22种植物提取物及其6种化合物对鱼类指环虫的杀灭研究

将感染有指环虫的金鱼投放在加有一定浓度的植物提取物或化合物的水体中,控制一定的水体条件,显微镜下定期观察鱼鳃上的指环虫数量,统计杀虫率。结果表明:22种植物中蛇床提取物的杀灭指环虫效果最好,其最高杀灭率为100%;其次是两面针、木通、吴茱萸、牛心朴子,最高杀虫率均为80%;夹竹桃、徐长卿的最高杀虫率均为70%;草果、苦木、北乌头、滨蒿、蒺藜、白芷、山柰、榧的最高杀虫率在48 h内均在20%~50%;在测试浓度范围内,生姜、辣椒、仙茅、大风子、泽漆、相思子和雷丸没有明显杀虫活性。6种植物化合物作用48 h时川楝素的杀灭指环虫活性最高,最高杀灭率为100%;其次是鬼臼毒素、烟碱和槟榔碱,杀虫率在30%~50%;青蒿素和苦参碱在鱼中毒浓度下对指环虫仍然没有杀灭效果。根据以上结果,蛇床、两面针、木通、吴茱萸、牛心朴子、夹竹桃、徐长卿等植物和化合物川楝素对鱼类指环虫具有较好的杀灭作用。     

秦岭细鳞鲑耗氧率和窒息点的初步研究

对两种不同体重规格的秦岭细鳞鲑(Brachymystax lenok tsinlingensis)的耗氧率、耗氧量及窒息点进行了测定,结果表明,秦岭细鳞鲑的耗氧率随温度的升高而增加,随体重的增加而减小;耗氧量和窒息点随温度的升高和体重的增加而增加。温度在10~18℃范围内,平均体重25.15 g的秦岭细鳞鲑的平均耗氧率为1.113 mg/g.h,平均耗氧量为9.244 mg/尾.h;平均体重45.93 g的秦岭细鳞鲑平均耗氧率为0.856mg/g.h,平均耗氧量为13.104 mg/尾.h。在10~20℃温度范围内,体重15.30 g的秦岭细鳞鲑,窒息点为(1.487±0.04)mg/L,平均体重48.36 g的秦岭细鳞鲑窒息点为(1.830±0.03)mg/L。在同一适温(14℃)条件下,秦岭细鳞鲑耗氧率呈明显的昼夜变化规律,夜间耗氧率明显大于白天。     

一株青藏高原冻土溶栓菌的筛选及鉴定

【目的】心脑血管疾病是一种世界性疾病,严重危害人类健康,溶栓酶是治疗该病的有效药物之一。而极端环境中的溶栓微生物因其特殊的生存方式,可能分泌高效、安全的新型溶栓酶。因此,为了获得这种具有特殊功能的溶栓酶,我们从青藏高原高海拔冻土中进行了溶栓菌的筛选。【方法】首先,本文通过血粉-琼脂平板初步筛选具有血粉水解功能的菌株,然后对其进行体外溶栓试验以检验其人工血栓溶解功能,并用纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,最后通过生理生化试验和16S rRNA基因序列分析方法对该菌进行分类鉴定。【结果】本文从青海省玉树藏族自治州海拔4300 m的冻土样品中筛选获得了菌株DR-536,不仅具有水解血粉的功能,还具有体外溶栓功能,且能够水解纤维蛋白,纤溶活性为51.80 IU/mL(以尿激酶为标准)。最后,分类鉴定结果显示菌株DR-536是一株金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)。【结论】本文首次从青藏高原高海拔土壤中进行了溶栓菌的筛选,并获得了一株新型溶栓菌,为进一步研究和开发高效、安全的新型溶栓酶提供了菌源。     

单壁碳纳米管载锦鲤疱疹病毒ORF149核酸疫苗的构建

为了开发新型高效疫苗预防锦鲤疱疹病毒病,以单壁碳纳米管(SWCNT)作为运输载体,构建锦鲤疱疹病毒(KHV)ORF149核酸疫苗。首先构建pcDNA3.1(+)-ORF149重组质粒,通过瞬时转染和免疫印迹分析确定其表达情况,然后通过1,3-偶极环加成反应法将重组质粒与SWCNTs进行偶联,最后通过扫描电镜观察和核酸电泳鉴定其偶联是否成功。结果表明,构建的重组质粒转染细胞后经免疫印迹分析和间接免疫荧光试验均能检测到特异性信号;在核酸琼脂糖凝胶电泳中,构建的重组疫苗电泳条带消失;在场发射扫描电镜观察下,与重组质粒进行偶联的SWCNTs和空白SWCNTs形态差异明显。     

蕈状芽孢杆菌代谢产物增强小鼠免疫力活性物质的分离、鉴定

本文的目的是对蕈状芽孢杆菌代谢产物中增强小鼠免疫力的物质进行分离、鉴定和免疫增强作用测定。在生物活性追踪的指导下, 本文通过大孔吸附树脂吸附、硅胶柱分离和葡聚糖凝胶柱纯化, 对蕈状芽孢杆菌代谢产物中增强小鼠免疫力的活性成分进行了分离, 得到了具有较强免疫增强作用的化合物(标记为M), 并对化合物M进行了波谱测定, 确定化合物M为环(脯氨酸-甘氨酸)二肽(C7H10O2N2)。以生理盐水为对照, 通过腹腔注射, 对小鼠进行了SOD活性、白细胞吞噬活性、白细胞杀菌活性3个指标测定。结果显示, 在第14天时, SOD活性和白细胞吞噬活性达到了最高值, 且同对照组相比有显著提高; 在第21天时, 白细胞杀菌活性达到了最高值, 且同对照组相比有显著提高。以上结果表明, 蕈状芽孢杆菌代谢产物中的环(脯氨酸-甘氨酸)二肽能够显著增强小鼠免疫力。     

