利用细菌表达dsRNA介导黄粉虫抗冻蛋白基因的RNA干扰 |
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引用本文: | 石萌,刘小宁,马纪.利用细菌表达dsRNA介导黄粉虫抗冻蛋白基因的RNA干扰[J].生物技术通报,2014(8). |
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作者姓名: | 石萌 刘小宁 马纪 |
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作者单位: | 新疆大学生命科学与技术学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31360527;新疆生物资源基因工程重点实验室开放课题(XJDX0201-2014-03) |
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摘 要: | RNA干扰(RNA interference,RNAi)是研究基因功能的一种重要工具。为了利用RNAi技术对黄粉虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)基因的非抗冻功能进行验证,将黄粉虫抗冻蛋白基因Tmafp433的相应干扰片段构建至L4440干扰载体并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达特异的afp基因相应dsRNA,纯化后注射黄粉虫幼虫,通过实时荧光定量PCR检测afp基因在mRNA水平的变化。结果显示含有L4440-Tmafp重组质粒的HT115菌株可以表达干扰afp基因的dsRNA,命名为Tmafp-dsRNA。用Tmafp-dsRNA注射黄粉虫24 h后,Tmafps的表达受到显著抑制,相比对照下降了60.8%。本研究表明通过注射dsRNA可有效抑制黄粉虫afp基因的表达。
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关 键 词: | 黄粉虫 抗冻蛋白基因 RNA干扰 双链RNA L载体 |
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