家蚕性附腺发育与核酸及利它素蛋白变化的关系

对不同发育时期家蚕Bombyx mori雌性性附腺核酸和蛋白质含量测定的结果表明, 从家蚕化蛹后第6天到成虫羽化当天的性附腺内总蛋白质含量不断增加,至羽化当天为最高,达860±70 μg/对。不同时期内能引诱野蚕黑卵蜂识别寄主的利它素在总蛋白中所占的比例差异明显,从化蛹后第6天的10%增加到羽化后的58%。性附腺的总RNA含量从化蛹第6天到成虫羽化前1天几乎是直线增加,但羽化后下降很快。不同时期分泌部中总RNA含量变化与贮存部明显不同。含量最高时,分泌部RNA可占整个性附腺RNA的90%以上,而贮存部总RNA含量则远少于分泌部,羽化当天约为分泌部的十分之一。分泌部总RNA中的18S亚基含量远高于28S亚基,明显不同于贮存部的。从分泌部总RNA中分离的mRNA存在明显的条带分布,这预示着高丰度的mRNA的存在与总蛋白中高含量利它素的存在有着特殊对应关系。     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的cDNA文库构建

根据家蚕性附腺中含有的利它素能诱导野蚕黑卵蜂寄生涂有该利它素的人造卵及能用家蚕卵繁育野蚕黑卵蜂的特性 ,用化蛹 9天的家蚕雌蛹性附腺分泌部的高丰度的mRNA构建了富含利它素基因的cDNA文库。构建成的未扩增文库的滴度为 3.2 9× 10 4 pfu μL ,重组率为 90 .0 5 % ,扩增后的文库总滴度为 1.5 6× 10 7pfu μL。用PCR方法对总文库和随机挑取的噬菌斑进行扩增 ,表明λZiplox载体中已含有大小为 0 .5～ 8.0kb的cDNA插入片段 ,并在 2 .5kb、1.1kb和 0 .75kb处cDNA插入片段相对集中。所有分析结果表明 ,采用特定的发育时期和特定的组织提取的mRNA构建而成的cDNA表达文库具有较高频率的利它素基因片段和合适的滴度 ,定向插入技术并结合λZiplox噬菌体的表达功能 ,使构建的cDNA文库具有表达外源DNA的功能 ,有利于进行利它素基因的免疫筛选。     

不同食料对野蚕黑卵蜂卵巢发育和卵子发生的影响

以20%浓度蜂蜜、蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖为食料,研究了它们对野蚕黑卵卵巢发育和卵子发生的影响。结果表明,与对照相比(蒸馏水),蜂蜜、蔗糖、葡萄糖和果糖能促进野蚕黑卵蜂雌蜂卵巢发育和卵子发生,可使其卵巢管中较高的成熟卵量维持较长时间,即可延缓该蜂的卵子重吸收。甘露糖对野蚕黑卵蜂的卵子形成有一定的促进作用,但其所起的作用显然不如蜂蜜及其它3种糖类,并且也不能延缓该蜂的卵子重吸收。     

温度对野蚕黑卵蜂卵巢发育和卵子发生的影响

分别在19、22、25、28和31℃条件下,观察不同温度对野蚕黑卵蜂Telenomus theophilae Wu et Chen(Hymenoptera:Scelionidae)雌蜂卵巢发育和卵子发生的影响.结果表明,在19～28℃之间,雌蜂卵巢生长,基端卵子生长和卵巢中卵子发生的速度随温度上升而逐步加快.在31℃下,羽化1d后雌蜂卵巢长宽显著短于25℃和28℃下同日龄的的雌蜂,卵巢中成熟卵也显著减少,但从羽化后第2d开始,各项指标均与25℃和28℃下的接近.这说明该蜂对温度的适应范围较广,在19～31℃之间,虽然野蚕黑卵蜂的卵巢发育速度不同,但所能达到的最大卵量没有明显差异,说明这5个温度对于该蜂的卵子形成均较为适宜.     

基于超高效液相色谱-质谱技术对野蚕茧和家蚕茧化学成分进行比较

鉴定并比较野蚕茧与家蚕茧的化学成分对于理解家蚕的驯化具有重要的意义。利用高温高压结合甲醇-水提取的方法获得蚕茧中的化学成分,利用UHPLC-MS技术对野蚕、家蚕大造品种和皓月品种3种蚕茧丝中的小分子成分进行鉴定和比较分析。通过阳离子模式和阴离子模式的UHPLC-MS获得了野蚕、大造和皓月蚕茧丝的代谢指纹图谱,对鉴定到的高丰度化合物进行注释,发现其中包括了氨基酸、黄酮、生物碱、萜类、有机酸和木脂素等成分。PLS-DA的得分图表明,野蚕、家蚕大造品种和皓月品种的3种蚕茧的代谢组存在显著差异。发现脯氨酸、亮氨酸/异亮氨酸和苯丙氨酸在大造茧中的含量显著高于在野蚕和皓月茧中的含量,黄酮类植物次生代谢物在大造茧中的含量显著提高,包括槲皮素、异槲皮素、槲皮素-3-O-槐糖苷、槲皮素-3-O-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷和山奈酚;而神经碱、白桥楼碱、毛果芸香次碱、美洲豚草内酯、线叶泽兰素和中缅木莲素等生物碱、萜类和木脂素类的植物次生代谢物在野蚕茧中的含量显著高于在家蚕茧中的含量。在紫外光的激发下观察黄酮的绿色荧光发现家蚕大造茧中的黄酮含量最高,家蚕皓月茧中的黄酮含量最低,而野蚕茧中的黄酮含量居中。生物碱和有机酸是良好的抗虫抗菌剂,它们在野蚕茧中的含量较高,能够提高野蚕茧的防护能力。黄酮类物质在家蚕大造茧中的含量较高,是导致家蚕大造茧呈黄绿色的主要原因。     

