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1.
钙调蛋白结合蛋白及其磷酸化对癌细胞迁移能力的影响研究 总被引:1,自引:0,他引:1
轻链钙调蛋白结合蛋白(light-chain caldesmon,l-CaD)是一种肌动蛋白结合蛋白,它通过与肌动蛋白结合而稳定胞内微丝结构,在磷酸化作用下则能从微丝上脱离.在众多非转移性癌细胞以及永生化的正常细胞系中,l-CaD的表达量很低甚至没有,但在高迁移活性的转移性癌细胞中,l-CaD表达量显著上升,因此l-CaD可能是维持转移性癌细胞高迁移能力的重要因素.为了探索l-CaD如何调节转移性癌细胞迁移活性及其所处地位,以人源转移性乳腺癌细胞MDAMB-231作为载体,一方面,在胞内高表达外源野生型l-CaD及其磷酸化突变株,干扰胞内l-CaD的磷酸化进程,从而考察l-CaD磷酸化对细胞迁移的调节,另一方面,利用siRNA技术,抑制l-CaD在MDAMB-231细胞内的表达量,检测l-CaD对转移性癌细胞迁移活性的总体影响.通过细胞骨架荧光染色、细胞迁移小室、单细胞层次上的牵张力测定以及细胞基底脱黏附能力测定,结果显示:a.阻断MDAMB-231胞内l-CaD的磷酸化进程将显著抑制细胞的迁移能力,细胞骨架调整受阻,基底牵张力增加,细胞基底脱附能力下降;b.l-CaD表达抑制的MDAMB-231细胞失去了完... 相似文献
2.
该文主要研究环状RNA hsa_circ_0000745对肝癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制.首先,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测不同肝癌细胞中环状RNA hsa_circ_0000745的表达;其次,利用siRNA干扰技术敲低HepG2细胞中的... 相似文献
3.
组织因子(Tissue Factor,TF)是机体外源性凝血途径的启动因子,发挥生理性止血的重要作用.近来研究表明,TF除凝血功能外尚与多种恶性肿瘤的血管生成,侵袭转移及预后密切相关.为了探讨TF对人类肝癌细胞的影响,将成功构建带有正义/反义TF cDNA的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-TF(+)/(-)转染人肝癌细胞系HepG2,经药物筛选后获得稳定细胞克隆;应用RT-PCR和Western blot检测内源性TF mRNA及蛋白质表达水平的变化;通过体外侵袭实验进一步分析对细胞侵袭能力所造成的影响.结果显示,转染pcDNA3.1-TF(+)质粒的细胞TF表达水平明显升高,相应的其侵袭能力明显增强,而转染pcDNA3.1-TF(-)质粒的细胞TF表达水平,及体外侵袭能力显著下降.研究结果表明,TF可以增强人类肝癌细胞体外侵袭和转移能力,与肝癌的进展相关,可作为原发性肝癌治疗的一个新靶点进行研究. 相似文献
4.
《中国细胞生物学学报》2020,(4)
该文主要研究慢病毒介导的T细胞免疫球蛋白黏液素3(T-cell immunoglobulin mucin-3,Tim-3)对宫颈癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制。首先,采用PCR方法获取Tim-3片段,将其克隆入pCDH载体中,并通过酶切和测序进行鉴定;将三个表达载体,即重组阳性表达载体(pCDH-Tim-3)、空载体(pCDH-NC)和绿色荧光蛋白载体(pCDH-GFP),分别与psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中,最后形成相应的慢病毒组。然后,将三组慢病毒分别感染HeLa细胞,获得稳定细胞株(HeLa-Tim-3、HeLa-NC、HeLa-GFP),其中设置HeLa-NC为空载病毒阴性对照组;最后,通过观察HeLa-GFP组,初步获取慢病毒感染效率;运用流式细胞术、Western blot和细胞免疫荧光检测Tim-3的相对表达水平;细胞划痕和Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)的表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。该文成功构建了pCDH-Tim-3慢病毒表达载体并将其包装成慢病毒,获得对应的稳定细胞株;在HeLa-GFP中可以观察到大量的绿色荧光;与HeLa-NC组相比,Western blot、流式细胞术和细胞免疫荧光检测结果均表明,HeLa-Tim-3组的Tim-3蛋白表达水平显著升高(P0.05);细胞划痕实验和Transwell检测结果均表明,HeLa-Tim-3组的迁移侵袭能力明显提高(P0.01);另外,Western blot检测结果表明,与HeLa-NC组相比,HeLa-Tim-3组N-cadherin和Snail显著增多但E-cadherin明显减少(P0.05),而流式细胞术检测结果表明,HeLa-Tim-3组凋亡率显著减少(P0.001)。因此,高表达Tim-3宫颈癌细胞可以通过EMT转化和抑制细胞凋亡等相关作用机制来加强肿瘤的恶性进展。 相似文献
5.
