共查询到20条相似文献,搜索用时 0 毫秒
1.
2.
3.
双位点核酶对乙型肝炎病毒C基因体外转录物的剪切作用 总被引:1,自引:0,他引:1
为探讨双位点核酶对乙型肝炎病毒C基因体外转录物的剪切作用,观察双位点核酶对单一核酶体外剪切的增强作用,同时比较串联核酶和混合核酶的体外切割作用,构建了核酶Rz1,Rz3, Rz1和Rz3的串联核酶(Rz13)体外转录载体, 经体外转录后切割靶RNA. 结果表明:双位点核酶,无论是串联或混合核酶均可增强单一核酶的体外切割作用, 串联和混合核酶中的单一核酶可独立发挥作用;当串联和混合数目为2个时,两者的切割效率差别不大(P>0.05). 相似文献
4.
为了寻找HPV11型引起的生死系统感染的治疗途径和探讨HPV的致病机理,本实验以HPV11病毒质粒为模板,扩增出HPV11型E2区644bp片段,采用pEGM-T-Easy Vector为载体,构建pTV-644克隆载体,经筛选得到克隆株,取质粒测序鉴定,采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点,及进行基因同源性分析和生物学功能分析,选择出针对HPV11 E2靶基因的RZ2777,在最适条件下进行体外剪切反应,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子,选择合适的反应条件切割效率达60%以上,Km和Kcat值分别为0.63μmol/L、0.12μmol/L、RibozymeL两端的5′c-is-ribozyme和3′-cis-ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明,Ribozyme可能成为治疗HPV11型引起的尖锐湿疣的有效手段,并有望在分子水平上开辟出基因治疗HPV11病毒感染的另一新天地。 相似文献
5.
人巨细胞病毒Human Cy tomegalo-virus(HCMV)感染非常普遍,常引起不显性感染或潜伏感染;但当器官移植者、早产儿、早期孕妇、免疫抑制和免疫缺陷患者受到CMV感染后可出现明显的临床症状和严重后果。目前探求一种敏感、 相似文献
6.
为了寻找HPV11型引起的生殖系统感染的治疗途径和探讨HPV的致病机理,本实验以HPV11病毒质粒为模板,扩增出HPVll型E2区644bp片段,采用pGEM-T-Easy
Vector为载体,构建pTV-644克隆载体,经筛选得到克隆株,提取质粒测序鉴定。采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点,及进行基因同源性分析和生物学功能分析,选择出针对HPVllE2靶基因的RZ2777,在最适条件下进行体外剪切反应,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子,选择合适的反应条件切割效率达到60%以上,Km和Kcat值分别为0.63μmol/L、0.12μmol/L,RibozymeL两端的5′-cis-ribozyme和3′-cis-ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明,Ribozyme可能成为治疗HPVll型引起的尖锐湿疣的有效手段,并有望在分子水平上开辟出基因治疗HPVll病毒感染的另一新天地。 相似文献
8.
抗水稻条纹叶枯病毒核酶的设计,克隆及体外活性测定 总被引:10,自引:0,他引:10
为探索控制水稻条纹叶枯病毒(Ricestripevirus,RSV)设计合成了特异切割该病毒RNA保守区及编码病害特异性蛋白(DiseaseSpecificProtein,DSP)基因的核酶,核酶基因的长度均为40个碱基,用化学合成方法合成其正链及与其3'-末端互补的15个碱基引物,用TagDNA多聚酶合成其互补链。双链DNA直接插入克隆载体PGEM3zf(+)的Smal位点。序列测定表明,克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经SP6RNA多聚酶体外转录得到核酶RNA。当核酶RNA与以同样方法转录得到的靶基因RNA混合反应,可得到预期结果相同的切割片段,表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。 相似文献
9.
