酶联免疫破伤风抗体定量试剂的研制及应用

制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定。以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统。定量反应曲线显示,抗体浓度在10~120m IU/m l之间,相关系数r=0.9993。精密度(CV)≤7%。实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01 IU/m l)的比例只占12.2%。经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01 IU/m l,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%。结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量。     

哺乳动物细胞高效表达载体的优化

目的:优化哺乳动物细胞表达系统,提高目的基因的表达效率。方法:以组织型纤溶酶原激活剂(tPA)为报告基因,利用本实验室建立的CHOfrt/dhfr-细胞定点整合表达系统,对多种表达调控元件(包括hCMV和hEF-1α启动子、hCMV增强子、hEF-1α1st内含子及翻译增强子H213和V163等)及其多种组合的表达效率进行了系统的比较和评价。结果:hCMV启动子与H213组合以及hEF-1α启动子与V163组合的表达效率分别是仅含hCMV启动子的156.6%和139.5%。结论:该研究为构建高效的哺乳动物细胞表达载体奠定了基础。     

麦芽糖诱导梯度强度启动子的定向进化改造

不同灵敏度与响应强度的启动子在基因表达调控与代谢工程改造中应用广泛。为筛选不同诱导表达强度的启动子元件,本研究以麦芽糖诱导启动子Pglvc为对象,通过易错PCR方法对麦芽糖诱导型启动子进行突变获得启动子突变体库,然后基于四环素筛选的细胞生长偶联方法对突变体进行高效筛选,获得了不同响应范围和强度的启动子突变体,最终得到的诱导型启动子突变体(MT2、MT3、MT4、MT6)对麦芽糖诱导剂的响应范围从0–3 g/L扩展至0–15 g/L,其中最高诱导表达强度菌株(MT8)较原始启动子菌株的绿色荧光蛋白表达水平提高约3.15倍,有利于进一步拓展梯度强度启动子在枯草芽孢杆菌代谢工程和合成生物学中的应用。     

晚期胃癌患者化疗中胸腺肽α1治疗疗效的临床研究

目的：探讨应用流式细胞仪（FCM）检测胃癌患者外周血免疫指标,以评价胸腺肽α1联合化疗对胃癌患者免疫功能的影响。方法：70例胃癌患者随机分为用药组和对照组。用药组35例采用胸腺肽α1＋化疗,对照组35例单用化疗,两组化疗方案相同。胸腺肽α1每次1.6mg,每周2次,连续4周（共8针）。28天为一疗程,共用2个疗程。采用FCM检测两组患者化疗前后外周血CD4、CD8、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋免疫指标。结果：用药组CD4、CD8、CD3＋CD4＋、CD4/CD8均高于化疗前和对照组化疗后水平,均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：胸腺肽α1配合化疗能提高患者的免疫功能,用FCM检测外周血免疫指标为临床观察肿瘤患者的免疫状态提供有效的依据。     

新辅助化疗后腋窝病理完全缓解乳腺癌的预后分析

摘要 目的：研究乳腺癌患者新辅助化疗（NAC）后达到腋窝淋巴结病理完全缓解（pathologic complete response of axillary,apCR）的远期生存以及影响远期生存的相关因素分析。方法：回顾性分析哈尔滨医科大学附属肿瘤医院乳腺外科624例乳腺癌患者的住院资料,采用Kaplan-Meier生存分析以及COX回归分析的统计学分析方法,分析乳腺癌患者新辅助化疗后腋窝状态与无病生存（DFS）和总生存（OS）的关系及影响apCR预后的因素。结果：apCR与非apCR患者比较DFS（P=0.013）和OS（P=0.037）差异具有统计学意义,apCR患者的预后与年龄、肿瘤大小、肿瘤受体状态、HER-2、ki67状态、分子分型等因素无相关性。结论：与非apCR患者相比,乳腺癌患者新辅助化疗后apCR患者预后更好,但apCR患者预后良好的因素仍需进一步临床试验分析。     

