| PINK1与α-synuclein相互作用结构域鉴定 |
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| 引用本文： | 付越姣,段春礼,龚普盛,贾焕珍,张建亮,赵春礼,鲁玲玲,赵焕英,袁星星,杨慧.PINK1与α-synuclein相互作用结构域鉴定[J].中国生物工程杂志,2011,31(12):10-14. |
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| 作者姓名： | 付越姣 段春礼 龚普盛 贾焕珍 张建亮 赵春礼 鲁玲玲 赵焕英 袁星星 杨慧 |
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| 作者单位： | 首都医科大学北京神经科学研究所 北京市神经再生修复研究重点实验室 神经变性病教育部重点实验室 北京 100069 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(2011CB504103); 国家自然科学基金(30970940); 北京市教育委员会科技发展计划重点项目(KZ201010025022); 北京市自然基金面上项目(5102012); 北京市高校人才强教资助PHR(200907113)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的: 确定PINK1与α-synuclein相互作用的结构域。方法: 将PINK1不同结构域质粒(pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1WT, pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(G309D),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(ΔN35),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(ΔC145),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(156~509), pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(Δ156~581), pcDNA3.1-3xFlag-vector)分别和pCMV-Myc-α-synuclein质粒共转染人胚肾HEK293T细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)技术验证PINK1与α-synuclein相互作用的结构域;同时进行免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的共定位关系。结果: Co-IP实验结果表明PINK1与α-synuclein相互作用的结构域为PINK1的激酶结构域。免疫细胞化学实验也证实α-synuclein只与含激酶结构域的PINK1蛋白在细胞中存在共定位关系。结论: PINK1与α-synuclein相互作用的结构域位于其激酶结构域。
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| 关 键 词： | PINK1 α-synuclein 激酶结构域 免疫共沉淀 |
| 收稿时间： | 2011-07-26 |
| 修稿时间： | 2011-09-30 |
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