瓯江2种(鱼骨)的ISSR分析优化和自然种群遗传多样性的研究

以唇鱼骨]和花鱼骨]为材料，对影响PCR反应的主要因子-模板DNA、引物、dNTPs、Mg2＋、Taq酶浓度进行优化，建立了适合唇鱼骨]和花鱼骨]基因组DNA的ISSR—PCR反应体系。25灿L的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为：约60ng模板DNA、1．2UTaq酶、0．4μmol／L引物、2．0mmol／LMgCl，、0．2mmol／LdNTPs、2％甲酰胺。利用优化反应体系从60个ISSR引物中，筛选出18个稳定性高、重复性好的引物，对25个唇鱼骨]个体和22个花鱼骨]个体的DNA进行正式扩增，分别从两个种群分别扩增到168和156条扩增谱带，扩增片段长度在200--1500bp之间。根据扩增结果计算出两个种群的多态位点比例分别为67．52％和53．21％，Shannon多样性指数分别为0．3450和0．2749，Nei’s指数分别为0．2292和0．1837，平均有效等位基因数分别为1．3875和1．3169。两个种群内样本间的平均遗传距离分别为0．2129和0．1529，结果表明两个种群的遗传多态性较高，其中唇鱼骨]的多样性明显高于花鱼骨]群体。引物UBC845扩增的610bp带和UBC854扩增的1240bp带为唇鱼骨]种的特异性谱带。鱼骨]属鱼类基因组中均含有微卫星DNA序列：（AG）8、（GA）8、（CT）8和（GAA）8。本研究为唇鱼骨]和花鱼骨]的种质保护、合理开发利用以及选择育种提供了一些基础数据。

OPTIMIZATION OF ISSR ANALYSIS AND STUDY ON GENETIC DIVERSITY OF TWO NATURE POPULATIONS OF HEMIBARBUS FROM OUJIANG RIVER