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| 锤头状核酶对转化生长因子β1 RNA的体外剪切作用 | |
| 作者姓名： | 刘芳 邹萍 吴耀辉 易雪 |
| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,武汉,430030 |
| 摘 要： | 为研究转化生长因子β1（TGFβ1）在造血调控中的关键作用, 构建针对抗转化生长因子β1的锤头状核酶, 并对它的体外剪切活性进行探讨. TGFβ1 cDNA部分基因片段其克隆入T载体中, ３２Ｐ标记TGFβ1体外转录物, 变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化获得靶RNA.计算机设计抗TGFβ1的锤头状核酶, 并把合成的核酶基因片段克隆入pGEM-9Zf(-)中T7启动子的下游, 凝胶电泳纯化回收３２Ｐ标记核酶的体外转录物.在不同条件下进行核酶的剪切反应, 变性PAGE, 放射自显影.活性的Rz445在37℃时具有良好活性, Km为29.55 nmol/L, Kcat为0.1533 min－1, 突变型核酶Rz445m没有剪切活性.制备的Rz445在体外具有良好的特异催化剪切活性, 并有望胞内抑制TGFβ1表达, 从而在干细胞移植中应用. |
| 关 键 词： | 转化生长因子β1 核酶 体外剪切 |
| 收稿时间： | 2005-03-28 |
| 修稿时间： | 2005-03-28 |
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