67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6 7LR在肝癌细胞侵袭转移过程中可能具有重要意义 相似文献
6.
目的:探讨OIP5对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭迁移能力的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默肝癌细胞中OIP5的表达后,通过qRT-PCR和Western-blot技术检测OIP5的下调效率,CCK-8和平板克隆法检测肝癌细胞的增殖能力,Transwell法检测肝癌细胞的侵袭和迁移能力。结果:转染OIP5-siRNA后,肝癌细胞SMMC-7721中OIP5 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P0.05);同时,与对照组相比,OIP5-siRNA组肝癌细胞SMMC-7721的CCK-8实验的OD值、平板克隆法测得的克隆球个数、Transwell法测得的迁移细胞数与侵袭细胞数均明显低于对照组(P0.05)。结论:OIP5能够促进肝癌细胞的增殖和侵袭迁移,可能作为肝癌治疗的潜在靶点。 相似文献
7.
目的:在肝癌细胞Hep G2中过表达外源NAIF1(核凋亡诱导因子1),探讨NAIF1的亚细胞定位以及对Hep G2增殖和迁移能力的影响。方法:以真核表达质粒p EGFP-N1为对照组,p EGFP-N1-NAIF1为实验组,瞬时转染肝癌细胞Hep G2,利用免疫印迹方法检测NAIF1蛋白表达效率;以DAPI染核,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白定位,确定NAIF1的亚细胞定位;通过MTT方法绘制细胞增殖曲线;通过transwell小室法检测NAIF1对Hep G2迁移能力的影响。结果:在肝癌细胞Hep G2中,外源表达NAIF1主要定位于细胞核;与对照组Hep G2/p EGFP-N1相比,Hep G2/p EGFP-N1-NAIF1的细胞增殖、迁移能力下降(P<0.05)。结论:外源表达NAIF1蛋白定位于Hep G2细胞核,过表达NAIF1抑制Hep G2的细胞增殖与迁移能力,NAIF1可能作为肝癌治疗的潜在靶点。 相似文献
8.
目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将PC-3细胞分为3组:空白对照组(不转染)、miRNA-191 NC组(Inhibitor NC转染PC-3细胞)、miRNA-191 Inhibitor组(miRNA-191 Inhibitor转染PC-3细胞),每组设置3个复孔。采用RTq PCR法检测PC-3细胞miRNA-191和PLCD1的mRNA表达水平;采用CCK8法检测PC-3细胞增殖水平;采用划痕实验和侵袭实验分别检测PC-3细胞迁移能力和侵袭能力;通过Targetscan靶基因预测网站,筛选PLCD1作为miRNA-191的靶向蛋白,并用双荧光素酶靶标实验验证;采用Western blot法检测PC-3细胞PLCD1的蛋白表达。结果:与RWPE-2细胞相比,人前列癌细胞中mi NRA-191的表达水平显著升高(P<0.05),且miRNA-1... 相似文献
9.
