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双链DNA模板循环测序的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用末端标记引物进行双链DNA循环测序是实验室快速,准确获得双链DNA模板序列的有效方法。实验结果表明:该测序法不仅能消除由于模板不纯所导致的引物的非特异性结合等因素而产生的非特异条带,而且能降低PCR产物测序的背景问题。 相似文献
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草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因的表达与产物纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼出血病的主要病原,隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属.序列分析表明,GCRV S2 片段长为3 877核苷酸,编码一个分子量为138kDa 的蛋白VP2,具有RNA聚合酶性质.为进一步了解该病毒 RNA聚合酶特性,本研究在对GCRV RNA聚合酶基因(GCRV-RdRp)保守区(约1.5kb)重组质粒pR/RRp高效表达的基础上,分别构建了编码GCRV RNA聚合酶保守区N端与C端部分基因的 pR/RRpN及pR/RRpC重组表达载体,并在原核细胞中获得成功表达.筛选的重组表达菌株经IPTG诱导培养,得到分子量分别为98kDa、103kDa的目的表达融合蛋白.Western blot分析表明,该表达产物与兔抗GCRV-VP2血清呈阳性反应.通过ProBond柱亲和层析,纯化了融合有6个组氨酸的重组表达产物,并获得约90%纯的目的蛋白.上述结果为GCRV RNA聚合酶特性分析提供了依据. 相似文献
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两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较 总被引:3,自引:0,他引:3
水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇. 相似文献
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从患流行病的鳜鱼脾脏组织超微切片中观察到大量的病毒颗粒。该完整病毒颗粒直径约 135nm± 10 ,具包膜。成熟病毒核壳体约 90nm± 5 ,包膜厚度约 18nm± 3,核壳体与包膜间的非电子致密区约有 2 7nm± 2。通过对不同发病阶段发病鳜鱼脾脏组织切片的电镜观察 ,在感染初期的鳜鱼脾脏组织观察到病毒的吸附及典型的内吞入侵方式 ,在感染中后期的脾脏组织细胞质内观察到病毒发生基质及病毒核壳、包膜形成与病毒的释放。此外 ,在染病鳜鱼的肾、心、肝、及鳃组织亦观察到相同结构的病毒粒子。回接实验证实该病毒为引起鳜鱼暴发流行病的病原 相似文献
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草鱼呼肠孤病毒新分离株(GCRV991)的病毒学特性分析 总被引:15,自引:1,他引:14
从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒(GCRV991),该病毒能使草鱼CIK,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE,对水生动物BF2,EPC及哺乳动物BHK,VERO细胞株不敏感.中和实验显示,GCRV873抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒,形成抗原抗体免疫复合物.纯化的病毒核酸与蛋白经SDS-PAGE分离,分别呈现11条清晰的核酸带及5条主要与2条微量结构多肽图谱,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873相近似.该毒株基因组总分子量为14.48×106kD,大小范围是0.55~2.61×106kD;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、65kD、43kD、34kD及138kD、82kD.上述结果提示,新分离的GCRV991与GCRV873具有相似的抗原性. 相似文献
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方勤 《Virologica Sinica》1999,(3)
第十一届国际病毒学会议于1999年8月9日至13日在澳大利亚悉尼会议及展览中心隆重召开。在热情洋溢的开幕式上,澳大利亚少儿合唱团一曲美妙的旋律,使本世纪最后一次全球性病毒学家大聚会充满着蓬勃与生机。与会代表2429人分别来自世界各国。大会共收到1762篇稿件,其中大会应邀报告51篇、专题报告611篇、墙报1100篇。位于前四位的代表团分别为美国(380人)、日本(181人)、英国(170人)及德国(105人)。中国大陆这次参加会议的人数较以往大为增加,有6人进行了专题发言。这次大会的主要议题有:… 相似文献
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通过比较溶液的离子浓度对病毒形态的结构的影响,发现GCHV在低盐溶液盐低温(-20℃)保存条件下,外壳蛋白会自动降解,但不十分完全,采用含1%NP40(Nonidet-p40)的稀盐溶液处理感染病毒的细胞,经冻融及差异离心,电镜下观察到纯度较高的病毒双层衣壳,核心衣壳及散在的子粒。纯化的病毒亚单位用核酸酶消化后,与等量的福氏佐剂混合,免疫家兔制备抗体,该抗血清经台和试验测定,显示了较强的中和病毒的 相似文献
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将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Clifornica nuclear polyhedrosis nvius,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317,ts538,ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(33℃)下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白,抗P143蛋白,抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明:1)P47蛋白是一种晚期(12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度(25℃)能够表达,但在非允许温度(33℃)不能表达。2)P143蛋白是一种早期(8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3)在非允放温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4)野生才突变株ts317的病毒结构蛋白(P80,GP64,VP39,P24和PTP)允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5)除了GP64和除P24外,ts583和ts8感染的细胞非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6)野生型毒株HR3在允许温度和允许温度下的蛋白表达无明显差异。 相似文献
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电转化法提高平连载体DNA转化效率的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
探讨了电转化过程中一些影响平连载体DNA转化效率的因素,并与化学法进行了比较,由此建立了优化的电转化条件。结果显示,在OD600值0.72-0.78收获细胞时,可使平连载体DNA的转化效率达到5×106转化子/μgcD-NA,较化学法高102-103倍。同时,降低连接产物的盐浓度,对于电转化成功及提高转化率也至关重要 相似文献
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以鱼呼肠孤病毒双链RNA为模板,建立一种快速、简便、高效的cDNA合成及克隆策略。在一定量模板条件下,采用随机六聚体为引物合成cDNA第一链。以退火方式形成双链cDNA,直接通过琼脂糖凝胶电泳检测其cDNA合成产量。双链cDNA经两端补齐后,平头连接于具有阳性选择标记的载体中,以高效电转化的方式进行快速克隆。 相似文献