温度对野蚕黑卵蜂寄主利它素的影响

利它素粗提液或涂利它素粗提液的人造卵经不同温度(25℃、60℃或100℃)处理30 min后进行生物活性测定,发现各温度下利它素仍对野蚕黑卵蜂有很强的引诱活性,其平均反应级数与常温(25℃)相比无明显差异,表现出一般蛋白质所没有的热稳定特性。低温 (4℃、0℃、-20℃或-70℃)同样也能保存粗提液中利它素的生物活性,但发现能引起粗提液发生凝集, 且0℃以下比4℃能产生更多的凝集, 使粗提液中利它素活性组分含量减少,-20℃时,其活性组分的峰面积仅为对照的13.1%,表现出一般蛋白质所没有的低温敏感性,这一发现对利它素的快速、简捷、有效分离具有重要的指导意义。     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的纯化及氨基酸组成分析

针对利它素特殊的物理及化学性质 ,采用特定的温度分离方法 ,成功地从野蚕Theophilamandarina和家蚕Bombyxmori的雌蛾性附腺中分别获得了纯度较高的野蚕黑卵蜂Telenomustheophilae寄主识别利它素。对这两种利它素氨基酸组成的分析表明 ,来自家蚕和野蚕雌蛾性附腺的利它素在氨基酸的组成和含量方面非常相似 ,在检测到的 15种氨基酸中 ,甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的克分子百分数在 10 %以上。从家蚕得到的分别为 2 8 1%、 18 5 %和 12 6 %。从野蚕得到的分别为 2 4 4%、18 1%和 10 1%。这 3种氨基酸之和在家蚕和野蚕中均超过 5 0 %以上。用凝胰乳蛋白酶对这两种利它素进行水解时发现溶液中均产生非水溶性沉淀 ,电泳表明沉淀的多肽蛋白分子量在 10kD左右。这显示在野蚕和家蚕利它素结构中 ,有着与家蚕丝蛋白相类似的结构 ,存在着结晶区域 (沉淀 )和无定形区域 (上清 )。     

中国野蚕一种强抗病毒蛋白的基因分析和活性鉴定

以最近报道的家蚕抗病毒蛋白基因为线索,从中国野蚕（Bombyx mandarina Moore）中肠内克隆了抗家蚕BmNPV病毒的SP-2 cDNA（GenBank登录号：AY945210）,基因大小855bp,编码284个氨基酸的蛋白质,分子量29．6kD,基因组全长1376bp,包含5个外显子和4个内含子．该基因的表达仅限于中肠,具有组织特异性,在幼虫龄中表达水平较高,而在眠期和熟蚕没有表达．推导其氨基酸序列,发现其C端氨基酸序列与已报道的家蚕相应序列差别较大,有8个氨基酸完全不同．通过体外重组技术,由高效基因表达系统获得大量重组蛋白,发现该蛋白具有很强的抗家蚕BmNPV活性,与家蚕对应的抗病毒蛋白BmSP-2相比,其抗BmNPV活性高1．6倍．初步认为,该蛋白质C端序列差异可能是造成家蚕与野蚕抗病毒活性差别的主要原因．     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的纯化及氨基酸组成分析

针对利它素特殊的物理及化学性质,采用特定的温度分离方法,成功地从野蚕Theophila mandarina和家蚕Bombyx mori的雌蛾性附腺中分别获得了纯度较高的野蚕黑卵蜂Telenomus theophilae寄主识别利它素。对这两种利它素氨基酸组成的分析表明,来自家蚕和野蚕雌蛾性附腺的利它素在氨基酸的组成和含量方面非常相似,在检测到的15种氨基酸中,甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的克分子百分数在10%以上。从家蚕得到的分别为28.1%、18.5%和12.6%。从野蚕得到的分别为24.4%、18.1%和10.1%。这3种氨基酸之和在家蚕和野蚕中均超过50%以上。用凝胰乳蛋白酶对这两种利它素进行水解时发现溶液中均产生非水溶性沉淀,电泳表明沉淀的多肽蛋白分子量在10 Kd左右。这显示在野蚕和家蚕利它素结构中,有着与家蚕丝蛋白相类似的结构,存在着结晶区域（沉淀）和无定形区域（上清）。