扩增片段长度多态性(AFLP)——一种新的分子标记技术

ＡＦＬＰ（扩增性片段长度多态性）是一种新的ＤＮＡ分子标记。与ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ相比,ＡＦＬＰ具有在一次试验中可同时观察到大量的限制性片段的优点。本文阐述了ＡＦＬＰ的原理和方法,综述了ＡＦＬＰ目前在植物遗传育种研究中的应用进展,并对ＡＦＬＰ技术在植物遗传育种中的应用前景提出了初步设想。     

玉米酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的分子量研究

本试验利用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳分步染色法直接对玉米苗期酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶各酶带的分子量进行了比较测定。酯酶同工酶 E_1、E_2、E_3~F、E_3~S、a、b、c 各酶带的分子量分别为<20000,35200、33000、38500、29900、28500、34000道尔顿过氧化物酶同工酶 PX_4~F和 PX_4~S酶带的分子量分别为131000和149000道尔顿。根据酶带在均匀胶和梯度胶中的位置变化对各酶带的生化性质作了初步分析,发现 E_3~F和 E_3~S、PX_4~F 和 PX_4~S 在迁移率上的差异主要是分子量的差异。本文为同工酶的分子量测定提供了一个简便的方法。     

差异显示技术(DD-PCR)及其应用

高等植物在其生命活动过程中,由于基因的选择性表达,决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中,都有不同的基因起作用。因此,研究基因的选择性表达,掌握其对植物生命活动的调控,克隆新基因,是分子生物学的重要课题.1992年,Liang和Pardee[1]首次提出差异显示技术（DD－PCR）,并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRNA的优点[2],很快成为克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具c这项技术最初用于医学研究上,近年来已开始在高等植物研究中应用…     

利用SSR标记分析玉米轮回选择群体的遗传多样性

利用SSR标记技术分析了玉米基础群体DC0及其选择两轮后的群体HSC2和MSC2以及基础群体XFC0和其选择一轮后的群体XFC1的遗传多样性。结果表明：49对引物在5个玉米群体中共扩增出185个等位位点,每个SSR座位的等位基因数目为1～7个,平均为3．8个;基础群体多态性位点总数和多态性位点比例比其改良群体的略高;DC0、HSC2和MSC2 3个群体的基因平均杂合度相似,XFC0与XFC1的基因平均杂合度相似;基础群体与改良群体的平均遗传距离也相似;累加各引物扩增的基因型种类,改良群体的基因型种类偏少,但这些差异均不显著。以上结果说明轮回选择的基础群体与其改良后群体的遗传变异相似,轮回选择可以保持群体的遗传变异范围,改变群体的遗传组成,增加群体内个体间的异质性。     

转Zm13_Barnase基因玉米的获得及其花粉育性研究

5 mg·L-1 Bialaphos was determined to be the adequate concentration for selection of maize (Zea mays L.) calli on herbicide resistance after evaluating three concentrations of Bialaphos in three genotypes. The chimeric gene Zm13-Barnase was transferred into the embryogenic calli of maize by particle bombardment, and 24 normal plants were regenerated from the 32 herbicide-resistant calli obtained after six cycles of continuous selection under 5 mg·L-1 Bialaphos. PCR assay showed that 18 plants were positive for Barnase gene with a frequency of 75%. I-KI staining and pollen germination revealed that five plants were partially male-sterile. Southern blot analysis indicated integration of Barnase gene into maize genome.     

玉米线立体类质粒的克隆和鉴定

S型细胞质雄性不育玉米的线粒体类质粒S-1为一个长6.4kb的双链线状DNA分子。本文对基本上全长的S-1（只用限制内切酶PstI在两端各切掉128bp）在pUC18和pBR322两种质粒中进行了克隆得到4种杂合的质粒。限制性酶切图谱证明它们分别是S-1以不同方向克隆在两种质粒中的结果,Southern印迹杂交也证明S-1克隆在pBR322中.     

超声波介导法转化玉米愈伤组织及可育转基因植株的获得

应用超声波介导法,首次成功地将Bt毒蛋白基因导入了重要的禾谷类作物玉米,并获得了可育的转基因植株及后代.Southern分子杂交结果证明,外源基因已整合进R_0植株和R₁代的染色体组中.超声波声强和处理时间是决定超声波介导法转化效率的2个最重要的参数,以 0.5W/cm²的声强、30min处理的转化效果最佳,最高相对转化频率达到13.3%.适当参数的超声波处理能使细胞表面形成大量的小孔,又减少了外源DNA分子的断裂,从而使外源DNA分子进入细胞.     

一个与玉米基因表达沉默有关的cDNA片段的克隆及序列分析

利用cDNA-AFLP技术分离了一个与玉米基因表达沉默有关的cDNA片段,Northern杂交分析表明,该基因在Mo17的苗期和雄穗生长锥伸长期都表达,但在Mo17与其亲缘关系较近的另一亲本杂交的F1代中却表现沉默,即表现单亲沉默。同源性分析表明,该克隆片段与GenBank中玉米通用调控因子(GRF)部分区段有98．6％的同源性,与玉米通用调控因子编码的mRNA部分序列有83％的同源性。以上结果表明,基因沉默可能是亲本GRF在F     

植物抗渗透胁迫基因工程研究进展

植物抗渗透胁迫基因工程研究进展刘岩１彭学贤２谢友菊１戴景瑞１（中国农业大学植物科技学院北京１０００９４）（中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京１０００８０）２土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的一个重要因素。据统计,全世界的盐土约占陆地面积的三分之一（Ｅｐｓｔｅｉｎｅｔ．１９８３）。我国大约有一亿亩盐碱地,且有逐年增加的趋势。另外,每年由于干旱将使全球粮食产量降低１０－２０％。工...     

玉米杂种与亲本穗分化期功能叶基因差异表达与杂种优势

为探讨玉米杂种优势的分子机理,以10个玉米自交系及其组配的38个杂交种为材料,利用cDNA-AFLP技术,分析杂种与亲本在玉米雌穗小穗分化期功能叶片的基因差异表达类型与主要农艺性状的杂种表现及杂种优势的关系。研究表明：（1）杂种的基因相对于其双亲,存在质和量的表达差异,其中质的差异表达类型包括：单亲沉默表达,双亲沉默表达,亲本显性表达和杂种特异表达等类型。（2）在雌穗小穗分化期,同一差异表达类型中不同杂交组合间差异很大;从总体平均看,杂种特异表达类型占25.22%,亲本显性表达类型占21.46%,双亲沉默表达类型占8.27%,单亲沉默表达类型占33.49%。（3）单亲沉默表达与株高的杂种表现呈显著正相关;双亲沉默表达与穗粗的杂种优势呈显著负相关,显性表达与行粒数和单株粒重的杂种优势呈显著负相关,其余表达类型与所有农艺性状杂种表现及杂种优势均不相关,并对结果进行了讨论。