一个新的睾丸特异表达基因的克隆及功能的初步分析

运用“数据库消减杂交”(digital differential display)方法来筛选人类睾丸特异表达新基因，获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群。挑选其中一个克隆重叠群HS．326528进行多组织RT—PCR，初步获得该重叠群在人睾丸中有高表达。从该重叠群的IMAGE出发，采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列，其全长1044bp，开放阅读框为214～529bp，定位于15q26．2，编码由105个氨基酸组成、分子量为11．7kD、等电点为10．09的一个碱性蛋白，该蛋白与已知蛋白无明显的同源性，克隆实验证明该基因的阅读框完全正确，RT—PCR和Northern blot显示该基因在人类睾丸中特异表达，实时PCR结果表明：该基因在成人睾丸中高表达，在精子中有中度表达，在胚胎睾丸中低表达，推测该基因与精子的生成有关，命名为SRG8(homo sapiens spermatogenesis—related gene 8)(GenBank登录号：AY489187)，该基因编码的蛋白定位于细胞核。流式结果分析表明，SRG8基因能够促使HeLa细胞由S期向G2期的转变，从而加速细胞的分裂。这些结果表明SRG8基因可能在睾丸的发育及精子的形成过程中起重要的作用。

Molecular Cloning and Primary Functional Analysis of a Novel Human Testis-specific Gene