PCR-特异探针杂交检测肿瘤组织 Ki-ras 基因点突变

用福尔马林固定-石腊包埋的人肿瘤组织切片,经脱腊处理直接用 PCR(poly-merase chain reaction)技术扩增 Ki-ras 癌基因序列中包括12,13位密码子的 DNA片段,并分别以5种含特异突变点的寡核苷酸探针代替3′端引物,经 PCR 扩增的产物作为点突变的阳性对照.用上述五种探针进行选择性斑点杂交,检测了人肺癌及结直肠癌组织的 Ki-ras 基因12及13位点突变.为了封闭杂交时的非特异结合,采用野生型冷探针与标记的含突变点的探针同时进行杂交的方法,有效地消除了杂交过程中可能产生的假阳性,而不影响真阳性反应的出现.因而增加了检测的可靠性.     

多胺生物合成的抑制对转化细胞c－Ha－ras癌基因表达的调控

抗多胺代谢剂──二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）作用于经含点突变的Ｈａ－ｒａｓ基因片段转染的转化细胞（ＨＲ－１细胞）引起细胞生长的抑制,其抑制率随ＤＦＭＯ浓度的增加而增大,此时细胞多停滞于Ｇ_１期;多胺合成的关键酶鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）活性显著下降;Ｈａ－ｒａｓ癌基因ｍＲＮＡ及ｒａｓＰ~（２１）蛋白的表达受到抑制;而外源性腐胺与ＤＦＭＯ的同时加入可防止上述一系列改变的发生,说明ＤＦＭＯ使ＨＲ－１细胞某些表型向亲本细胞逆转的作用是与细胞多胺生物合成的抑制直接相关。     

二氟甲基鸟氨酸对HL60细胞生长、分化及c-myc、c-fos基因表达的影响

多胺生物合成抑制剂——α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人早幼粒细胞白血病细胞系HL₆₀的生长及DNA合成均有剂量依赖的抑制作用。NBT反应证明DFMO能诱导HL₆₀细胞分化。核酸分子杂交实验表明,DFMO引起c-myc基因表达的减少,而c-fos基因表达水平随DFMO浓度增加明显增加。c-myc与c-fos表达的相互变化可能与DFMO对HL₆₀细胞生长、分化影响有一定关系。     

鸟氨酸脱羧酶活性微量测定法

本文采用一种简单,微量反应系统,根据 ¹⁴C-鸟氨酸释放的 ¹⁴CO₂量测定鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性,酶反应在置于液闪计数瓶内的玻璃小管中进行,释放的 ¹⁴CO₂被瓶内滤纸片上的海胺吸收。实验结果表明,加酸释放 ¹⁴CO₂后30分钟 ¹⁴CO₂吸收已达最大值,且吸收量与释放量成正比,酶反应测定证明 ¹⁴CO₂释放速度在40分钟内保持恒定。ODC活性与酶浓度呈线性关系,此方法不仅用于ODC活性测定,而且亦可用于其他脱羧酶活性的测定。     

多胺生物合成的抑制对转化细胞c—Ha—ras癌基因表达的调控

抗多胺代谢剂－－二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）作用于经含点突变的Ｈａ－ｒａｓ基因片段转染的转化细胞（ＨＲ－１细胞）引起细胞生长的抑制,其抑制率随ＤＦＭＯ浓度的增加而增大,此时细胞多停滞于Ｇ１期;多胺合成的关键酶鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）活性显著下降;Ｈａ－ｒａｓ癌基因ｍＲＮＡ及ｒａｓＰ＾２１蛋白的表达受到抑制;而外源性腐胺与ＤＦＭＯ的同时加入可防止上述一系列改变的发生,说明ＤＦＭＯ使ＨＲ－１细胞某些表型向     

暂时性脑缺血诱导c-fos原癌基因和鸟氨酸脱羧酶基因表达

应用大鼠椎动脉与颈内动脉结扎造成暂时性脑缺血再灌注以及RNA点杂交方法观察c-fos基因与鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达的动力学过程。结果表明:大鼠大脑皮质c-fos基因在再灌后0.5至3小时表达,ODC基因在6小时至14小时表达;海马的c-fos基因则自36至72小时呈现高水平表达,ODC基因表达与之相对同步或稍延后。但是暂时性脑缺血却不能诱导c-Myc基因表达。上述结果提示c-fos及ODC可能在缺血型脑损伤后具有特殊作用。文中对缺蛋再灌引起cfos-及ODC基因表达的机制进行了分析与讨论,并提出“神经元应激状态”这一概念以描述神经元对伤害性刺激的反应历程。     

致癌大鼠肝细胞内蛋白磷酸化

本实验观察到二乙基亚硝胺(DENA)致癌大鼠肝细胞液及颗粒提取液中P21及P42磷酸化都比正常肝高,增高的程度似与肝细胞癌变相关。新生一天及四天大鼠肝中P21及P42磷酸化也有增高,但再生肝中不增高。磷酸化21的磷酸根接在丝氨酸羟基,PP21不含磷酸酪氨酸或磷酸苏氨酸,或含量极微。     

二氟甲基鸟氨酸对HL_(60)细胞生长、分化及c-myc、c-fos基因表达的影响

多胺生物合成抑制剂——α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人早幼粒细胞白血病细胞系HL_(60)的生长及DNA合成均有剂量依赖的抑制作用。NBT反应证明DFMO能诱导HL_(60)细胞分化。核酸分子杂交实验表明,DFMO引起c-myc基因表达的减少,而c-fos基因表达水平随DFMO浓度增加明显增加。c-myc与c-fos表达的相互变化可能与DFMO对HL_(60)细胞生长、分化影响有一定关系。     

暂时性脑缺血诱导c-fos原癌基因和鸟氨酸脱羧酶基因表达

应用大鼠椎动脉与颈内动脉结扎造成暂时性脑缺血再灌注以及RNA点杂交方法观察c-fos基因与鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达的动力学过程。结果表明:大鼠大脑皮质c-fos基因在再灌后0.5至3小时表达,ODC基因在6小时至14小时表达;海马的c-fos基因则自36至72小时呈现高水平表达,ODC基因表达与之相对同步或稍延后。但是暂时性脑缺血却不能诱导c-Myc基因表达。上述结果提示c-fos及ODC可能在缺血型脑损伤后具有特殊作用。文中对缺蛋再灌引起cfos-及ODC基因表达的机制进行了分析与讨论,并提出“神经元应激状态”这一概念以描述神经元对伤害性刺激的反应历程。