| Pfu DNA聚合酶的表达条件优化及纯化研究 |
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| 引用本文： | 欧阳乐军,李莉梅,布梁灏,刘雅丽,柳镜炬,黄嘉玲,蔡治全,赵俊仁,倪燕妹,黄明超.Pfu DNA聚合酶的表达条件优化及纯化研究[J].基因组学与应用生物学,2019,38(12):5458-5464. |
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| 作者姓名： | 欧阳乐军 李莉梅 布梁灏 刘雅丽 柳镜炬 黄嘉玲 蔡治全 赵俊仁 倪燕妹 黄明超 |
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| 作者单位： | 广东石油化工学院,茂名,525000;广东农垦热带作物科学研究所,茂名,525000 |
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| 基金项目： | 广东省大学生攀登计划项目;广东省大学生攀登计划项目;重点项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;国家自然科学基金;广东省自然科学基金;广东省科技计划 |
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| 摘 要： | Pfu DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的高保真DNA聚合酶之一。本研究对重组菌株的Pfu酶基因表达条件进行优化,以提高Pfu DNA聚合酶的表达效率。通过在菌液深度OD600=0.87时加入1.5 mmol/L的IPTG进行诱导培养,诱导培养时间为11.03 h,用酶溶法对重组菌株进行破胞提取粗酶液,经热变性法与盐析沉淀法对杂酶进行纯化,最后经过透析后得到纯酶。采用考马斯亮蓝G-250法对酶进行含量测定及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,最后使用PCR反应检测提纯后的Pfu酶的活性。结果表明优化处理后制备的Pfu DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Pfu DNA聚合酶水平。本研究为Pfu DNA聚合酶的开发和利用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 高保真 DNA聚合酶 热变性 PCR反应 |
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