| 丝状真菌里氏木霉中shRNA沉默红色荧光基因 |
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| 引用本文： | 李洁璇,刘雯莉,梁智成,王绍文,梁秀怡,佘炜怡,刘刚,田生礼.丝状真菌里氏木霉中shRNA沉默红色荧光基因[J].微生物学杂志,2016(4):7-15. |
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| 作者姓名： | 李洁璇 刘雯莉 梁智成 王绍文 梁秀怡 佘炜怡 刘刚 田生礼 |
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| 作者单位： | 深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060,深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060,深圳市海洋生态与生物资源重点实验室 深圳大学，广东 深圳 518060,深圳市海洋生态与生物资源重点实验室 深圳大学，广东 深圳 518060,深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060,深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060,深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060,深圳大学生命科学与海洋学院 深圳市微生物基因工程重点实验室，广东 深圳 518060 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31070044）；深圳市科技基础研究发展计划(ZYC201105130092A) |
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| 摘 要： | 报道了在里氏木霉中建立的一种以红色荧光蛋白(DsRed)为报告基因的RNA干扰方法。首先,将构建的表达DsRed质粒p ANRed1转化里氏木霉QM9414,得到抗潮霉素B抗性并能稳定表达DsRed的菌株DsRed-T.reesei。其次,以丙酮酸脱氢酶启动子Ppdc和纤维二糖水解酶I终止子cbh I为原件,克隆到载体p PHL上构建质粒p PHL-Ppdc-Tcbh1。根据DsRed基因序列设计特定的siRNA干扰序列和另一条无同源序列的siRNA作为阴性对照,克隆到载体p PHL-Ppdc-Tcbh1得到重组质粒。将其转化到DsRed-T.reesei中,用含有100μg/m L潮霉素B和250μg/m L腐草霉素的PDA平板筛选转化子。结果表明,约79%的转化子出现红色荧光沉默现象,其中一些转化子DsRed的表达几乎完全被抑制。荧光定量PCR和Western印迹分析显示DsRed基因的表达受到不同程度的下调。以上结果提示,在里氏木霉中可用此方法研究基因表达调控。
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| 关 键 词： | RNA干扰 shRNA 红色荧光蛋白DsRed 里氏木霉 |
ShRNAs Silencing DsRed Gene in the Filamentous Fungus Trichoderma reesei |
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| LI Jie-xuan,LIU Wen-li,LIANG Zhi-cheng,WANG Shao-wen,LIANG Xiu-yi,SHE Wei-yi,LIU Gang and TIAN Shen-li.ShRNAs Silencing DsRed Gene in the Filamentous Fungus Trichoderma reesei[J].Journal of Microbiology,2016(4):7-15. |
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| Authors: | LI Jie-xuan LIU Wen-li LIANG Zhi-cheng WANG Shao-wen LIANG Xiu-yi SHE Wei-yi LIU Gang and TIAN Shen-li |
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| Institution: | Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin.,,Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin.,,Shenzhen Municip. Key Lab. of Oceano Ecol. & Bio Res., Shenzhen Uni., Shenzhen 518060,Shenzhen Municip. Key Lab. of Oceano Ecol. & Bio Res., Shenzhen Uni., Shenzhen 518060,Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin.,,Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin.,,Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin., and Coll. of Life Sci. & Oceanol., Shenzhen Municip. Key Lab. of Micro Genetic Engin., |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference shRNA DsRed Trichoderma reesei |
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