芪丹通脉片对大鼠慢性脑缺血损伤大鼠学习记忆的影响

目的:研究芪丹通脉片对慢性脑缺血所致学习记忆障碍的治疗作用及其可能机制。方法:采用双侧颈动脉结扎方法复制慢性脑缺血模型。将健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、假手术组、芪丹通脉片低剂量组、芪丹通脉片中剂量组、芪丹通脉片高剂量组、阳性对照尼莫地平组,应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元形态学改变。结果:与对照组比较,模型组大鼠可见显著学习记忆障碍,并可见海马神经元呈现出典型的神经病理性改变,海马区神经细胞数量减少、固缩等改变。芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆能力,并减其轻海马神经元损伤,且有显著剂量依赖性。结论:本实验证实芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆障碍,其可能机制是通过减轻海马损伤来改善学习记忆能力。     

新型抗凝血药物的研究进展

当前临床上主要的抗凝血药物如肝素、华法林及重组水蛭素等存在出血,需要实验室监测,药物半衰期短等不足。以pegmusirudin、HD1-22、flovagatran、otamixaban、RB-006、EP217609等为代表的新型抗凝血药物克服了现有抗凝剂的诸多不足,为抗凝和溶栓治疗提供了更多选择。本文就相关研究及进展进行综述。     

芪丹通脉片对大鼠慢性脑缺血损伤大鼠学习记忆的影响

目的:研究芪丹通脉片对慢性脑缺血所致学习记忆障碍的治疗作用及其可能机制.方法:采用双侧颈动脉结扎方法复制慢性脑缺血模型.将健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、假手术组、芪丹通脉片低剂量组、芪丹通脉片中剂量组、芪丹通脉片高剂量组、阳性对照尼莫地平组,应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元形态学改变.结果:与对照组比较,模型组大鼠可见显著学习记忆障碍,并可见海马神经元呈现出典型的神经病理性改变,海马区神经细胞数量减少、固缩等改变.芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆能力,并减其轻海马神经元损伤,且有显著剂量依赖性.结论:本实验证实芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆障碍,其可能机制是通过减轻海马损伤来改善学习记忆能力.     

适配子纤维蛋白靶向性验证及其抗凝活性测定

目的:验证适配子G81的纤维蛋白靶向性,评估适配子对凝血系统的影响。方法:以复钙法制备鼠源、人源体外纤维蛋白,将不同浓度Cy5.5标记的适配子溶液与之孵育,置于激光共聚焦显微镜下以固定的参数成像,用ImageJ软件进行相对荧光强度分析;将适配子G81溶液加入血浆中,通过倍比稀释法得到含浓度梯度适配子的血浆,采用SYSMEX CS-5100全自动血凝仪检测PT、APTT、TT,评估适配子G81对凝血功能的影响。结果:激光共聚焦显微镜显示适配子能与纤维蛋白结合,随着加入适配子量的增加其相对荧光强度逐渐增强,表明适配子可与纤维蛋白结合,统计分析提示荧光强度与适配子存在量效关系;人源、鼠源纤维蛋白结合的荧光强度无统计学差异(P0.05)。在抗凝活性检测中,血浆中适配子G81浓度达到200 pmoL/mL时,各浓度统计分析结果均显示P0.05,表明适配子对PT、APTT、TT的测量均没有统计学差异上的影响。结论:适配子G81具有纤维蛋白靶向性,且当加入的适配子剂量低于200 pmol/mL时对内、外源性凝血功能、凝血酶时间均无明显影响。     

水蛭素融合蛋白的表达及其与靶向适配子的偶联

目的:优化表达并纯化水蛭素融合蛋白SA-H-RGD,检测其生物学活性,获得能够与生物素标记的纤维蛋白适配子G81-2结合的偶联物。方法:将序列正确的质粒p ET-44b-SA-H-RGD进行原核表达,采用不同浓度的IPTG及时间优化融合蛋白表达条件,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western-blot鉴定蛋白。通过凝血酶原时间(PT)和抗血小板聚集实验检测融合蛋白活性;之后按照生物素-G81-2:SA-H-RGD摩尔比为4:1的比例制备纤维蛋白特异性的偶联物,用凝胶迁移阻滞实验(EMSA)验证二者的偶联。结果:融合蛋白SA-H-RGD在IPTG 0.9 mmol/L、5 h时在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,纯化的融合蛋白具有延长PT的作用和抑制血小板聚集的活性,EMSA表明SA-H-RGD具有结合生物素标记的G81-2适配子的功能。结论:本研究成功地优化表达了具有抗凝血和抗血小板聚集功能的融合蛋白SA-H-RGD,获得了水蛭素融合蛋白与生物素-G81-2适配子组成的靶向偶联物。