为了探讨半乳糖凝集素-7(Galectin-7)在食管癌Eca-109细胞发生发展中的细胞外功能及其机制,该实验采用免疫印迹法检测浓缩细胞上清液中Galectin-7的表达,并利用不同浓度的重组Galectin-7培养食管癌Eca-109细胞。使用免疫印迹、实时荧光定量PCR、细胞划痕实验、MTT实验检测在培养后细胞中基质金属酶-9(MMP-9)、p38、pp38表达水平的变化以及Eca-109细胞迁移和增殖能力的改变。结果显示,Galectin-7存在于Eca-109细胞细胞上清液中,加入重组Galectin-7培养细胞后,MMP-9、pp38的表达水平明显上升,并且细胞的迁移能力也得到了提高,增殖能力无明显变化。由此说明,在食管癌Eca-109细胞中,Galectin-7可以被细胞分泌至细胞外,可能通过结合细胞外膜上特异性糖基配体激活p38 MAPK通路诱导MMP-9的表达,从而在Eca-109细胞侵袭、迁移过程中发挥重要的作用。 相似文献
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目的:研究miR-218是否通过下调SOX4影响滋养层细胞系HTR-8细胞的迁移和侵袭。方法:妊娠期高血压疾病(HDCP)患者46例,平均年龄(31 ±4.6)岁,收缩期血压≥ 140 mmHg和/或舒张期血压> 90 mmHg;以血压正常孕妇50例为对照,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测两组患者静脉血中miR-218的表达情况。转染miR-218mimic和miR-NC至离体培养的HTR-8细胞中,将细胞分为对照组(加入DMEM)、空质粒组(加入miR-NC)和过表达miR-218组(加入miR-218 mimic)3组,检测细胞的迁移侵袭情况以及细胞中MMP-2和MMP-9的表达,,生物信息学预测miR-218潜在靶基因为SOX4,利用荧光素酶素试验验证SOX4是miR-218的靶基因;再通过转染过表达SOX4的质粒至HTR-8细胞,HTR-8细胞分为过表达miR-218组、过表达miR-218+空质粒组、过表达miR-218+SOX4组,以上方法检测HTR-8细胞的迁移侵袭情况。结果:相比于正常孕妇组,HDCP组患者血清中miR-218表达减少(P <0.01)。相比于空质粒组,转染miR-218mimic后,HTR-8细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4的表达减少(P < 0.01),细胞迁移和侵袭能力下降(P < 0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-218能够显著降低SOX4-3'-UTR质粒的荧光素活性(P< 0.01);相比于miR-218+空质粒组,转染过表达SOX4质粒后,HTR-8细胞迁移和侵袭能力增加(P < 0.01)。结论:HDCP患者血清中miR-218表达减少,miR-218可以通过下调SOX4从而抑制HTR-8细胞的迁移和侵袭。 相似文献
11.
《现代生物医学进展》2017,(34)
目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。 相似文献
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目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) UNC5B-AS1调控miR-218-5p的表达影响肺癌细胞黏附、侵袭和迁移及其作用机制。方法:选取2017年6月至2019年6月在重庆三峡中心医院肿瘤科经手术切除的20例肺癌患者癌组织和对应癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺癌组织和癌旁组织及其支气管上皮细胞HBE和不同肺癌细胞A549、H1437、H1975、H1299和H460中UNC5B-AS1的表达。将UNC5B-AS1 siRNA转染至肺癌A549细胞,采用黏附实验、Transwell侵袭实验及划痕实验检测下调UNC5B-AS1对A549细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响; qRT-PCR和双荧光素酶报告基因检测实验鉴定UNC5B-AS1对miR-218-5p的靶向调控关系; Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达情况。结果:肺癌组织和细胞中UNC5B-AS1表达显著高于癌旁组织和支气管上皮细胞(P<0.05),UNC5B-AS1在肺癌A549细胞中的表达量最高(P<0.05)。下调UNC5B-AS1的表达能够抑制A549细... 相似文献
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目的:阐明NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene 2)在肝癌细胞中对CD24 的调控及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。
方法:Western blot 检测低转移性的肝癌细胞Huh7、高转移性的肝癌细胞系MHCC97h 及正常人肝细胞系L-02 中NDRG2 和
CD24 的表达;通过腺病毒载体上调MHCC97h 细胞中NDRG2 的水平,或利用siRNA 下调Huh7 细胞中NDRG2 的表达,检测
CD24 的变化以及细胞侵袭能力的改变。结果:MHCC97h 细胞中NDRG2 基因和蛋白的表达水平低于Huh7 细胞,而CD24 的表达
