大规模细胞培养技术

本文的目的在于从应用、存在问题和潜力等方面论述了大规模细胞培养的现状。由于大多数大规模细胞培养方法具有商业和专利权性质,除提到某些重大的成果外,本文不想详细叙述许多科学成果。本文主要涉及那些现有的商业生产方法,但也注意到那些具有潜在应用价值的革新。本文虽提到植物细胞培养,但主要侧重于哺乳动物细胞。     

佛波酯能改变细胞表面糖蛋白N－糖链的结构

利用标记Ｎ－糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１表面糖蛋白上Ｎ－糖链结构的影响,发现１００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ处理５天后,可使细胞表面Ｎ－糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、Ｃ２Ｃ２,６三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸（ＲＡ）和双丁配环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）对该细胞表面Ｎ－糖链的影响相反。因ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而ＰＭＡ是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面Ｎ－糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。     

双丁酰环烯酸腺苷对人肝癌细胞株SMMC—7721表面N—糖…

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶研究了在双丁酰环磷酸腺苷（ｄＢ－ｃＡＭＰ）作用１－５过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链类型及复杂型糖链天线数的变化。结果表明,ｄＢ－ｃＡＭＰ促进＾３Ｈ－Ｍａｎ参人细胞表面Ｎ－糖链,使高甘露糖型Ｎ－糖链的百分比下降,并促进二天线Ｎ－糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和Ｃ２Ｃ２Ｃ６三天线Ｎ－糖链的百分比减少。结果提示,Ｎ－糖链结构的这些变     

组胺H_2受体激动剂和拮抗剂对WEHI_3细胞增殖的作用

近年来研究表明组胺及其受体在正常造血调控中起着重要作用。本研究用琼脂半固体培养技术观察了特异性组胺Ｈ２受体激动剂英普咪定和拮抗剂西咪替丁对髓系粒－单核细胞白血病干细胞株ＷＥＨＩ３细胞生长的影响。结果表明不同浓度的英普咪定（１０－８─１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对集落数呈明显剂量依赖性抑制,与对照组比较ｐ＜０．０１。１０－１０─１０－９ｍｏｌ／Ｌ英普咪定对集落数无明显影响。１０－４─６×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的英普咪定对集落产率的抑制作用趋于饱和。最大抑制效能为对照组的５４％（ｐ＜０．０１）。１０－４ｍｏｌ／Ｌ西咪替丁能完全阻断１０－８ｍｏｌ／Ｌ英普咪定的集落抑制作用。对≥１０－６ｍｏｌ／Ｌ英普咪定的作用西咪替丁均有部分阻断作用,与对照组比较Ｐ＜０．０１。单用西咪替丁对ＷＥＨＩ３细胞无明显直接作用。这提示ＷＥＨＩ３细胞株上存在有组胺Ｈ２受体,激动Ｈ２受体可抑制细胞增殖。     

喹诺酮类药物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

本文以２．２．１５细胞株为模型,以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ、细胞存活率为观察指标,综合评价了喹诺酮类药物吡哌酸（ＰｉｐｅｍｉｄｉｃＡｃｉｄ）、氟哌酸（Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、环丙氟哌酸（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｓｘａｃｉｎ）、氟嗪酸（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）体外抗ＨＢＶ效果。结果表明：吡哌酸、氟哌酸、环丙氟哌酸、氟嗪酸对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ５０％抑制浓度（ＩＤ＿（５０））分别为１１μｇ／ｍｌ、６４μｇ／ｍｌ、９３μｇ／ｍｌ、１０５μｇ／ｍｌ和１９９μｇ／ｍｌ、１１１μｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌ、２１７μｇ／ｍｌ,细胞存活率为５０％时的药物浓度（ＣＤ＿（５０））分别为２１９μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌ、１８１μｇ／ｍｌ、１６９μｇ／ｍｌ,在所选定的用药浓度范围内不同程度抑制培养上清液及细胞内ＨＢＶＤＮＡ及其复制中间体的产生。尤其对超螺旋结构ＤＮＡ（ｓｃＤＮＡ）有不完全抑制作用。     

IL-27：介导免疫相关疾病的新因子

白细胞介素27 (interleukin 27, IL-27)是一种多效性的细胞因子,能参与调节机体的先天性和适应性免疫。以往研究显示它能介导体内多种炎症反应,随着动物模型和技术手段的发展,多项研究表明它与自身免疫性疾病及其他免疫相关疾病密切相关,并被认为是治疗病毒性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤及肥胖的一个重要候选因子。因此本文就IL-27在艾滋病、类风湿关节炎、肿瘤及肥胖中的作用展开综述,旨在为免疫相关疾病的治疗提供新的思路。     

视黄酸和亚硒酸钠对肝癌细胞某些表型逆转的加和作用

 人肝癌细胞株SMMC-7721经1μmol/L视黄酸和或2.5μmol/L亚硒酸钠处理后,膜上纤维连接蛋白沉着量逐日上升,且较相应天数的对照组细胞增加,而甲胎蛋白分泌量和~3H-TdR参入率被明显抑制。视黄酸和亚硒酸钠同时处理的联合组作用强度接近于两者单独使用时作用强度的加和。对以上结果和视黄酸及亚硒酸钠使肝癌细胞接触抑制恢复及表型逆转的关系作了讨论。     

EZH2在人脂肪肉瘤的表达情况及EZH2抑制剂抗人脂肪肉瘤效果及机制研究

摘要 目的：探索组蛋白H3K27me3甲基转移酶EZH2在人脂肪瘤、高分化脂肪肉瘤和去分化脂肪肉瘤的表达情况及EZH2酶活性小分子抑制剂GSK126对人脂肪肉瘤细胞系SW872的影响,并初步探索其可能机制。方法：筛选脂肪瘤、高分化脂肪肉瘤和去分化脂肪肉瘤患者术后活检标本共计23例,其中脂肪瘤7例,高分化脂肪肉瘤9例,去分化脂肪肉瘤7例,制成组织芯片,免疫组化染色检测EZH2的蛋白表达情况。体外培养SW872 脂肪肉瘤细胞系,采用CCK-8 法检测不同浓度GSK126对细胞生存的抑制作用,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Realtime PCR法检测细胞的凋亡与抗凋亡（Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Bcl-2、Bag-3）、血管生成（VEGF-α）、干性（CD133、CD44、CD24）相关基因的表达,Western blot 检测内质网应激相关蛋白Bip和ATF4蛋白的表达量。结果：EZH2在去分化脂肪肉瘤的表达高于高分化脂肪肉瘤,在良性脂肪瘤中的阳性表达少见（均P＜0.05）。EZH2酶活性抑制剂GSK126对SW872 细胞的存活有明显的抑制作用,给药后细胞凋亡率增加（P＜0.05）,凋亡相关基因Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9均表达增强（均P＜0.05）,血管生成基因VEGF-?琢表达降低（P＜0.01）,干性基因CD133表达降低（P＜0.01）,其余基因表达无明显差别。GSK126组的内质网应激相关蛋白Bip和ATF4蛋白的表达增加。结论：EZH2蛋白表达量与脂肪肉瘤细胞分化程度呈负相关,EZH2有望成为脂肪肉瘤的生物学标志物及恶性程度标志物。EZH2抑制剂可能成为脂肪肉瘤潜在的化疗药物,可能通过增强内质网应激发挥作用。