| 连续3步基因抓捕构建牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座 |
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| 引用本文： | 吕月蒙,吴晓洁,周艳荣,熊福银,林艳丽,陈红星.连续3步基因抓捕构建牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座[J].生物技术通讯,2011,22(6):796-800. |
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| 作者姓名： | 吕月蒙 吴晓洁 周艳荣 熊福银 林艳丽 陈红星 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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| 摘 要： | 目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。方法:采用连续3步基因抓捕的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行3次基因抓捕的抓捕载体;然后,在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,第一步从含牛αS1酪蛋白基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3’端侧翼序列到抓捕载体上,第二步从人tPA BAC上亚克隆17 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TGA)的人tPA基因组序列,第三步从牛αS1酪蛋白BAC上亚克隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5’端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个长约46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座中,原牛αS1酪蛋白基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被人tPA基因组序列精确置换。结论:连续三步基因抓捕构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了探索性研究。
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| 关 键 词： | 杂合基因座 细菌人工染色体 牛αS1酪蛋白 组织型纤溶酶原激活剂 |
A Successive Three-Step Gap-Repair Method to Generate the Bovine oS1-Casein-htPA Hybrid Gene Locus |
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| L Yue-Meng,WU Xiao-Jie,ZHOU Yan-Rong,XIONG Fu-Yin,LIN Yan-Li,CHEN Hong-Xing.A Successive Three-Step Gap-Repair Method to Generate the Bovine oS1-Casein-htPA Hybrid Gene Locus[J].Letters in Biotechnology,2011,22(6):796-800. |
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| Authors: | L Yue-Meng WU Xiao-Jie ZHOU Yan-Rong XIONG Fu-Yin LIN Yan-Li CHEN Hong-Xing |
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| Institution: | Lu Yue-Meng,WU Xiao-Jie,ZHOU Yan-Rong,XIONG Fu-Yin,LIN Yan-Li,CHEN Hong-Xing Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hybrid locus bacterial artificial chromosome bovine αS1-casein human tissue plasminogen activator |
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