体细胞克隆牛和转基因体细胞克隆牛的遗传学分析(英)

分析了来自同一细胞系的体细胞克隆牛甜甜、庆庆、浒娃及来源同一培养转基因体细胞系转基因体细胞克隆牛九妹、乐娃和1个妊娠8个月转基因流产胎牛8C2以及随机抽取的1头鲁西黄牛(LX)、1头褐斯坦牛(HS)在24个微卫星位点标记牛的基因型.结果表明24个多态位点均表现出多态,等位基因数为1～5个,平均为3.17个.根据网上公布的数据,按其最高频率计算,甜甜、庆庆、浒娃、九妹、乐娃、8C2与培养细胞系、转基因细胞系间匹配概率为1.17×10^－36,根据本研究观察到的数据计算,匹配概率为1.90×10^－23;而与随机抽取的1头鲁西黄牛及褐斯坦牛的基因型分别在23和20个位点上完全不同.     

高考生物学热点问题浅析

高考热点问题，指的是那些对社会影响大、几乎人所共知、易被学生接受的与生物学知识有关的内容。高考热点问题的题材具有时效性强、影响面广等特点。如克隆羊、人类基因组计划、细胞周期蛋白的发现等。     

免疫荧光染色检测克隆牛X染色体组蛋白H3 Lys 4 二甲基化修饰

利用免疫荧光染色, 检测胎儿成纤维细胞(FFB)和输卵管上皮细胞(FOV)来源的克隆牛X中期染色体组蛋白H3 K4m2修饰状况。结果发现, 这两种细胞系来源的克隆牛耳组织细胞系X染色体H3 K4m2修饰与供体核FFB细胞系和常规繁殖牛耳组织细胞系的修饰基本一致, 而与供体核FOV细胞系有较大差异。     

转基因克隆牛胎盘中印迹基因PEG10的DNA甲基化水平

低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死亡是否与其胎盘中印迹基因的甲基化的重编程程度相关,文章通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)和亚硫酸氢盐联合限制性内切酶分析法(Combined bisulfite restriction analysis,COBRA),对印迹基因PEG10在围产期死亡且存在发育缺陷的转基因克隆牛的胎盘(死亡组)和存活的转基因克隆牛的胎盘(存活组)与正常对照牛胎盘(对照组)的DNA甲基化水平进行了详细的比较。结果发现,与对照组相比,PEG10基因在死亡组上表现出异常的超甲基化水平,而存活组与对照组相比无显著性差异。研究结果显示,胎盘中印迹基因的DNA甲基化表观重编程不彻底可能是导致转基因克隆牛发育异常进而死亡的主要原因之一。     

国内首批克隆牛即将生产

山东银香伟业集团董事长王银香介绍说,2002年1、2月间在山东曹县五里墩降生的5头克隆牛已经全部怀孕,预产期为4月中上旬。中国科学院动物研究所陈大元教授说:“如果这一实验成功,将进一步证明克隆牛具有正常的生育繁殖能力。”此前,世界上第1头克隆羊“多莉”曾成功繁育过后代。2001年,中国科学院动物研究所在山东省曹县五里墩进行“家畜体细胞无性繁殖(克隆)”科学研究。2002年初,先后有14头体细胞克隆牛降生,成为中国第1批自主培育的本土克隆牛,并有5头顺利存活。摘自《科学时报》2004年3月26日国内首批克隆牛即将生产…     

转基因克隆牛

台湾大学农学院畜产学系科研人员用细胞核移植技术生产转基因克隆牛。其方法 :将受胎牛成纤维母细胞和卵丘细胞 ,经用电穿孔法把带有牛乳蛋白启动子 (α LA)序列与胞外岐氧化酶素 (ECSOD)的cDNA融合基因整合到其基因组 (genome)后 ,待 1月筛选并经PCR测试 ,证明已成功建立初代培养的两种供核细胞 ;另外应用这种携带有αLA ECSOD基因的受胎牛成纤维母细胞和牛卵丘细胞分别为供核源 ,经移植生产转基因克隆牛囊胚 ,试验结果共获 4 0个正常牛囊胚 ,其效率为 2 6 .7% (4 0 / 14 8)。将其中 2 0个源自核移植生产的囊胚移植于 13头受胚牛后…     

