特异小干扰RNA敲除PLK1基因的表达

为研究特异小干扰RNA（siRNA）作用于大肠癌细胞株SW480中PLK1 (Polo-like kinase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,western-blot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变。发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20 %以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80 ％以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好（超过95%）,PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍。72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致。结果表明化学合成的特异siRNA对SW480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW480细胞的分裂生长。     

一种贴壁培养细胞制片方法

细胞形态分析以及免疫组织化学技术中一个必不可少的操作过程,就是细胞制片,即把细胞附着于透明的支撑物上（比如：玻璃、塑料等）,大部分的细胞制片是对离体组织细胞进行固定切片处理．而对于科研、教学等基础实验室的少量培养细胞制片．则需要有更合适的技术。     

贴壁培养细胞简便染色方法

细胞染色是细胞生物学研究和应用中最为常见的一种技术．使细胞的形态和结构更加明显,可以直接观察细胞某些生物学特征的变化。不仅在医学基础研究中像细胞凋亡和肿瘤细胞株的观察方面广泛应用,而且在生物医学教学与临床检验中更是不可缺少的手段,包括基本的细胞形态观察、血液细胞分类、骨髓细胞相、以及脱离细胞等的分析方面,帮助学生提高学习,以及临床医生了解就诊者的身体状况做出正确的诊断。但细胞染色技术尚存在拓展的空间,本文结合细胞制片和细胞染色技术,对生物学基础研究中的贴壁细胞进行处理．方便了贴壁细胞的染色分析,从而丰富了这一传统技术的应用。