不同启动子调控羰基还原酶基因在枯草芽胞杆菌中的表达水平

为了实现羰基还原酶基因mldh在枯草芽胞杆菌中的高效表达,以摩氏摩根菌MorganellamorganiiCMCC（B）49208染色体DNA为模板,PCR扩增得到目的基因mldh,分别与启动子PQ和启动子p43进行连接,构建不同启动子组合的表达载体PHY—p43-mldh、PHY—PQ—mldh、PHY—p43-p43-mldh和PHY—p43-PQ—mldh,化学法转化B．subtilisWb600后对重组茵细胞破碎液进行SDS-PAGE分析及全细胞生物转化反应实验发现,4种重组茵的转化能力差异显著,其中重组菌B．subtilisWb600（PHY—p43-p43-mldh）进行全细胞转化反应,转化液中d-伪麻黄碱的浓度最高,达到142．1mg／L,底物转化率为78．25％,成功实现了羰基还原酶基因mldh在枯草芽胞杆菌中的高效表达。     

Morganella morganii J-8羰基不对称还原酶的分离纯化及性质研究

由本实验室筛选得到的摩尔摩根氏菌J-8菌株可将底物1-苯基-2-甲氨基丙酮专一性地转化为d-伪麻黄碱。以M. morganii J-8为出发菌株,菌体超声破碎后,经硫酸铵沉淀、Phenyl Superose疏水柱层析、DEAD阴离子柱层析和非变性凝胶电泳四步纯化获得电泳纯羰基不对称还原酶。亚基分子质量为42.5 kD,高效液相色谱分析酶的分子质量约为84.1 kD,初步认为该酶为二聚体蛋白。对所得到的部分纯化酶的酶学性质做了初步研究,纯酶进行基质辅助激光解析电离-飞行质谱分析,比对结果显示为与亮氨酸脱氢酶蛋白有很高相似性。     

外源

外源     

传导式干燥机引入红外技术的探讨

传导式干燥机广泛应用于农副土特产品的干燥过程，干燥时辐射能量仅占总传递能量的５％。经计算，引入红外加热技术后，辐射能量所占比例由５％提高至１８％，从而降低了干燥介质（饱和水蒸汽）的消耗量。     

重组酵母菌生物合成麻黄碱的特性及L-Phe对其合成的影响

目的：探讨12株重组酵母菌生物合成麻黄碱的特性及L-Phe对麻黄碱生物合成的影响。方法：以葡萄糖为碳源、NaNO3为氮源对重组酵母菌进行培养,在相同条件下,在液体培养基中添加5mg/L的L-Phe,利用反向高压液相色谱（RP-HPLC）测定重组酵母菌培养液中麻黄碱和伪麻黄碱的含量。结果：重组酵母菌培养液中麻黄碱和伪麻黄碱的最高产量分别为18.85mg/L和4.11mg/L;L-Phe对各重组菌株生物合成麻黄碱的调控作用各不相同。结论：通过L-Phe对重组酵母菌生物合成麻黄碱和伪麻黄碱调控作用的探讨,将为研究重组菌株的遗传多样性提供依据。     

生物转化产d-伪麻黄碱菌株的筛选及其关键酶基因的验证

利用GenBank和UniProt数据库比对MorganellamorganiiJ-8羰基还原酶基因和氨基酸序列,以同源性为依据,结合高效液相色谱（HPLC）检测验证,筛选出5株同样具有转化1-苯基-2-甲氨基丙酮（MAK）产d-伪麻黄碱功能的菌株。选取其中1株BacillusclauseB0658,对其d-伪麻黄碱的生物转化过程进行考察,发现在最优条件下d-伪麻黄碱产量达到128．3mg／L。进一步对B．clauseB0658的亮氨酸脱氢酶基因bcdh进行扩增,以pET28a（＋）为载体构建重组质粒并在EscherichiacoliBL21（DE3）中实现表达,通过重纽菌的生物转化实验验证该酶的催化功能。     

