| 抑癌基因PTEN转基因小鼠的构建及表型初步分析 |
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| 引用本文： | 李洪昌,袁林,张令强.抑癌基因PTEN转基因小鼠的构建及表型初步分析[J].中国生物工程杂志,2015,35(8):1-8. |
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| 作者姓名： | 李洪昌 袁林 张令强 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室 北京 100850 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(31330021)、北京市自然科学基金(5142020)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)的转基因小鼠模型并对其表型进行初步分析。方法:细菌人工染色体(BAC)载体系统构建打靶载体创建PTEN转基因小鼠模型;利用对鼠尾DNA进行PCR检测的方法对出生的F0代小鼠进行基因型鉴定,将阳性F_0代小鼠与野生型小鼠交配繁殖筛选稳定遗传的转基因系。分离并培养小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF),利用Western blotting检测比较转基因阳性小鼠与同窝野生型小鼠MEF细胞中PTEN的蛋白表达水平,并通过克隆形成实验对比PTEN转基因小鼠与野生型小鼠MEF细胞的增殖能力;取成年小鼠主要组织器官提取蛋白,Western blotting检测PTEN转基因小鼠主要组织的PTEN蛋白表达情况;从小鼠出生后第三周开始统计、分析并制作小鼠的体重生长曲线;此外,还对比了PTEN转基因小鼠与野生型小鼠肺、肝、脾脏的细胞大小与腹腔内的脂肪含量。结论:PTEN转基因小鼠能够存活并稳定遗传;Western blotting结果表明,不论在胚胎期还是成年期,PTEN转基因小鼠体内的PTEN蛋白水平均高于同窝的野生型小鼠,转基因小鼠的PTEN表达水平接近野生型水平的3倍;对PTEN转基因小鼠的整体表型进行初步分析,发现Pten基因在体内过表达后,小鼠的体型显著变小,而细胞大小不变;腹腔内的脂肪含量显著减少。结论:成功构建了PTEN转基因小鼠模型,并获得了生理条件下PTEN过表达的原代细胞系,为研究抑癌基因PTEN的体内生理功能提供了重要的动物模型。
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| 关 键 词： | 肿瘤 小鼠 转基因技术 PTEN 抑癌基因 |
| 收稿时间： | 2015-03-24 |
Construction of Transgenic Mice and Phenotypic Analysis of Tumor Suppressor PTEN |
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| LI Hong-chang,YUAN Lin,ZHANG Ling-qiang.Construction of Transgenic Mice and Phenotypic Analysis of Tumor Suppressor PTEN[J].China Biotechnology,2015,35(8):1-8. |
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| Authors: | LI Hong-chang YUAN Lin ZHANG Ling-qiang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tumor Mouse Transgenic technology PTEN Tumor suppressor gene |
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