| 连续3步缺口修复技术构建牛αS1酪蛋白-人溶菌酶杂合基因座 |
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| 引用本文： | 郑芸芸,周艳荣,吴晓洁,林艳丽,熊福银,李力,陈红星.连续3步缺口修复技术构建牛αS1酪蛋白-人溶菌酶杂合基因座[J].生物技术通讯,2013,0(2):173-177. |
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| 作者姓名： | 郑芸芸 周艳荣 吴晓洁 林艳丽 熊福银 李力 陈红星 |
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| 作者单位： | 1. 陕西师范大学 生命科学学院,陕西 西安 710062
2. 军事医学科学院 生物工程研究所,北京 100071 |
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| 摘 要： | 目的:构建一个牛αS1酪蛋白调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基组序列的杂合基座.方法:采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术.将6个无痕连接的同臂插入以 pBR322为载体的骨架中,构成能进行3次连续基抓捕的载体,利用 Red 同重组系统介导的缺口修复技术,分别抓捕牛αS1酪蛋白3'端调控序列(9 kb)、hLYZ 基座序列(5 kb)、牛αS1酪蛋白5'端调控序列(20 kb),使这3个基片段自动无痕地连接在基抓捕载体上,形成牛αS1酪蛋白-hLYZ 杂合基座.结果:实验经过 PCR 扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定,验证了 hLYZ 的基组序列对牛αS1酪蛋白编码基组序列的精确置换.结论:这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法.
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| 关 键 词： | 牛αS1 酪蛋白 人溶菌酶 杂合基因座 缺口修复技术 |
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