DNA甲基化对牛Igf-2r表达的影响及其在克隆牛发育中的作用

目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程导致发育过程中一些重要的基因异常表达。运用DNA甲基化转移酶抑制剂5′-脱氧胞苷(5′-azacytidine,5′-aza)处理MDBK细胞(牛肾上皮细胞),并通过实时荧光定量PCR方法对Igf-2r基因的表达进行了定量分析;在此基础上,应用亚硫酸盐甲基化测序法检测正常牛及克隆牛脑、肺、心、肝组织Igf-2r印迹调控区DMR2(DNA differentially methylated region,DMR)及非印迹调控区3′-UTR(3′-untranslated region,UTR)的DNA甲基化水平。研究发现,5′-aza处理MDBK细胞后,Igf-2r基因的表达上调。正常牛各组织中Igf-2r DMR2区的DNA甲基化程度差异较大,3′-UTR区较稳定;与正常牛相比,克隆牛DMR2区的甲基化程度变化较大,3′-UTR区无显著性变化。结果表明,DNA甲基化修饰影响Igf-2r基因的表达。正常牛不同组织中Igf-2r基因DMR2区的DNA甲基化程度不同,提示Igf-2r基因的印迹调控方式在不同组织中可能不同。克隆牛发育过程中,调控Igf-2r基因印迹的DMR2表观结构被明显改变,而非印迹调控区3′-UTR则无明显变化,提示Igf-2r基因印迹调控区被破坏,很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因。     

克隆牛为克隆羊“作证”

克隆牛为克隆羊“作证”郑仲承（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词克隆羊克隆牛克隆羊多莉的诞生在社会各界引起强烈反响。但是,提供克隆用的体细胞的供体在制造多莉前就不在人世了,这些细胞是在液氮中“尘封”多年的。于是,有人质疑多莉的身份...     

Association between mitochondrial DNA haplotype compatibility and increased efficiency of bovine intersubspecies cloning

Reconstructed embryos derived from intersubspecies somatic cell nuclear transfer (SCNT) have poorer developmental potential than those from intrasubspecies SCNT. Based on our previous study that Holstein dairy bovine (HD) mitochondrial DNA (mtDNA) haplotype compatibility between donor karyoplast and recipient cytoplast is crucial for SCNT embryo development, we performed intersubspecies SCNT using HD as donor karyoplast and Luxi yellow heifer (LY) as recipient cytoplast according to mtDNA haplotypes determined by polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis. The results demonstrated that intersubspecies mtDNA homotype SCNT embryos had higher pre- and post-implantation developmental competence than intrasubspecies mtDNA heterotype embryos as well as improved blastocyst reprogramming status, including normal H3K9 dimethylation pattern and promoter hypomethylation of pluripotent genes such as Oct4 and Sox2, suggesting that intersubspecies SCNT using LY oocytes maintains HD cloning efficiency and may reprogram HD nuclei to develop into a normal cloned animal ultimately. Our results indicated that karyoplast-cytoplast interactions and mtDNA haplotype compatibility may affect bovine intersubspecies SCNT efficiency. This study on bovine intersubspecies SCNT is valuable for understanding the mechanisms of mtDNA haplotype compatibility between karyoplast and cytoplast impacting the bovine SCNT efficiency, and provides an alternative and economic resource for HD cloning.     

强烈的求知欲高度的责任感

中国工程院院士曾溢滔教授是著名的医学遗传学专家。他是我国基因诊断主要开拓者之一,在攻克遗传病的基因诊断和产前诊断;在血红蛋白病领域;在奶牛胚胎性别鉴定和性别控制以及体细胞克隆牛和转基因动物生物反应器等研究领域成绩显著。在科研生涯中,他总结出的“幻想与求实、继承与发扬、责任与动力”的可贵经验,值得借鉴和发扬。他具有“强烈的求知欲和高度的社会责任感”,他的执着追求精神给人以鼓舞和力量。该文经作者同意全文转载自中国工程院学部工作部编发的《中国工程院院士自述》一书。