鸡X期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力，本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后，直接显微注入同期受体胚盘（140枚）；或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选性后显微注入同期受体鸡胚盘（140枚）；或将供体细胞体外培养48h，再与脂质体-P^GSI复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘（190枚），制备转基因嵌合体鸡，并应用PCR和RAPD方法，对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明：直接注射组孵化率（5.7%)显著（P＜0.01)高于G418筛选处理组（1.4%)和培养48h处理组（2.1%)；G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明，体外培养48h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力，利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。