水平高于Huh7 细胞;在MHCC97h 细胞中上调NDRG2 可以抑制CD24 的表达并抑制其侵袭能力,而在Huh7 细胞中下调
NDRG2 的表达可以提高CD24 的水平及细胞的侵袭能力。结论:NDRG2 可能通过影响CD24 参与调控肝癌细胞的侵袭能力。 相似文献
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目的:阐明NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene2)在肝癌细胞中对CD24的调控及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:Western blot检测低转移性的肝癌细胞Huh7、高转移性的肝癌细胞系MHCC97h及正常人肝细胞系L-02中NDRG2和CD24的表达;通过腺病毒载体上调MHCC97h细胞中NDRG2的水平,或利用siRNA下调Huh7细胞中NDRG2的表达,检测CD24的变化以及细胞侵袭能力的改变。结果:MHCC97h细胞中NDRG2基因和蛋白的表达水平低于Huh7细胞,而CD24的表达水平高于Huh7细胞;在MHCC97h细胞中上调NDRG2可以抑制CD24的表达并抑制其侵袭能力,而在Huh7细胞中下调NDRG2的表达可以提高CD24的水平及细胞的侵袭能力。结论:NDRG2可能通过影响CD24参与调控肝癌细胞的侵袭能力。 相似文献
15.
胃癌是世上最常见的恶性肿瘤之一。人们对于胃癌的病因,尤其是对胃癌转移的分子机制并尚未完全阐明。表观遗传调控在肿瘤中的作用和机制已经引起研究者的高度关注。为了研究LincRNA是否在胃癌的侵袭迁移中发挥作用,本研究选择具有增强子样活性的长链非编码RNA Linc00651作为研究对象,通过CCK、流式细胞技术、Wound healing assay、Transwell迁移侵袭实验等,分析了Linc00651对胃癌细胞增殖及其迁移侵袭能力的影响。结果显示,Linc00651的转染,促进了胃癌细胞的侵袭和迁移能力,对胃癌细胞的增殖和细胞周期未见明显改变。本研究揭示了Linc00651参与了胃癌细胞侵袭迁移行为,为LncRNA应用于胃癌侵袭转移的临床评估提供了新的思路和视角。 相似文献
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探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人子宫颈癌细胞Siha侵袭、迁移能力的影响及其可能的分子机制。用5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h,通过倒置显微镜、CCK-8实验、单细胞克隆形成实验、细胞黏附实验和Transwell小室实验分别观察TGF-β1作用前后Siha细胞形态、增殖能力、克隆形成能力、黏附能力、迁移及侵袭能力的改变;Western blot检测TGF-β1作用前后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65、E-cadherin及Vimentin蛋白表达的变化。结果表明,5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h后,Siha细胞出现上皮细胞向间质细胞形态转变、黏附能力减弱、迁移和侵袭能力增强,伴随MMP-2、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65和Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调。该研究表明,TGF-β1可能通过诱导Siha细胞发生上皮–间质转化及上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,促进Siha细胞的侵袭转移。 相似文献
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文章介绍植物细胞内几类肌动蛋白结合蛋白(如:前纤维蛋白、形成素、肌动蛋白相关蛋白2/3复合体、肌动蛋白解聚因子和成束蛋白)的结构、性质和功能的研究进展。 相似文献
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目的:探讨棕榈酸(Palmiticacid,PA)对人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭转移能力的影响,并通过检测肝癌细胞系中CD147-MMPs信号通路在PA影响下的变化,初探PA影响肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:PA(0、20、50、100μM)作用SMMC-7721细胞后(8、16、24h),MTT法检测细胞增殖,划痕及Transwell实验评价细胞迁移侵袭能力,Western-blot及real-time PCR检测CD147蛋白及其mRNA的水平,ELISA检测基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的水平。结果:与对照组相比,PA作用SMMC-7721细胞后,细胞存活率无显著差异(P0.05);细胞迁移和侵袭能力显著增高(P0.05);CD147蛋白及其mRNA的表达显著增高(P0.05);培养上清中MMP-9的浓度显著增高(P0.05),MMP-2的水平则无变化。不同的梯度组之间相比较,细胞迁移和侵袭能力、CD147的表达水平(蛋白及其mRNA)以及培养上清中MMP-9的浓度均随PA作用时间和作用剂量的增大而产生更显著的增高。结论:PA通过活化CD147-MMPs信号通路促进SMMC-7721细胞的迁移侵袭。 相似文献
19.
