二甲苯的防腐剂配方

在苏芸金杆菌浓缩商品制剂中,通常含有3—4％的二甲苯以防止芽孢的萌发。除此以外,二甲苯还能防止各种腐生微生物污染,尤其是肠杆菌和真菌。最近,一种用苏芸金杆菌血清型H3a3b制备的称为Futufa的超浓缩液已经问世,其中不含二甲苯,用于防治枞色卷蛾(属鳞