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鲤鱼肌肉生长抑制素基因(MSTN)的克隆及其组织表达特征 总被引：5，自引：0，他引：5
肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子,对MSTN的研究将有助于促进动物生产。鲤鱼是我国的主要淡水养殖对象之一。因此,我们采用RT-PCR方法克隆了鲤鱼MSTN cDNA(No.EF551058)的部分序列,长度为921bp,编码306个氨基酸残基。鲤鱼MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和9个保守的半胱氨酸残基。多重序列比较发现其与斑马鱼GDF8有极近的亲缘关系,96.7%的氨基酸序列同源。不同组织的RT-PCR分析发现鲤鱼MSTN主要在肌肉和脑部表达,而其他所检测组织未见表达。鲤鱼MSTN不仅在肌肉生长发育中发挥作用,可能在神经系统发育中也有其作用。 相似文献
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旨在研究肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的特染条件,并对4对Hsp70干抚序列进行筛选,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术研究Hsp70对胃肠道的保护功能以及介导信号通路的机理打下基础.以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳高子脂质体特染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和特染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对特染效率的影响,并进一步采用RT-PCR和Western blotting方法对Hsp70干扰序列进行筛选.试验结果表明,采用脂质体转染法可获得较高的转染效率,其中以80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000组的转染效率最高(85.77％).针对4个不同靶位点,进行Hsp70基因干涉,结果表明,4个组中Hsp70 mRNA的表达显著下降,其中oligo 4组的基因表达极显著降低.Western blotting的结果表明,oligo 2、oligo3和oligo4组中的Hap70蛋白表达极显著降低.最终确定80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以oligo 4(Hap70的基因位点为3672 -3692)为最佳RNA干扰靶基因. 相似文献
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