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目的:探讨下丘脑室旁核(pareventricular,PVN)注射胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体拮抗剂Exendin(9-39)后胃组织核组蛋白2(NUCB2)/nesfatin-1表达的影响。方法:选取48只雄性Wistar大鼠,随机分为6组,生理盐水组,四种不同剂量GLP-1组(0.003 nmol/10μL,0.03 nmol/10μL,0.3 nmol/10μL,3 nmol/10μL),30 nmol Exendin(9-39)+3 nmol GLP-1(E+G)组,每组8只。PVN区埋置套管并按每组要求分别经套管给予GLP-1及Exendin(9-39)等药物。给药2小时后处死大鼠并取胃组织,实时荧光定量RT-PCR法检测各组胃组织NUCB2 m RNA表达。另外生理盐水组,3 nmo L GLP-1组及E+G组每组分别随机取6只大鼠的部分胃组织,用免疫组织化学法测胃粘膜NUCB2/nesfatin-1蛋白的表达情况。结果:实时荧光定量RT-PCR法发现3 nmo L GLP-1组大鼠胃组织NUCB2 m RNA表达量高于生理盐水组,差异有统计学意义(P0.05),而其余各组大鼠胃组织NUCB2 m RNA表达与生理盐水组比较无统计学差异(P0.05)。免疫组化结果显示3 nmo L GLP-1组胃粘膜NUCB2/nesfatin-1蛋白表达与生理盐水组、E+G组比较有统计学差异(P0.05),生理盐水组大鼠胃粘膜NUCB2/nesfatin-1蛋白表达与E+G组比较无明显差异(P0.05)。结论:PVN注射GLP-1能够促进胃组织NUCB2/nesfatin-1的表达,这一作用可能是通过激活GLP-1受体来完成的。 相似文献
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核糖核酸酶barnase基因的克隆策略研究 总被引:1,自引:0,他引:1
比较了目前报道的两种克隆barnase基因的方法——barnase基因的单独克隆和barnase抑制剂基因保护下的barnase基因克隆。分别利用4种质粒进行barnase基因的单独克隆时,得到的阳性克隆数量少。对其中15个阳性克隆进行了测序分析,结果有5个克降出现碱基缺失,1个克隆出现碱基增加,其余9个克隆则出现氨基酸突变,均未得到氨基酸序列完正确的克隆。进一步分析表明这些突变的位点大多直接与保持barnase蛋白的活性位点相关。而在克隆barnase基因之前,预先将barnase基因连同其自身启动了加载于待克隆载体上,随后再进行barnase基因克隆时则容易得到与报道的barnase基因序列完全一致的阳性克隆。分析认为由于barnase基因单独存在时有一定数世的蛋白表达,宿主菌大肠杆菌无法忍受而通过某种方式造成其barnase发生相应突变而无法实现barnase基因的单独克隆。因此有必要利用barnase基因的保护来进行barnase基因相应的克降和遗传操作。 相似文献
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结球甘蓝抗TuMV相关基因的克隆 总被引:14,自引:0,他引:14
以结球甘蓝高抗TuMV自交不亲和系84075为材料,构建了cDNA文库。根据抗病基因保守序列(NBS-LRR)设计一对简并引物,以84075的基因组DNA和cDNA为模板,进行PCR扩增,分别扩增出一条513bp片段,扩增片段进行克隆测序。选取两个与抗病基因同源性较高的克隆片段作探针(命名Borl,Bor2),对构建的cDNA文库进行筛选,得到一个阳性克隆(命名TuR2),测序及序列分析表明,该基因总长为762bp,编码226个氨基酸、包含681bp的开放阅读框。与已克隆的抗病基因有不同程度的同源性。利用TuR2作探针,进行了Southern杂交、Northern杂交以及抗病性的共分离检测分析。结果表明,TuR2可能吧单拷贝形式存在,其表达是组成成型的,且无组织特异性;初步确定是一个与结球甘蓝抗TuMV相关的基因。 相似文献
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生长素结合蛋白cDNA的克隆及其在黄瓜中的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
利用RT_PCR方法从拟南芥 (Arabidopsisthaliana (L .)Heynh .)中克隆了生长素结合蛋白 (auxinbindingprotein 1 )cDNA ,进行了全序列测定。将该基因克隆在pBI1 2 1的 35S启动子和Nos终止子之间 ,得到植物表达载体p35EZ。通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导的方法转化黄瓜 (CucumissativusL .)。对转基因植株进行了PCR和Southern检测。所得到的转基因黄瓜植株单性结实能力增强。 相似文献
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