一种简单快速的聚丙烯酰胺凝胶电泳染色法——铜染色法

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)作为分离鉴定生物大分子的有效手段已广泛用于分子生物学和医学临床工作,迄今为止,用于该技术的染色法多沿用考马斯亮蓝(CBB)和银染色。但上述两法均有其局限性,如蛋白凝胶染色前须经酸醛固定,不易洗脱且操作繁琐,脱色耗时。最近,Lee等报道一种SDS-PAGE负染色法,利用氯化铜分别与凝胶中     

人骨髓造血干细胞体外培养中的动态变化

本文报告100多批人的骨髓细胞长期体外培养的实验结果。在首次接种骨髓细胞建立起贴壁层细胞基础上,再将另一个体的骨髓细胞接种在贴壁细胞层上面,这样就可使骨髓中的造血干细胞在贴壁细胞层上增殖和分化,维持较长时间。人类多向性造血干纽胞(CFU-S)目前尚无测定的方法,但由CFU-S分化出来的粒系祖细胞(CFU-C)和红系祖细胞(CFU-E)是有方法可以测定的,从此获得的结果表明,在体外培养条件下,CFU-C可存活9周,CFU-E可存活4.5周。在培养悬液细胞中,形态上可以识别的主要有粒细胞,其存在时间与CFU-C大致相同,而红系细胞仅在3周内可以见到,成熟淋巴细胞最多能存活5周,以后就不复存在了。在培养7周内,每个培养瓶中平均悬液细胞数是增加的。从干细胞自杀实验证明,CFU-C至少在6周内不断地有一部分细胞进入DNA合成期。在整个培养期间,各系统的造血祖细胞及其后代细胞,它们的存活时间虽有差别,但均保持着正常的生物活性。7周以后,培养体系中的细胞总数就逐渐减少,到了9周后因为造血干细胞业已消失,所以各种成熟的或未成熟的血细胞也就逐渐不见了。在骨髓细胞培养液中还存在着CSF,其浓度随着CFU-C总数的下降而平行地降低,提示在体外培养体系中可能存在对造血干细胞活动的调节因子。此外,也观察了培养瓶中悬液细胞与贴壁细胞间的相互关系及其某些造血特征。     

人骨髓体外培养中贴壁细胞层的形态分析

骨髓细胞体外培养是为体外造血研究建立一个模型。根据近年来国外学者研究小鼠骨髓细胞培养,和我们自己对人骨髓细胞培养的经验,认为初步建立起贴壁细胞层是很重要的。因为体内造血器官中由间质组成的造血微环境,是造血干细胞生存和活动的基地。在体外培养研究中,贴壁细胞层的形成能在一定程度上起到体内造血微环境的作用。贴壁细胞层的主要成分是由成纤维细胞、巨噬细胞、上皮样细胞、脂肪细胞以及未分化细胞和少数分类不明的细胞组成。从数量上看,成纤维细胞和巨噬细胞占多数;在组织结构上是以成纤维细胞为支架,把各种细胞连接融合在一起,形成重叠的细胞层。依赖这种贴壁细胞层作为体外造血的“微环境”,可使造血干细胞存活较长时间,尤其对粒系统的增殖和分化更为适宜。贴壁细胞层除了在结构上有利于造血干细胞的生存外,其中巨噬细胞可能产生某些活性物质,调节造血干细胞的活动。     

人血PMN呼吸爆发中活性氧测定的探讨——化学发光法

本文利用辣根过氧化物酶作为生理pH条件下PMN-鲁米诺化学发光催化系统。借以提高测定活细胞发光灵敏度。选用不同自由基清除剂对爆发反应中活性氧的生成影响进行了初步探讨。超氧化物歧化酶对细胞发光抑制较过氧化氢酶显著,Con A诱导的发光亦较其他刺激物为低,提示超氧化物阴离子系细胞爆发反应中含量水平较高,且对发光影响较大的活性氧。     

