热应激对虹鳟CRT基因和PDIA4基因mRNA表达的影响

在转录组测序研究中,筛选出了与虹鳟热应激相关的钙网蛋白基因CRT和蛋白二硫键异构酶基因PDIA4。为研究其在热应激过程的表达变化规律及应答机制,本试验以全同胞虹鳟为研究对象,通过持续升温,分别在18℃(对照组)、21℃、23℃、24℃、25℃和26℃下随机挑选3尾虹鳟,采用实时荧光定量(Real-time FQ-PCR)方法测定并分析了肝脏和头肾CRT和PDIA4 mRNA的表达变化特征。结果显示,与18℃相比,肝脏、头肾CRT表达量分别在24℃、26℃时显著上调且达到最高(19.16倍和2.76倍, p0.05);PDIA4 mRNA表达量分别在25℃、26℃显著上调且达到最高(57.45倍和188.68倍, p0.05)。肝脏CRT的表达量在24℃和25℃时显著高于头肾(10.89倍和8.46倍, p0.05),而PDIA4表达量在24℃、25℃和26℃时显著低于头肾(p0.05)。因此认为,热应激诱导虹鳟肝脏、头肾中CRT和PDIA4 mRNA的表达上调,25℃以上时,虹鳟热应激反应强烈,且对基因表达水平的影响存在组织特异性,肝脏对热刺激的反应比头肾更敏感。本研究为阐述鱼类在热应激下适应性保护机制提供指导。     

早胜牛类群A-FABP基因SNPs及其与胴体品质和肉质性状的相关性分析

研究早胜牛类群A-FABP基因多态性及其与胴体品质和肉质性状的相关性。采用PCR-SSCP方法对5个早胜牛类群(庆阳类群、平凉类群、南德温与庆阳类群杂种、西门塔尔与平凉类群杂种、秦川牛与平凉类群杂种)的A-FABP基因进行多态性分析,分析基因型与胴体品质和肉质性状的相关性。结果显示,A-FABP基因第三外显子区存在c.408GC的突变,并检测到3种基因型GG、GC和CC。胴体性状相关分析表明,GG基因型的胴体重显著低于CC基因型(P0.05);GG基因型屠宰率极显著低于GC基因型(P0.01),显著低于CC基因型(P0.05);GG基因型净肉率显著低于GC基因型(P0.05);GG基因型的眼肌面积显著低于GC和CC基因型(P0.05)。肉质性状相关分析表明,GG基因型失水率显著高于CC基因型个体(P0.05);GG基因型剪切力极显著高于GC和CC基因型(P0.01);GG基因型蒸煮损失和pH均显著高于GC基因型(P0.05),极显著高于CC基因型(P0.01)。A-FABP基因突变位点可作为胴体性状和肉质性状遗传标记。     

MT-III基因在不同海拔地区藏羊及其脑组织不同部位的差异表达研究

为了了解金属硫蛋白-3(Metallothionein-3,MT-III)基因在不同海拔地区饲养的藏羊脑组织及脑组织不同部位间的表达差异,随机选取高海拔地区(青海河南县)饲养的成年雄性藏羊6只和低海拔地区(甘肃临洮县)饲养的成年雄性藏羊3只,屠宰后分别在脑组织的颞叶、顶叶、延髓、小脑及松果体各部位取样,利用实时荧光定量PCR法研究MT-III基因在藏羊脑组织及其不同部位的相对表达量。结果显示,MT-III基因在藏羊脑组织各部均有表达,但不同部位相对表达量有差异;藏羊松果体中MT-III基因的相对表达量极显著高于其它部位(P0.01);饲养在高海拔地区藏羊的脑组织的颞叶、顶叶和延髓中,MT-III基因的相对表达量均极显著高于低海拔地区饲养的藏羊(P0.01)。MT-III是在藏羊脑组织不同部位普遍表达的一种蛋白,其在颞叶、顶叶和延髓较高的表达量可能与该区域脑细胞对低氧及高辐射的耐受性有关。     

嗜麦芽寡养单胞菌(DR-929)纤溶酶的发酵条件优化及其分离纯化

本试验研究了嗜麦芽寡养单胞菌（DR-929）纤溶酶的液体发酵条件及其分离纯化。最佳发酵条件为：可溶性淀粉2.0%,黄豆粉1.0%,酵母膏0.5%,NaCl 1.0%, CaCl2 0.02%,MgSO4 0.05%,种龄36h,发酵时间4d,初始pH 8.0或9.0,温度25℃,装样量30mL,接种量5%或6%。采用发酵液离心除菌,25%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Phenyl FF（high sub）疏水层析,Q-Sepharose FF离子交换层析,Superdex 75凝胶过滤层析对活性成分分离纯化。用SDS-PAGE电泳对纯化效果进行检验,结果表明在SDS-PAGE中得到单一条带,分子量28.3KD。最终纯化倍数和酶活回收率分别为271.5和24.5%。     

鲤和鲫线粒体(mtDNA)全基因组分析

为研究鲤(Cyprinus carpio)和鲫(Carassius auratus) mtDNA上的基因分布特征,丰富鱼类mtDNA数据库。本研究通过PCR扩增和测序,获得了鲤和鲫mtDNA基因组序列,经比对分析表明,鲤和鲫的mtDNA序列全长均为16 596 bp,共有13个蛋白质编码基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和1个D-Loop区。鲤和鲫的mtDNA序列中(A+T)百分含量分别为57.2%和57.1%,其碱基组成均具有一定的A/T碱基偏向性。N-J系统发育树分析表明,鲤和鲫与琵琶湖鮈亲缘关系最近,与达氏深水尾魟亲缘关系最远。本研究揭示了鲤和鲫mtDNA遗传变异特征及基因分布规律,为鱼类遗传资源保护及开发利用提供了参考依据。     

博落回杀灭鱼类指环虫和病原菌活性成分的研究

采用常压硅胶柱层析和RP-HPLC制备并结合杀虫、抑菌活性追踪的方法,从博落回中分离获得了杀灭金鱼指环虫和抑制鱼类病原菌的活性成分,通过TLC、UV、m.p.、IR、MS、1H NMR和13C NMR鉴定其为血根碱.杀灭指环虫试验结果表明:血根碱对指环虫有较强杀灭活性,在质量浓度为0.6 mg?L-1时的杀虫率达到100%.血根碱对6株水产致病菌的活性试验结果表明:对嗜水气单胞菌的活性最高,MIC和MBC分别为12.5和25μg·mL-1;对哈维弧菌、鳗弧菌、杀鲑气单胞菌史氏亚种的活性最弱,其MIC和MBC均分别为50和100μg·mL-1.血根碱杀灭鱼类指环虫活性较高,对6株水产病原菌都有明显抑制作用.