光动力疗法在真菌感染性疾病中的应用

随着激素、广谱抗生素和免疫抑制剂在临床上的广泛应用,真菌感染的发病率不断上升,加上真菌耐药性日趋严重,使得抗真菌药物治疗面临的挑战越来越大.光动力疗法是一种具有高度选择性的药械联动技术,越来越多的研究表明光动力疗法能有效对抗念珠菌、马拉色菌等真菌性疾病的感染,该文就光动力疗法的特点以及光动力学疗法治疗真菌感染的现状做一综述,旨在让大家对光动力抗真菌治疗有一个全面深入的了解.     

白念珠菌天冬氨酸蛋白酶基因SAP2在大肠杆菌中的表达及产物纯化

目的构建SAP 2重组原核表达载体并表达、纯化出可溶性的蛋白,为抗体制备及Sap2抗原检测奠定基础。方法提取白念珠菌基因组DNA为模板,经PCR方法获取SAP 2目的基因。双酶切SAP 2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),连接酶切产物,转化大肠杆菌TOP10感受态细菌,筛选菌落和测序鉴定。将pMAL-c2x/SAP2重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达出可溶性的融合蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析、蛋白酶Factor Xa切割标签获得纯化的Sap2蛋白。结果经PCR扩增获得正确的SAP 2序列并定向插入原核表达载体pMAL-c2x(+)中。重组原核表达载体pMAL-c2x/SAP2经IPTG诱导14 h后表达出可溶性的融合蛋白,并经纯化、切除标签后得到目的蛋白。结论成功构建了白念珠菌天冬氨酸蛋白酶原核表达质粒pMAL-c2x/SAP2,该质粒在BL21(DE3)中可获得高效融合表达,通过亲和层析纯化及标签切割得到了氨基酸序列同天然蛋白一致的目的蛋白。     

白念珠菌生物膜及其研究进展

白念珠菌生物对多种传统抗真菌药物高度耐药,日益增多的白念珠菌生物膜相关感染引起抗真菌药物治疗的失败加重了患者及社会的经济负担,这已经成为临床医生所面临的重要问题.该文旨在阐明白念珠菌生物膜的临床重要性,并从多方面阐述白念珠菌生物膜的结构特点、形成机制、防治现状的最新研究进展,为白念珠菌的研究及临床防治策略提供参考.     

真菌疫苗的研究进展

近年来,条件致病性真菌引起的真菌病发病率显著上升,临床应用的抗真菌药物疗效不佳。真菌疫苗的开发显示了良好的应用前景。由于我们对真菌及宿主的免疫应答认识有限,真菌疫苗的研制也因此受到限制。但随着对上述问题的深入探索,真菌疫苗的研究在过去几年中取得了很大的发展。现将几种常见真菌疫苗的研究进展作一综述。     

2014年英国甲真菌病管理指南解读

2014年英国甲真菌病管理指南详细地阐述了甲真菌病的流行病学、病因、分类、治疗及特殊人群的管理等方面的进展,尤其对甲念珠菌感染和霉菌感染进行更为深入的诠释,对临床工作有重要的指导意义,该文简要解读了指南精髓。     

不同光敏剂孵育时间在白念珠菌光动力抑制效应中的实验研究

目的：通过测定5?氨基酮戊酸（5?ALA）与白念珠菌菌悬液不同孵育时间生成PpIX的水平及5?氨基酮戊酸光动力疗法（5?ALA?PDT）抑菌率,为临床选择最佳孵育时间提供理论依据。方法制备白念珠菌悬液并与ALA避光孵育,设实验组和对照组。采用激光共聚焦显微镜观察PpIX产生情况,MTT法测定ALA光动力治疗对白念珠菌生长的抑制率。结果白念珠菌菌悬液与ALA避光孵育后有荧光物质PpIX产生,孵育30 min到90 min产生的PpIX最多,120 min以后PpIX开始明显减少,对照组无荧光物质出现。结论 ALA?PDT对白念珠菌抑制效应同孵育时间密切相关。这为临床ALA?PDT治疗白念珠菌疾病提供了理论依据。     

酶联免疫吸附试验夹心法检测解脲脲原体方法的建立

目的为了提高解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)检测的快速性。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测UU抗原并与传统的培养法相比较。结果ELISA夹心法敏感度为92.6%,特异度为97.4%,最低能够检测出蛋白含量为5～10ng/ml的UU抗原。结论ELISA夹心法是一种敏感、方便、快捷、适合大规模标本检测解脲脲原体的方法。     

新生隐球菌线粒体的快速抽提和电镜观察

通过NovoZym234酶溶壁和低渗机械振荡破壁相结合,应用差速离心法分离并纯化了对数生长期的新生隐球菌线粒体,然后从经DNaseI处理的线粒体制备液中分离纯化线粒体DNA;并对差速离心中所获得的菌体、原生质体、线粒体三部分沉淀进行了透射电镜观察,结果均证明了我们所抽提的DNA是纯净的,适用于酶切分析和PCR分析研究,由此成功地建立了快速有效分离和纯化线粒体DNA的方法。 Abstract:Cryptococcus neoformans may be grown to the exponential phase,are broken by a combination of NovoZym234 and mechanical means,and mitochondrial DNA was extracted from DNaseI-treated mitrochondrial preparetion by differential centrifugation.Three pellets,including yeast cell,protoplasts,mitochondrial,were examined by transmission electronic microscopy.The resulting mtDNA is sufficicently pure for restriction endonucleases analysis and PCR in further studying.A rapid and effective method for the preparation of the mtDNA of C.neoformans was established.     

不同浓度5-氨基酮戊酸对光动力方法抗白念珠菌效果的影响

目的通过测定白念珠菌内不同光敏剂浓度下生成原卟啉IX(Pp IX)的水平及5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA-PDT)对白念珠菌的抑菌率,为临床选择最佳光敏剂浓度提供理论依据。方法制备白念珠菌悬液,与ALA避光孵育,采用激光共聚焦显微镜观察Pp IX产生情况,MTT法测定5-ALA-PDT对白念珠菌生长的抑制率。结果白念珠菌与ALA避光孵育后有荧光物质Pp IX产生,ALA光敏剂浓度与Pp IX强度呈正相关,当ALA浓度到达300 mg/m L时,Pp IX强度将不再增加。对照组无荧光物质出现。结论 ALA-PDT对白念珠菌抑制效应同光敏剂浓度密切相关。这为临床ALA-PDT治疗白念珠菌疾病提供了理论依据。     

Sap2与侵袭性白念珠菌感染相关性研究进展

侵袭性白念珠菌感染的发病率近年来呈逐渐上升趋势,其发病机制复杂.分泌型天冬氨酸蛋白酶Sap2是白念珠菌生存所需的毒力因子,与白念珠菌的生存发展及致病性密切相关.通过深入研究Sap2的毒力作用和对侵袭性白念珠菌感染致病机制,可为以后抗体研制及治疗方面奠定基础.