嗜麦芽寡养单胞菌(DR-929)纤溶酶的发酵条件优化及其分离纯化

本试验研究了嗜麦芽寡养单胞菌（DR-929）纤溶酶的液体发酵条件及其分离纯化。最佳发酵条件为：可溶性淀粉2.0%,黄豆粉1.0%,酵母膏0.5%,NaCl 1.0%, CaCl2 0.02%,MgSO4 0.05%,种龄36h,发酵时间4d,初始pH 8.0或9.0,温度25℃,装样量30mL,接种量5%或6%。采用发酵液离心除菌,25%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Phenyl FF（high sub）疏水层析,Q-Sepharose FF离子交换层析,Superdex 75凝胶过滤层析对活性成分分离纯化。用SDS-PAGE电泳对纯化效果进行检验,结果表明在SDS-PAGE中得到单一条带,分子量28.3KD。最终纯化倍数和酶活回收率分别为271.5和24.5%。     

鲫鱼、草鱼离体肠道利用酪氨酸和脯氨酸合成蛋白质与脂肪的研究

该试验采用同位素示踪技术和肠道离体灌流模型分别测定了鲫鱼、草鱼肠粘膜中结合在蛋白质与脂类中的酪氨酸、脯氨酸的量。结果表明：用于合成脂肪的酪氧酸和脯氯酸比例在鲫鱼和草鱼均极显著高于用于合成蛋白质的相应氨基酸比例（P〈0．01），但草鱼用于合成脂肪的酪氨酸和脯氨酸比例均显著高于鲫鱼（P〈0．05）。在酪氨酸各浓度组中鲫鱼肠道利用其合成蛋白质与脂肪的绝对量几乎都高于草鱼，但从相对量上看，鲫鱼利用酪氨酸合成蛋白质和脂肪的能力显著不如草鱼（P〈0．05）对于每一浓度组的脯氨酸，鲫鱼肠道利用其合成蛋白质的绝对量和相对量均显著高于草鱼（P〈0．05），说明鲫鱼利用脯氯酸合成蛋白质的能力显著高于草鱼；但从相对量来看，除了1．0mmol／L试验组外，鲫鱼利用脯氢酸合成脂肪的能力显著低于草鱼（P〈0．05）。     

博落回杀灭鱼类指环虫和病原菌活性成分的研究

采用常压硅胶柱层析和RP-HPLC制备并结合杀虫、抑菌活性追踪的方法,从博落回中分离获得了杀灭金鱼指环虫和抑制鱼类病原菌的活性成分,通过TLC、UV、m.p.、IR、MS、1H NMR和13C NMR鉴定其为血根碱.杀灭指环虫试验结果表明:血根碱对指环虫有较强杀灭活性,在质量浓度为0.6 mg?L-1时的杀虫率达到100%.血根碱对6株水产致病菌的活性试验结果表明:对嗜水气单胞菌的活性最高,MIC和MBC分别为12.5和25μg·mL-1;对哈维弧菌、鳗弧菌、杀鲑气单胞菌史氏亚种的活性最弱,其MIC和MBC均分别为50和100μg·mL-1.血根碱杀灭鱼类指环虫活性较高,对6株水产病原菌都有明显抑制作用.     

噬菌蛭弧菌代谢产物活性成分对小鼠免疫功能的影响

目的研究噬菌蛭弧菌代谢产物活性成分对小鼠免疫功能的影响。方法将噬菌蛭弧菌代谢产物的3种有机溶剂（石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯）提取物和提取后的剩余液体分别腹腔注射实验小鼠,分两次注射,共注射0.5 mL,注射后连续饲养28 d,每隔7 d小鼠采血检测离体白细胞吞噬活性（phagocytic activity）、吞噬细胞杀菌活性（bactericidal activity）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、血清凝集抗体效价、血红蛋白值和红细胞数的变化,以研究不同提取物对小鼠免疫功能的影响。结果石油醚提取物组和三氯甲烷提取物组小鼠血清SOD活性、血清凝集抗体效价、离体白细胞吞噬活性和吞噬细胞杀菌活性增强与对照组相比差异极显著（P〈0.01）;乙酸乙酯提取物组SOD活性和血清凝集抗体效价增强与对照组相比差异极显著（P〈0.01）,离体白细胞吞噬活性和吞噬细胞杀菌活性增强与对照组相比差异显著（P〈0.05）;石油醚提取物组的血红蛋白值（12.64 g/100 mL）和红细胞数（11.32×106/mL）最高。各项指标的峰值均出现在第7天~第21天。结论噬菌蛭弧菌代谢产物3种有机溶剂提取的活性物质具有增强小鼠免疫功能的作用。