SV40PolyA片段串联拷贝数目影响GFP报告基因表达 |
| |
引用本文: | 尹康,马欢,王秀芳,谢英,冯晶晶,杨钦清,吕占军.SV40PolyA片段串联拷贝数目影响GFP报告基因表达[J].中国科学:生命科学,2011(3):187-194. |
| |
作者姓名: | 尹康 马欢 王秀芳 谢英 冯晶晶 杨钦清 吕占军 |
| |
作者单位: | 河北医科大学实验动物学部遗传研究室河北省实验动物重点实验室; |
| |
基金项目: | 河北省自然科学基金(批准号:C2008001065和C2011206043)资助项目 |
| |
摘 要: | Alu元件(约280bp)是人类基因组中的重要重复序列,串联Alu呈长度依赖性下调GFP报告基因表达,在Alu串联序列上游正向或反向插入SV40PolyA(简称PolyA,240bp),解除Alu串联序列对GFP基因的抑制作用.PCR法扩增PolyA反序(PolyAas)不同位置的60bp片段,插入pAlu14质粒(14个Alu正向串联插入pEGFP-C1)的GFP基因和Alu14之间,瞬时转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察和Northern检测,1F1R(PolyAas5′端第1个60bp片段)和4F4R(自PolyAas5′端计算第4个60bp片段)不能活化基因;2F2R和3F3R(PolyAas中间的2段)可以解除Alu14对GFP基因的抑制作用.将2F2R和3F3R各自反复首尾串联,分别插入pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间,瞬时转染HeLa细胞,用插入4个2F2R的pAlu28,插入4个3F3R的pAlu18,插入4个3F3R的pAlu28作长度对照,以排除由于插入片段长度增加可能对结果造成的干扰,发现2~4个拷贝的2F2R和3F3R活化基因作用高于一个拷贝的同样片段,但是多于8拷贝以后,活化GFP基因作用减弱.本实验证明,SV40 PolyAas至少含有两段活化基因序列,活化基因序列(2F2R,3F3R)的最适活化基因条件需要合适的拷贝数.
|
关 键 词: | 拷贝数 SV40PolyA 重复序列 GFP Alu |
本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录! |
|