《中国生物化学与分子生物学报》2017,(10)
miR-33a参与许多肿瘤发展的调控。然而,其对肝癌的作用还未完全清楚。本研究探讨了miR-33a在肝癌细胞中的表达及其功能。实时荧光定量PCR显示,与永生化的正常肝细胞系LO2相比,miR-33a在SMMC-7721、Bel-7405、Hep3B细胞中表达量较高,在SK-Hep-1、HepG2、Huh7细胞中表达量较低。其中,在SMMC-7721中表达量最高,在Huh7中表达量最低。分别用miR-33a模拟物和抑制物转染表达量最高和最低的细胞系SMMC-7721和Huh7,实时荧光定量PCR显示,模拟物转染细胞后,36 h转染效率最高;cy3染色法显示,抑制物转染细胞后,各时间点被标记的细胞均大于60%;CCK-8法和Transwell法显示,miR-33a抑制SMMC-7721和Huh7细胞增殖、迁移和侵袭;Western印迹显示,miR-33a抑制SMMC-7721、Huh7细胞claudin-1表达,促进E-钙粘蛋白表达;balb/c裸鼠成瘤实验表明,皮下注射miR-33a拮抗剂能促进肿瘤生长。上述结果证明,miR-33a在不同的肝癌细胞系中表达水平高低不一,在SMMC-7721中最高,Huh7中最低;miR-33a可以抑制肝癌细胞增殖,并可能通过抑制claudin-1及促进E-钙粘蛋白表达,抑制上皮间质转化进程抑制肝癌细胞侵袭和迁移。 相似文献
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摘要 目的:探究miR-125a-5p转染对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及相关机制。方法:将肝癌细胞分为对照组、下调组和上调组,并通过细胞转染建立稳定转染的下调组和上调组。MMT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测P13K/Akt通路中AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量。结果:与上调组相比,下调组24、48、72 h细胞增殖率,细胞侵袭、迁移细胞数,AKT、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量显著降低,具有统计学差异(29.67±9.87 vs 17.34±5.71,t=5.192,P<0.05、34.75±11.56 vs 15.17±5.04,t=7.365,P<0.05、38.48±12.81 vs 12.51 ±4.13,t=9.153,P<0.05,72.53±24.17 vs 36.28±12.07,t=6.365,P<0.05、86.51±28.75 vs 46.28±15.32,t=5.858,P<0.05,1.26±0.41 vs 0.81±0.26,t=4.397,P<0.05、1.35±0.44 vs 0.76±0.24,t=5.584,P<0.05、1.48±0.46 vs 0.79±0.26,t=6.194,P<0.05、1.22±0.39 vs 0.73±0.24,t=5.584,P<0.05);与上调组相比,下调组24、48、72h细胞凋亡率,Bax蛋白表达量显著升高,具有统计学差异(17.62±5.84 vs 29.31±9.75,t=4.879,P<0.05、14.97±4.65 vs 34.19±11.36,t=7.427,P<0.05、11.26±3.74 vs 38.62±12.86,t=9.690,P<0.05,0.75±0.24 vs 1.33±0.43,t=5.587,P<0.05)。结论:下调miR-125a-5p的表达,可通过作用于P13K/Akt通路,调控AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量,进而起到抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡以及抑制肝癌细胞的侵袭、迁移能力。 相似文献