肠上皮细胞RNA干扰Hsp70基因转染条件的研究

旨在研究肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的特染条件,并对4对Hsp70干抚序列进行筛选,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术研究Hsp70对胃肠道的保护功能以及介导信号通路的机理打下基础.以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳高子脂质体特染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和特染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对特染效率的影响,并进一步采用RT-PCR和Western blotting方法对Hsp70干扰序列进行筛选.试验结果表明,采用脂质体转染法可获得较高的转染效率,其中以80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000组的转染效率最高(85.77％).针对4个不同靶位点,进行Hsp70基因干涉,结果表明,4个组中Hsp70 mRNA的表达显著下降,其中oligo 4组的基因表达极显著降低.Western blotting的结果表明,oligo 2、oligo3和oligo4组中的Hap70蛋白表达极显著降低.最终确定80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以oligo 4(Hap70的基因位点为3672 -3692)为最佳RNA干扰靶基因.     

S100蛋白与动脉粥样硬化研究进展

炎性细胞释放的炎症介质分子S100A8/9、S100A12与RAGE、TLR-4受体结合后诱导下游炎症因子释放,参与血管炎症、动脉粥样硬化形成。一方面,S100A12与血管平滑肌RAGE结合调节ROS生成,从而增加血管钙化;另一方面,S100A12通过RAGE募集更多的CD36至细胞表面,影响泡沫细胞氧化低密度脂蛋白的运输。异二聚体S100A8/9激活RAGE、TLR-4受体后募集更多的炎性细胞,释放更多的炎症介质分子,形成正反馈效应加速粥样硬化的进程。此外,S100A8/9及S100A12还促进血管内皮细胞的损伤及凋亡,破坏内皮细胞的完整性,从而影响动脉粥样硬化的治疗。