用单细胞凝胶电泳技术检测粉纹夜蛾5BI细胞DNA损伤的研究

为了探测昆虫细胞的DNA损伤,本实验应用单细胞凝胶电泳技术,对不同剂量的过氧化氢和甲醛引起的粉纹夜蛾5BI细胞DNA损伤效应进行了研究,结果表明59μM=10μM、150μM的过氧化氢能引起粉纹夜蛾5BI细胞的DNA断裂,且断裂程度和浓度水平之间成正相关关系;10μM、30μM、50μM的甲醛能引起粉纹夜蛾5BI细胞DNA损伤,其中在10μM时引起DNA断裂,在30μM、50μM时引起DNA交联。     

甲醛对DNA损伤的彗星实验研究

甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实,甲醛可以引起DNA-DNA、DNA-蛋白质分子交联,但对于甲醛是否能够引起DNA 分子的断裂,学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞作为实验材料,通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是DNA 分子断裂作用进行了系统的研究。结果显示甲醛在较低浓度(5μmol/L,7.5μmol/L,10μmol/L)时具有断裂作用,在较高浓度(15μmol/L,30μmol/L,50μmol/L)时则具有交联作用。根据本实验的结果,本文还首次论证了甲醛断裂作用的断裂峰值(7.5μmol/L)。     

超高含量的α-酮戊二酸和谷胱甘肽促成HeLa细胞耐受纳米银

纳米银（silver nanoparticles，AgNPs）兼有优良的抗菌和抗癌作用，但病原体或癌细胞对其的耐受作用将影响其临床应用，前者耐受纳米银已见报道。本研究以HeLa细胞为模型，探讨癌细胞耐受纳米银的可能性及耐受机制。将HeLa细胞代谢物与纳米银混合后测定其抗菌活性和细胞毒性变化，并用紫外-可见（ultraviolet visible，UV-Vis）分光光度计、粒度仪和透射电镜等检测混合体系中纳米银的理化特征。用非靶向代谢组学分析纳米银结合的代谢物种类，经腹腔注射HeLa细胞建立荷瘤小鼠，并分析血清对纳米银稳定性的影响。结果表明HeLa细胞代谢物可抑制纳米银的抗癌和抗菌作用，这种抑制作用表现出剂量依赖性，对纳米银生物学活性产生抑制作用的效应代谢物耐热、不溶于氯仿、含硫元素，分子量小于1 kDa。抑制作用的实质是使纳米银发生了聚集，筛选得到有115种代谢物能结合纳米银。进一步探究发现仅当α-酮戊二酸（α-ketoglutarate，AKG）和谷胱甘肽（glutathione，GSH）的浓度共同达到一定阈值才导致纳米银聚集，而HeLa细胞代谢物中两者的浓度分别是正常宫颈上皮细胞的10倍和6倍，达到了该阈值。动物实验结果显示荷瘤小鼠血清导致纳米银聚集率显著高于健康鼠血清（P<0.05）。本研究揭示HeLa细胞中具有超常含量的α-酮戊二酸和谷胱甘肽，两者协同破坏纳米银的胶体稳定性，从而实现逃逸纳米银的抗癌作用。