一个双价锤头型核酶在体外对两种不同植物病毒RNA的专一切割作用 总被引:1,自引:0,他引:1
根据锤头核酶模型,设计合成了一个以黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白(CP)亚基因组RNA为底物的锤头型核酶(RZC),在证明它能有效切割该底物后,再将这个核酶与一个能专一性切割烟草花叶病毒(TMV)移动蛋白(MP)亚基因组RNA的锤头型核酶(RZ1)相互串联构成了一个双价核酶(RZ1C),体外结果表明,这个双价核酶能与相应的单价核酶RZ1和RZC一样专一而有效地切割CMV CP和TMV MP RNA 相似文献
10.
<正> 病毒是由核酸和蛋白质两种基本成份所构成的一类最简单的特殊生物。它们严格地寄生于细胞内,以基因复制的方式进行繁殖。因而又有“分子生物”或“寄生分子”之称。 病毒学作为一门相对独立学科的历史还不到40年,进展却比较迅速。这与现代分子生物学方法的运用是分不开的。由于核酸和蛋白是病毒的主要功能成份,所以,在病毒学研究中,对核酸和蛋白的分析显得特别重要。病毒学的各个研究领域都涉及病毒核酸和蛋白的分析。 相似文献
11.
为研究转化生长因子β1(TGFβ1)在造血调控中的关键作用, 构建针对抗转化生长因子β1的锤头状核酶, 并对它的体外剪切活性进行探讨. TGFβ1 cDNA部分基因片段其克隆入T载体中, 32P标记TGFβ1体外转录物, 变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化获得靶RNA.计算机设计抗TGFβ1的锤头状核酶, 并把合成的核酶基因片段克隆入pGEM-9Zf(-)中T7启动子的下游, 凝胶电泳纯化回收32P标记核酶的体外转录物.在不同条件下进行核酶的剪切反应, 变性PAGE, 放射自显影.活性的Rz445在37℃时具有良好活性, Km为29.55 nmol/L, Kcat为0.1533 min-1, 突变型核酶Rz445m没有剪切活性.制备的Rz445在体外具有良好的特异催化剪切活性, 并有望胞内抑制TGFβ1表达, 从而在干细胞移植中应用. 相似文献
12.
13.
14.
15.
作用于HBV(adr亚型)RNA的tRNA—包埋锤头状核酶的研究 总被引:3,自引:2,他引:1
设计了针对HBV(adr亚型)RNA的二个锤头状核酶(RS3和RC2),并将其插入tRNA反密码环中(RtS3和RtC2),以增加其稳定性。实验表明,虽然插入tRNA中的核酶与裸露核酶相比,催化活性有所下降,但在胎牛血清和HepG2细胞抽提液中的稳定性却明显提高。因此,tRNA-包埋核酶有可能提高在体内的抗病毒能力。 相似文献
16.
病毒核酸定量测定对病毒性疾病的诊断和治疗,了解病毒感染与疾病的发生、发展的关系,探讨药物对病毒的作用及抗病毒治疗效果的考核和评价,都有很和重要的作用。本文从核酸杂交技术、PCR技术、NASBA技术及bDNA技术4个方面对病毒核酸定量测定的分子生物学方法以及病毒核酸定量测定在医学上的意义作一简要综述。 相似文献
17.
HIV-1是一种特殊的逆转录病毒,其基因可转导入宿主细胞的基因内进行复制,核酶是一类具有催化活性的小分子RNA,能特异性与靶RNA分子结合后进行切割而抑制HIV-1,甚至一些RNA中间产物亦被核酶破坏。多项研究巳证实核酶可抑制细胞内HIV-1复制。与HIV-1的传统疗法相比,核酸基因治疗法干扰了病毒的装载和免疫系统的重建,能高效抑制病毒增殖,有助于患者免疫系统重建。 相似文献
18.
19.
20.
Ribozyme和DNAzyme具有水解mRNA分子的功能,是阻断基因表达和抗病毒的重要工具。近年来,Ribozyme和DNAzyme在临床治疗研究中已经获得了长足进展,有许多成功的实例。比较了Ribozyme和DNAzyme的差异和特点,总结了它们在抗病毒、抗肿瘤、治疗遗传病、治疗神经系统疾病等方面的临床前研究、应用及进展。 相似文献