| 桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化 |
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| 引用本文： | 白蓉蓉,金涛,金启安,林玉英,温海波,彭正强.桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化[J].昆虫知识,2015,52(2). |
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| 作者姓名： | 白蓉蓉 金涛 金启安 林玉英 温海波 彭正强 |
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| 作者单位： | 1. 海南大学环境与植物保护学院,海口 570228;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室,海口 571101
2. 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室,海口 571101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目，公益性行业(农业)科研专项经费 |
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| 摘 要： | 【目的】建立和优化桔小实蝇幼虫Bactrocera dorsalis(Hendel)总蛋白的双向电泳条件。【方法】使用BPP法和3种TCA-丙酮法(TCA-丙酮-A法:直接加入裂解液磨样;TCA-丙酮-B法:样品提取液中加入40 mmol/L DTT;TCA-丙酮-C法:样品提取液中加入0.07%β-巯基乙醇)提取桔小实蝇幼虫总蛋白;使用13 cm和24 cm p H 4~7的IPG胶条分离桔小实蝇幼虫总蛋白;使用考马斯亮蓝法及硝酸银染色法对双向电泳凝胶进行染色;使用5800 MALDI-TOF-TOF MS/MS质谱分析仪对BPP法获得的特异蛋白进行质谱鉴定,并将检索数据库物种分别设为Metazoa(Animals)与Drosophila(Fruit flies)进行数据库检索。【结果】TCA-丙酮法中,TCA-丙酮-C法提取效果最好,BPP法优于所有TCA-丙酮法;使用考马斯亮蓝染色与硝酸银染色效果相当;使用24 cm胶条的蛋白分辨率明显高于13 cm胶条;检索数据库物种设为Metazoa(Animals)可获得比Drosophila(Fruit flies)更加全面的信息。【结论】使用24 cm p H 4~7的IPG胶条对BPP法提取的桔小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳,采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色,可得到更好的双向电泳图谱,检索数据库时检索物种可优先设为Metazoa(Animals)。
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| 关 键 词： | 桔小实蝇 蛋白质提取方法 双向电泳 |
Establishment and optimization of a two-dimensional gel electrophoresis system forBactroceradorsalis (Hendel) larvae crude protein |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bactroceradorsalis(Hendel) crude protein extraction methods two-dimensional gel electrophoresis |
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