酶解大豆蛋白产天冬氨酸蛋白酶抑制剂的研究

本文通过采用可控酶解的方式酶解大豆蛋白获得了一种源自大豆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂SAPI( soy aspartic proteinase inhibitor).酶解液经过DEAE-52阴离子交换层析、Superdex Peptide 10/300 GL凝胶层析、SOURCE 15RPC反相层析分离后最终比抑制活力为254.2 IU/mg,纯化倍数为62.SAPI对胃蛋白酶(3000U)半数抑制浓度IC50为25.67 μg/mL,有良好的热稳定性,属于一种非竞争性抑制剂.     

高耐酸酒酒球菌常压室温等离子体诱变选育及其苹果酸-乳酸发酵研究

【目的】为选育出高度耐酸性酒酒球菌（Oenococcus oeni）突变菌株,研究其胁迫耐受性能及苹果酸-乳酸发酵（malolactic fermentation,MLF）能力。【方法】以酒酒球菌SD-2a为出发菌株,通过常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma,ARTP）诱变技术,筛选高耐酸性酒酒球菌突变菌株,并探究其乙醇耐受性及在模拟酒和葡萄酒条件下的MLF能力。【结果】经过ARTP诱变处理后,利用pH 3.0的胁迫传代培养和分离纯化等,获得了5株β-葡萄糖苷酶活性较好的耐酸突变菌株,且在高乙醇浓度下表现出了较好的耐乙醇性。其中突变菌株ARTP-2在模拟酒中的β-葡萄糖苷酶活性和l-苹果酸累积降解量最高,且其在葡萄酒中l-苹果酸降解速率快于出发菌株,在第18天完成MLF,发酵后的葡萄酒香气成分的含量显著高于接种SD-2a的酒样。【结论】突变菌株ARTP-2具有良好的胁迫耐受性和MLF能力,对葡萄酒的香气起到积极的作用,为进一步开发优质的MLF商业发酵剂奠定基础。     

新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因分型

目的了解我院新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及基因型特点。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证方法,对分离自广东省妇儿医院新生儿科病房的50株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测。应用PCR法分别扩增产酶菌的TEM、SHV和CTX-M基因,并进行DNA测序及分型。结果50株细菌中,检出ESBLs阳性菌22株,检出率为44%,其中大肠埃希菌5株,肺炎克雷伯菌17株。5株大肠埃希菌中,3株同时检出CTX-M-14和TEM-1,1株检出CTX-M-14,1株3种基因均未检出。17株肺炎克雷伯菌中7株同时检出CTX-M-14型和SHV-12,9株只检出SHV-12,1株只检出CTX-M-14。结论SHV-12型ESBLs是新生儿科病房最常见的ESBLs,其次为CTX-M-14。     

从乙肝疫苗的制备看疫苗纯化技术的发展

疫苗在疾病预防中的地位日益重要,对疫苗质量的要求也日益提高。近年来,在传统和新型疫苗的制备中,应用先进的分离纯化技术是提高疫苗效力降低副反应的有效手段。回顾不同时期乙肝疫苗的纯化方法,概述当今疫苗纯化技术的应用及发展。     

合成生物学在食品领域的应用

合成生物学作为一门交叉学科,通过设计和组装生物原件,从而制造出新的生物系统。合成生物学技术在食品质量安全以及食品废物处理等问题中的应用,将进一步推动食品行业的持续创新,为食品行业的发展提供新的思路和活力。本文回顾了工程化生物合成体系和基因编辑技术的发展,阐释了合成生物学技术在食品行业中应用的可行性,重点介绍了合成生物学技术在改善食品营养风味、高效处理食品废物、生产可降解包装材料及检测食品质量等中的应用,展望了合成生物学面向食品生产的应用前景和挑战,并对合成生物学的实际应用提出了建议。