造血干细胞体外培养研究的进展

在中国生理科学会1981年生理学学术会议的大会和分组会上做的专题学术报告有16篇,本刊先选载以下3篇,其它各篇将陆续发表。     

ATP生物发光分析测量瘤细胞药物敏感性

基于细胞ATP水平与细胞存活率成正相关,采用生物发光技术分析瘤细胞经药物作用后胞内ATP水平,可反映药物对细胞的毒性程度,且具有简单灵敏,快速定量的特点。     

抗体包被瘤细胞膜引发人血多形核白细胞化学发光

用抗体包被K562细胞膜碎片(Ab-M)刺激人血多形核白细胞(PMN)产生化学发光,对其发光动力学及活性氧代谢特征进行了比较,结果表明Ab-M引发PMN发光动力学与酵母多糖不同.用秋水仙碱干扰PMN膜结构完整性可抑制其发光产额,Ca²⁺可促增PMN发光,提示PMN氧代谢的调控与Fc受体和Ca²⁺动员有关;活性氧系PMN实施细胞毒效应的重要物质.     

人骨髓细胞在扩散盒血浆凝块培养中增殖和分化的特点

人骨髓细胞在体内扩散盒血浆凝块培养条件下可生成以红系细胞团(CFU-E,BFU-E)为主,伴有其它各种类型细胞团(CFU-MIX,CFU-C,CFU-m,CFU-Eo)分化的模式。培养8—10天后,CFU-E 和 CFU-C 的生成数量分别与种入的骨髓有核细胞数呈正比关系;培养8—16天期间,出现粒系与红系混合型细胞团,这种混合型细胞团可能起源于多向性造血千细胞。在多次培养中也出现嗜酸细胞团,但产生这种细胞团的机遇并不恒定。对于扩散盒血浆凝块培养系统产生多样细胞团及其意义,进行了全面分析与讨论。     

血小板生成素诱导胎肝CD34~ 造血干/祖细胞增殖分化与周期蛋白表达的关系

为了解胚胎时期巨核细胞增殖分化特有的内在机制 ,本研究观察了在体外培养体系中 ,胎肝源CD3 4 造血干 /祖细胞在血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)作用下增殖分化特征与相关周期蛋白B1、D1和D3表达及细胞内水平变化的关系。结果发现 :( 1)经 12d培养后 ,TPO使胎肝源CD3 4 细胞数从 1× 0 5个细胞 /ml增加到 13 12± 4 0 6× 10 5个细胞 /ml,CD4 1 细胞增加到了 95 % ,CD3 4 细胞下降到了 3 % ,大部分细胞的DNA倍性为 2N ,少数为 4N ,无大于 4N巨核细胞 ,TPO对MegaCultTm C胶原半固体培养体系中胎肝源CD3 4 细胞形成CFU Mk集落产率的影响呈明显的剂量效应关系 ;( 2 )在整个培养期间 ,周期蛋白B1表达逐渐增加 ,并保持在一个高水平上 ,培养后期 ,高水平的周期蛋白B1出现在G1期细胞上 ;( 3 )周期蛋白D1和D3表达先增加 ,培养后期细胞内水平下降 ,且以G2期细胞为主。该结果提示 :( 1)TPO通过上调周期蛋白B1和在所有细胞周期时限上调周期蛋白D1和D3表达 ,促进巨核细胞祖细胞的增殖分化 ;( 2 )周期蛋白B1在G2 M期的持续高水平和周期蛋白D1和D3在G2 M期的水平下降 ,可能导致胎肝源巨核细胞核内有丝分裂延迟或阻滞。     

一种快速微量蛋白测定法

以往报道Lowry法的呈色反应通常须30min。本文介绍一种利用人工还原剂促使该反应迅速完成的改良法。笔者对这一方法进行了实验评价,初步探讨了二硫苏糖醇还原Folin试剂所形成的吸收光谱以及选用650um波长的机理。实验结果证明本法与对照法相关良好。