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| 苏云金芽孢杆菌vip3A基因的鉴定、克隆及活性分析 | |
| 引用本文： | 申建茹,侯名语,郭巍.苏云金芽孢杆菌vip3A基因的鉴定、克隆及活性分析[J].微生物学报,2009,49(1):110-116. |
| 作者姓名： | 申建茹 侯名语 郭巍 |
| 作者单位： | 1. 河北农业大学植物保护学院,河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,保定,071001 2. 河北农业大学生命科学学院,保定,071001 3. 河北农业大学植物保护学院,河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,保定,071001;河北农业大学生命科学学院,保定,071001 |
| 基金项目： | 国家“973项目”——国家重点基础研究发展计划（2003CB114201） |
| 摘 要： | 【目的】鉴定我国自行分离的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）菌株中vip3A基因的分布和基因型，从其中对鳞翅目幼虫表现高毒力的Bt菌株中克隆vip3Aa基因。【方法】利用PCR-RFLP方法确定vip3A基因的分布和鉴定基因型，利用PCR方法克隆vip3A全长基因。【结果】171株野生型Bt菌株中共鉴定出63株含有vip3A基因，均与vip3Aa1类基因相似。从TF9和Bt16菌株中克隆得到2个vip3Aa基因，分别构建了携带vip3Aa基因的表达载体p30vip-26和p30vip-27，SDS-PAGE和Western Blot分析表明，IPTG诱导后均可表达88 kDa左右的Vip3A蛋白，蛋白可溶性分析表明约10%可溶。这两种基因序列已被国际Bt基因命名委员会分别正式命名为vip3Aa26和vip3Aa27。生物测定结果显示，Vip3Aa27蛋白对粉纹夜蛾（Trichoplusia ni）、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）和棉铃虫（Helicoverpa armigera）3种重要鳞翅目害虫初孵幼虫的毒力较高，LC50值分别为0.125 μg/mL，0.238 μg/mL和9.238 μg/mL。而Vip3Aa26蛋白仅对粉纹夜蛾有活性，LC50值为4.423 μg/mL。【结论】本研究中的Vip3Aa27蛋白对粉纹夜蛾、甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫均能表现高杀虫活性，而Vip3Aa26蛋白仅对粉纹夜蛾幼虫有活性，实验结果表明Vip3A蛋白个别氨基酸的变化对其杀虫活性影响很大。 |
| 关 键 词： | 苏云金芽孢杆菌 营养期杀虫蛋白vip3Aa基因 克隆 表达 杀虫活性 |
| 收稿时间： | 2008/7/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2008/10/19 0:00:00 |
Identification and Cloning of vip3A Genes from Isolates of Bacillus thuringiensis and Their Bioactivity Analysis |
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| Jianru Shen,Mingyu Hou and Wei Guo.Identification and Cloning of vip3A Genes from Isolates of Bacillus thuringiensis and Their Bioactivity Analysis[J].Acta Microbiologica Sinica,2009,49(1):110-116. | |
| Authors: | Jianru Shen Mingyu Hou and Wei Guo |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bacillus thuringiensis vegetative insecticidal proteins (VIPs) vip3A gene cloning expression insecticidal activity |
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