d-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌构建及固定化应用

d-阿洛酮糖3-差向异构酶 (d-allulose-3-epimerase) 是异构化d-果糖生成d-阿洛酮糖 (d-allulose) 的关键酶。为提高d-阿洛酮糖3-差向异构酶的热稳定性并获得可重复使用的d-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌固定化细胞,N端融合双亲短肽,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 分析,异源d-阿洛酮糖3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌中正确折叠,蛋白大小为33 kDa。40 ℃孵育48 h,SAP1-DSDPEase残余酶活仍保持在58%。固定化细胞最优条件为海藻酸钠浓度2%、二氧化钛添加量1︰4 (二氧化钛︰海藻酸钠)、氯化钙溶液浓度2%、戊二醛0.02%作为交联剂。该条件下固定化细胞酶活回收率高达82%,固定化细胞与游离细胞相比,最适反应温度不变均为80 ℃,热稳定性提高,连续10次操作使用,酶活回收率仍保留58%,机械强度仍保持100%,转化率仍保持在28.8%,残余酶活保持在70.5%。在海藻酸钠溶液中加入二氧化钛可减少固定化细胞的细胞泄露,增大了机械强度。     

苏氨酸醛缩酶的催化机理、分子改造及合成应用

苏氨酸醛缩酶催化醛和甘氨酸羟醛缩合,一步反应即可构建产物β-羟基-α-氨基酸的两个手性中心,从原子经济性和环境影响角度,是非常具有潜力的绿色合成光学纯β-羟基-α-氨基酸的方式之一。多个不同生物来源的苏氨酸醛缩酶得到分离和表征,较低的β-碳立体选择性以及反应过程中动力学和热力学控制难题,使其在合成应用中面临很大挑战。文中综述了近年来苏氨酸醛缩酶在基因挖掘、催化机理、高通量筛选与分子改造、合成应用等方面的研究进展,旨在为进一步研究提供参考。     

Morganella morganii J-8羰基不对称还原酶的分离纯化及性质研究

由本实验室筛选得到的摩尔摩根氏菌J-8菌株可将底物1-苯基-2-甲氨基丙酮专一性地转化为d-伪麻黄碱。以M. morganii J-8为出发菌株,菌体超声破碎后,经硫酸铵沉淀、Phenyl Superose疏水柱层析、DEAD阴离子柱层析和非变性凝胶电泳四步纯化获得电泳纯羰基不对称还原酶。亚基分子质量为42.5 kD,高效液相色谱分析酶的分子质量约为84.1 kD,初步认为该酶为二聚体蛋白。对所得到的部分纯化酶的酶学性质做了初步研究,纯酶进行基质辅助激光解析电离-飞行质谱分析,比对结果显示为与亮氨酸脱氢酶蛋白有很高相似性。     

A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其pHi和［Ca2+］i变化相关

以临床用药剂量(30 μmol/L)的顺铂处理敏感的人肺腺癌细胞A549和抗顺铂的A549/DDP细胞,在相同条件下培养.对培养不同时间的两株细胞DNA琼脂糖凝胶电泳分析的结果表明，前者在培养12 h后即呈现DNA梯子，而后者在培养48 h后却未见凋亡特征.用流式细胞计检测其凋亡峰也获得相似的结果.当测定与凋亡相关的生物化学和生物物理变化时发现对顺铂敏感的A549细胞的线粒体膜电势显著降低，胞内更加酸化且胞内钙离子浓度升高；而抗顺铂药物的A549/DDP细胞的线粒体膜电势和pH值却维持在相对较高的水平，而其胞内钙离子浓度随培养时间的延长下降.这些结果表明，抗顺铂的人肺腺癌A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其胞内的相对碱化和较高的线粒体膜电势,以及胞内钙离子浓度的降低相关.这些特性可能参与了A549/DDP的顺铂耐药性的调节.