胆型螺旋杆菌（Helicobacter bilis）的分离、鉴定与序列分析

鉴定分离到的微需氧菌为螺旋杆菌，并对该菌进行分型。小鼠皮下或肌肉注射地塞米松使其免疫抑制，取小鼠肠内容物培养，对分离到的细菌，经油镜、电镜观察。然后提取细菌DNA，用根据螺旋杆菌（Helicobacter sp．）rRNA保守区设计的引物P7/P8进行扩增，并对扩增产物分别用MboI、HhaI、XspI内切酶酶切,酶切产物用10%PAGE分析。再用根据螺旋杆菌胆型（H. bilis）rRNA设计特异引物P7/Pb扩增，将扩增产物测序分析。最后，将该细菌在Scid小鼠上作动物感染。细菌在油镜下呈鸟翼状，电镜下观察到双极鞭毛，无周质纤毛。引物P7/P8扩增出374bp的特异带，此片段能分别被MboI、HhaI、Xsp内切酶酶切。引物P7/Pb扩增出364bp的条带，测得的DNA序列中存在MboI、HhaI、XspI的内切位点，与文献中H.bilis序列比较，同源性为97.5%。动物感染试验符合Koch准则。分离到的细菌确为胆型螺旋杆菌。