G2期阻滞的分子机制及其在降低肿瘤细胞放射性抵抗中的应用

肿瘤放射治疗目前已经成为治疗肿瘤的有效手段之一,但是肿瘤细胞容易产生放射抵抗性.了解细胞在放射线照射后的应答机制对找到正确的方法提高肿瘤的放射敏感性有着重要意义.该文介绍了离子辐射后引起细胞周期阻滞的分子机制,并简要介绍近年来提高肿瘤细胞放疗敏感性的一些新进展.     

CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究

目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。     

新生猪胰岛保存运输的实验研究

探索新生猪胰岛较长时间有效保存运输的方法,使不同胰岛应用单位间分享胰岛资源成为可能.用胶原酶消化、分离得到新生猪胰岛,培养5 d后收集,将所得胰岛置于自行设计制作的保存运输系统内,分别于置入后2、4、5、7 h,分次取出胰岛进行双硫腙(DTZ)染色、吖啶橙荧光染色、体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,确定胰岛细胞的功能和活性,并使用流式细胞仪检测凋亡情况.使用本研究的保存运输方法,在5 h以内,胰岛的功能和活性无明显受损,超过5 h,胰岛明显凋亡,功能、活性显著降低.在脱离培养箱环境情况下,本方法5 h内可以有效保存胰岛.     

体外扩增后脐血来源Treg细胞的有效性及安全性研究

通过检测扩增后调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的有效性和安全性,研究脐血来源的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的临床运用前景。实验中,新鲜分离的Treg细胞通过CD3/CD28抗体包被微磁珠进行体外扩增,以检测脐血来源Treg细胞的体外增殖能力,同时利用流式细胞术检测新鲜分离的Treg细胞与扩增后细胞的表型。随后,采用混合淋巴实验(mixed lymphocyte reaction,MLR)检测Treg细胞的功能,利用刺激实验检测扩增后Treg细胞的免疫原性,并且利用NOD-Prkdc~(scid)IL2rg~(null)免疫缺陷小鼠进行体内安全性检测。结果显示,4周后脐血来源的Treg细胞能够扩增到1 000倍以上,与新鲜分离的Treg细胞相比,扩增后的细胞CD45RA表达降低,CD45RO和CD39表达升高;同时,MLR结果显示扩增后的Treg细胞具有较强的抑制能力,并且免疫原性低;此外,体内结果显示扩增后的Treg细胞不会引起移植物抗宿主反应。实验结果初步表明,脐血来源体外扩增后的Treg细胞不仅在数量和功能上能够满足临床移植的需要,并且免疫原性低安全性高。