| 用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人肝脏cDNA噬菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白 |
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| 引用本文： | 于晓明,张维冰,张丽华,张玉奎.用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人肝脏cDNA噬菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白[J].中国生物工程杂志,2007,27(10). |
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| 作者姓名： | 于晓明 张维冰 张丽华 张玉奎 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,大连,116023;中国科学院研究生院,北京,100049
2. 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,大连,116023 |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用氨甲蝶呤(MTX)偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞cDNA噬菌体展示文库中筛选与MTX相互作用的蛋白.方法:以偶联于琼脂糖凝胶表面的MTX为配基,通过"结合-洗脱-扩增"过程筛选与MTX相互作用的噬菌体.利用PCR对筛选结果进行监测,对筛选得到的噬菌体PCR产物进行序列测定和基因同源性分析.结果:通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体克隆,再通过PCR获得cDNA插入片段.通过BLAST程序搜索GenBank,证明筛选到的片段与人PI-3K相关蛋白激酶SMG-1异构体1蛋白同源性达100%.结论:利用偶联MTX的琼脂糖凝胶作为筛选基质,从T7噬菌体展示cDNA文库中富集特异噬菌体是一种方便、高效的MTX相互作用靶蛋白筛选方法,可为探讨小分子药物的分子作用机制提供借鉴和参考.
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| 关 键 词： | 噬菌体展示技术 肝脏细胞 cDNA文库 氨甲蝶呤 相互作用 |
Screening of Methotrexate Binding Protein from Phage Displayed cDNA Library of Human Liver by Methotrexate Coupled Agrose Gel Elutriation |
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| YU Xiao-ming,ZHANG Wei-bing,ZHANG Li-hua,ZHANG Yu-kui.Screening of Methotrexate Binding Protein from Phage Displayed cDNA Library of Human Liver by Methotrexate Coupled Agrose Gel Elutriation[J].China Biotechnology,2007,27(10). |
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| Authors: | YU Xiao-ming ZHANG Wei-bing ZHANG Li-hua ZHANG Yu-kui |
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