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| 米非司酮调控的单链鼠白介素12真核表达载体的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 陈坚,薛绪潮,方国恩,苏长青,钱其军.米非司酮调控的单链鼠白介素12真核表达载体的构建及鉴定[J].生物学杂志,2008,25(6). |
| 作者姓名： | 陈坚 薛绪潮 方国恩 苏长青 钱其军 |
| 作者单位： | 1. 解放军第81医院,肿瘤外科,江苏,南京,210002 2. 上海第二军医大学附属长海医院普通外科,上海,200433 3. 东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 构建含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,在体外鉴定其调控表达效果.用PcR技术从GCp35Ep40PN质粒上获取白细胞介素12的p40和p35亚基的基因,通过2次PCR技术引入linker后得到单链白细胞介素12基因,将其与米非司酮诱导调控系统克隆入pDC312质粒,构建成真核表达载体pDC-RumIL-12,通过限制性内切酶和PCR鉴定其正确性.在体外用脂质体转染法将pDc-RumIL-12载体转染HEK293细胞株,以不同的剂量米非司酮诱导载体表达,然后用ELISA法检测培养液上清中mIL-12蛋白的含量.测序结果表明所得鼠白细胞介素-12融合单链基因序列与设计相一致.酶切分析和PCR证实载体pDC-RumIL-12构建正确.将pDc-RUmlL-12转染HEK293细胞并经米非司酮诱导表达后,ELISA检测结果表明该栽体有良好的调控能力.没有诱导剂米非司酮时,只有极少量的mIL-12蛋白表达,而加入诱导剂米非司酮后,mIL-12表达量明显增加,并在一定范围内与米非司酮剂量呈正比.成功构建了含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核栽体,可用于肿瘤的基因治疗研究. |
| 关 键 词： | 白细胞介素-12 米非司酮 诱导表达 融合基因 |
Construction and identification of mefepristone-regulated eukaryotic expression vector containing single chain fusion murine IL-12 gene |
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| CHEN Jian,XUE Xu-chao,FANG Gao-en,SU Chang-qing,QIAN Qi-jun.Construction and identification of mefepristone-regulated eukaryotic expression vector containing single chain fusion murine IL-12 gene[J].Journal of Biology,2008,25(6). | |
| Authors: | CHEN Jian XUE Xu-chao FANG Gao-en SU Chang-qing QIAN Qi-jun |
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